镉诱导家兔肝脏含锌金属硫蛋白的纯化及鉴定

预先给家兔皮下注射CdCl_2四次,取肝脏经匀浆、离心、乙醇沉淀后,通过Sephadex G-50凝胶过滤层析,DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-25层析柱脱盐,得到MT的两个“亚型”—MT-1和MT-2,对其进行鉴定,其紫外扫描图谱示在280和250nm处无吸收峰,而最大吸收在220nm处。MT-1和MT-2均不含镉和铜,而每分子结合6个锌。用简化巯基试剂测定,MT-1含18.8个巯基,MT-2含19.1个巯基;HPLC分析MT主要以单体存在,也有少量二聚体。氨基酸组成与Cd-MT一致。整个纯化过程采用示波极谱法和火焰原子吸收光谱法测锌含量。结果表明前者可代替后者。

水体中重金属镉和锌对大型蚤联合毒性效应的初步研究

为了初步探讨重金属镉(Cd)和锌(Zn)对水生生物的联合毒性效应,以大型蚤(Daphnia magna)为研究对象,以蚤体内的金属硫蛋白(MT)含量为毒性指标,研究了重金属Cd和Zn对大型蚤的联合毒性作用.结果表明:Cd和Zn单独暴露下,大型蚤体内MT含量随水体中重金属浓度升高而升高,呈幂函数关系;Cd和Zn联合暴露下,蚤体内MT含量随联合浓度的升高呈先上升后下降趋势;在较低浓度时Cd、Zn表现为协同作用,在中等浓度时表现为相加作用,在较高浓度时表现为拮抗作用;MT可作为Cd、Zn联合毒性评价的敏感指标.

小球藻锌结合类金属硫蛋白的提取和分离

小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5天后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液。粗提液经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。实验测定了在不同pH值下小球藻锌结合蛋白的紫外光谱特征,发现该蛋白质的紫外光谱特征与兔肝金属硫蛋白(Zn-MTs)十分相似。经阴离子交换层析柱(DEAE Sephadex A-25)及反相液相色谱分离表明,小球藻锌结合蛋白的色谱行为与兔肝Zn-MTs有一定的相似性。此外,经Tricine-SDS-PAGE法测定该蛋白质的分子量约为8.2kDa;蛋白质分子中半胱氨酸含量达15%以上。由此可见,小球藻在锌胁迫下可诱导生成与兔肝Zn-MTs相似的锌结合蛋白质,即类金属硫蛋白(Zn-MT-like)。每克鲜藻可诱导Zn-MT-like蛋白达0.2g以上。

锌对小鼠组织MT-1基因转录及MT蛋白表达的影响

目的 :研究锌对小鼠各脏器金属硫蛋白 (MT)基因表达的影响。方法 :将小鼠随机分为注锌组和对照组 ,注锌后不同时间或不同剂量锌注射后 16 h断头处死动物 ,取一定量肝、脑、胸腺及脾脏组织制成匀浆 ,采用 Northern blot及 10 9Cd- hem饱和法测定组织 MT基因转录及蛋白表达的变化。结果 :时程研究表明 ,锌 10 mg/ kg腹腔注射后 2 h,小鼠肝脏及脾脏 MT- 1m RNA水平明显升高 ,4 h达峰值 ,分别为对照组的 5 .30和 2 .92倍 ,2 4 h恢复至正常水平 ;其 MT蛋白表达迟于 MT- 1m RNA水平升高 ,注锌后 8～ 2 4 h肝脏及脾脏 MT蛋白含量均比对照组明显升高 (P<0 .0 5或 P<0 .0 0 1) ,2 4 h达峰值 ,72 h恢复至正常水平。注射不同剂量锌后小鼠肝脏及脾脏 MT- 1m RNA水平 (4h)和 MT蛋白含量 (16 h)均呈剂量依赖性增加。小鼠腹腔注射锌 2 .5～ 10 mg/ kg 16 h,小鼠肝脏或脾脏 MT含量或锌5～ 10 mg/ kg注射后脾脏 MT含量均显著高于对照组 (P<0 .0 1或 P<0 .0 0 1)。但注射锌后脑及胸腺MT- 1m RNA水平及 MT蛋白含量均无明显变化经。结论 :锌诱导小鼠组织 MT合成具有明显的组织器官特异性。

小球藻锌结合类金属硫蛋白的结构表征及抗菌活性

小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5d后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液,再经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE电泳、氨基酸组成及紫外光谱等方法进行表征,测得该蛋白的分子量约为8.2ku,半胱氨酸含量为15.4%,具有金属硫蛋白典型的紫外光谱特征,称为类金属硫蛋白(Zn-MT-like proteins)。试验采用琼脂糖孔穴扩散法,研究了小球藻Zn-MT-like蛋白对3种细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌)和3种真菌(青霉菌、曲霉菌、酵母菌)的抗菌活性,并与兔肝Zn-MTs的抗菌能力进行比较。结果表明,小球藻Zn-MT-like蛋白对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌)和霉菌(青霉、曲霉)具有显著的抗菌活性,1mg/mL的Zn-MT-like蛋白对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、青霉和曲霉的抑菌圈直径分别为13.2、17.4、7.2和9.8mm;而对大肠杆菌、酵母菌则无抗菌活性。同样条件下,未加锌胁迫的小球藻蛋白质本身和兔肝Zn-MTs并不具有这些抗菌能力。小球藻Zn-MT-like蛋白抗菌活性的发现为进一步综合开发利用小球藻提供了实验基础。

