用DNA指纹技术研究Zmu-1:DHP豚鼠的群体遗传结构

为了鉴定Zm u-1∶DHP新品系豚鼠的遗传组成,试验以Jeffreys 33.6和33.15探针,分别与Zm u-1∶DHP和DHP 2个品系豚鼠基因组DNA的H in fⅠ和H aeⅢ酶切限制性片段进行Sou thern杂交,绘制豚鼠DNA指纹图,分析豚鼠基因组DNA限制性片段长度的多态性。结果显示,33.6探针与H in fⅠ酶组合应用,多态性程度较高,制图效果好;Zm u-1∶DHP豚鼠的DNA指纹图中,在6 kb和9 kb标记点出现特征性基因序列片段;Zm u-1∶DHP品系内的相似系数Fm=0.834±0.066,显著高于DHP品系内的Fm=0.653±0.158,也高于2个品系的Fm=0.670±0.115;Zm u-1∶DHP豚鼠2随机个体间遗传组成完全相同的机率Fmn=1.07×10-2,高于DHP豚鼠的Fmn=8.474×10-5。表明该方法用于豚鼠遗传质量检测和品系鉴定是可行的。Zm u-1∶DHP和DHP豚鼠都属远交系动物,但前者的遗传基因纯合性显著高于后者,结合性状可以看出,Zm u-1∶DHP豚鼠遗传分化形成了新的品系。

Zmu-1:DHP豚鼠部分生物学特性研究

为积累Zmu-1:DHP豚鼠的生物学特性资料,本研究使用肥大细胞抗原攻击、补体溶血CH50、流式细胞仪及病毒感染方法,测定了豚鼠致敏肥大细胞对抗原的敏感性、血清总补体的活性、血液多形核白细胞的吞噬和呼吸爆发功能及对口蹄疫病毒的敏感性。结果显示,Zmu-1:DHP豚鼠致敏肥大细胞的脱颗粒反应明显低于其它品系(P<0.01),血清补体含量大于其它品系(P<0.01),多形核白细胞的吞噬功能高于其它品系(P<0.05),而呼吸爆发功能低于其它品系(P<0.01),对口蹄疫病毒呈现100%的敏感性。表明Zmu-1:DHP豚鼠的生物学特征已不同于其它品系,形成独特的遗传组成和生物学性状,具有较高的应用优势及推广价值。

Zmu-1:DHP豚鼠免疫学功能研究

采用ELISA法和流式细胞法,测定经卵白蛋白(OVA)免疫豚鼠的球蛋白Ig和T淋巴细胞增殖率的变化规律,研究Zmu-1:DHP豚鼠对病毒易感性的免疫学基础。结果表明:①豚鼠最佳OVA免疫剂量为0.1 mg/只;②OVA刺激后,Zmu-1:DHP豚鼠产生的特异性IgG及其亚类抗体,与DHP豚鼠基本相同;③Zmu-1:DHP豚鼠经OVA刺激,T淋巴细胞的增殖率显著低于DHP豚鼠;④OVA刺激豚鼠很少产生IgE;⑤加与不加Al(OH)3免疫比较,IgG1含量变化较大。表明Zmu-1:DHP豚鼠的细胞免疫功能较低,体液免疫功能与其他豚鼠相同,初步认为T细胞免疫功能低下,可能是引起Zmu-1:DHP豚鼠对某些病毒较敏感的原因之一。豚鼠的变态性抗体IgE产量较小;Zmu-1:DHP豚鼠适合于制作感染模型、研究免疫学机制或免疫功能的动物模型。

Zmu─1:DHP豚鼠生化基因位点多态性研究

为了研究Zmu－1：DHP育成品系豚鼠的遗传特征，以该品系亲本DHP（暂定名Zmu－2：DHP）豚鼠作对照，采用生化电泳法测定了14个同工酶的遗传标记。结果显示了二个品系的部分生化遗传概貌。Zmu－1：DHP品系10个基因位点无多态性，而Zmu－2：DHP品系有9个。二个品系的G－3－PD，G－6－PD、ES－6和ES－8位点呈多态性，DPH品系还有GOT-1位点呈多态性。上述5个多态性位点均有a、b二个等位基因，除此之外，Zmu—2：DHP品系在Es－8位点还存在c等位基因。从结果还看出，G－6－PD位点的等位基因类型与豚鼠的性别有关，多数雄性豚鼠呈b基因，多数雌性豚鼠则呈a基因。此外，还计算了5个多态性位点各种等位基因的频率。

Zmu1：DHP豚鼠乳酸脱氢酶和超氧化物歧化酶同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法，分析了Ｚｍｕ１：ＤＨＰ豚鼠心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、红细胞和血清的ＬＤＨ及ＳＯＤ同工酶，对ＬＤＨ同工酶谱作了光密度扫描，计算出各同工酶组分的相对活力及不同组织和血清ＬＤＨ中Ａ、Ｂ亚基的含量。Ｚｍｕ１：ＤＨＰ豚鼠肝中缺乏ＤＨＰ豚鼠和其他实验动物肝中普遍存在的ＬＤＨ５组分，多数组织中ＬＤＨＢ亚基含量呈不同程度提高。Ｚｍｕ１：ＤＨＰ豚鼠各组织和血清的ＳＯＤ同工酶呈多带分布。ＳＯＤ１和ＳＯＤ２为共有酶带。

抗豚鼠IgG血清制备及豚鼠IgG含量测定

取作者单位培育的封闭群DHP/ZMU-1豚鼠血清,经3次盐析、2次层析。层析的第2峰洗脱蛋白,经鉴定证明为IgG,已达电泳纯。用该IgG作抗原免疫新西兰兔,制得抗豚鼠IgG血清,其特异性符合要求,效价1:16,可供实验用。用制备的抗血清,测得体重为200～250g的普通级豚鼠的血清IgG含量为3.88±1.33mg/ml(n=88),正常值范围:2.20～6.83mg/ml。