重金属对扁额细首纽虫金属硫蛋白的影响

生物体内金属硫蛋白含量变化,可作为环境中重金属污染的生物标志物。通过暴露实验研究了扁额细首纽虫Cephalothrix simula暴露在不同浓度的铜,锌和镉溶液96 h,其体内金属硫蛋白含量的变化规律。结果表明3种重金属离子的胁迫作用均导致金属硫蛋白含量增加,在实验初期(6～24 h),金属硫蛋白含量达到高峰;金属硫蛋白含量与暴露溶液金属浓度具有明显的剂量～效应关系,金属离子浓度越高,金属硫蛋白含量越高;锌离子诱导金属硫蛋白合成的作用大于铜、镉离子。

甘草锌对顺铂毒性及抗癌效果的影响

本文观察了甘草锌对顺铂毒性及抗癌作用的影响。结果表明甘草锌对顺铂引起的肾脏、血液、生殖系统损害及致死毒性均有一定保护作用。经金属硫蛋白(MT)测定结果显示小鼠心、肝、肾组织中MT的含量均有明显增加,但其肿瘤组织中MT浓度较对照组无明显差别。经体内、外抑瘤实验表明甘草锌对顺铂的抗癌效果无明显影响。因此提示甘草锌可通过诱导MT降低顺铂毒性,有望作为抗癌药物的减毒剂应用于临床。

补充锌-金属硫蛋白对大鼠血清微量元素动态及抗氧化酶活性的影响

目的:探讨锌-金属硫蛋白(Zn-Metallothionein,Zn-MT)对耐力训练大鼠血清微量元素代谢及抗氧化酶的影响。方法:选取雄性SD大鼠24只,随机分为安静组、运动对照组、补充Zn-MT+运动组。按Bedford运动模型运动6周后即刻处死,取血测定大鼠血清Se、Fe、Zn、Cu、Ca、Mg含量及血清部分抗氧化酶的活性,并进行有关统计学检验。结果:与实验前相比,运动结束后大鼠血清Se、Fe、Zn、Cu、Ca、Mg含量呈下降趋势,血清中GSH、GSH-Px活性下降且有显著性差异(P<0.05);而运动对照组血清中CAT、GST、T-AOC和T-SOD活性在大强度运动后上升有极显著性差异(P<0.01)。结论:①补充Zn-MT可以使各离子浓度回升,机体内的某些无机金属离子会产生一定的促生成和转运作用;②补充Zn-MT可以增强大鼠血清酶的活性,降低急性大强度运动造成的机体抗氧化酶活性对机体造成氧化应激损伤。

诱导生物合成金属硫蛋白对顺铂引起血液毒性的保护作用

顺铂对小鼠血液系统具有毒副作用，而组织中金属硫蛋白（ＭＴ）的产生能减轻其毒性反应。观察多种含微量元素药物（甘草锌、富硒麦芽和亚硒酸钠）对诱导组织产生ＭＴ的作用和对顺铂引起血液系统毒性的保护作用。结果表明：富硒麦芽的ＭＴ诱导作用最强（Ｐ＜０．０１），其次为亚硒酸钠和甘草锌。甘草锌、富硒麦芽和亚硒酸钠对顺铂引起的小鼠血液系统毒性具有明显的保护作用。由此提示了在应用含锌、硒等微量元素药物降低顺铂引起重金属中毒时，诱导生物合成ＭＴ增加，可能是其中的重要机理之一。

金属硫蛋白和超氧化物歧化酶在颊鳞状细胞癌组织中的表达

背景与目的探讨金属硫蛋白(Metallothionein,MT)及铜/锌超氧歧化酶(Cu/Zn Superoxide dismutase,Cu/Zn-SOD)在颊粘膜鳞状细胞癌的表达及其意义。材料与方法对8例颊癌MT和Cu/Zn-SOD采用免疫组化的方法,观察两者在颊癌中表达的定位,并对MT和CuZn-SOD表达进行定量分析。结果在高分化鳞癌,MT和CuZn-SOD主要表达在癌巢周边,癌巢中心及间质组织表达较少或不表达,在低分化鳞癌则散在分布。在8例颊癌标本中,MT和Cu/Zn-SOD表达差异无统计学意义(P=0.554)。结论MT和Cu/Zn-SOD主要表达在分化较差、生长活跃的癌细胞,两者相类似的表达对肿瘤的发生发展和预后关系值得进一步探讨。

锌制剂对糖尿病大鼠肾脏和肾脏组织中VEGF、MT及MMP-9表达的影响

目的:通过观察正常及糖尿病大鼠肾脏组织中血管内皮生长因子(VEGF)、金属硫蛋白(MT)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,阐明补充外源性锌(Zn)制剂对糖尿病大鼠肾脏和肾脏组织中VEGF、MT及MMP-9表达的影响。方法:将48只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、阴性对照组(STZ组)、外源性锌干预糖尿病组(STZ+Zn组)及外源性锌干预正常组(Zn组),每组12只。其中STZ组及STZ+Zn组腹腔注射链脲菌素(STZ)制成糖尿病模型,STZ+Zn组、Zn组每周2次经口灌胃5mg·kg-1的锌制剂,共16周。取双肾,计算肾指数;HE染色及免疫组织化学染色观察大鼠肾脏病理学改变及MMP-9、VEGF和MT在肾脏组织中的表达。结果:与NC组比较,STZ组和STZ+Zn组大鼠肾指数升高(P<0.05);与STZ组比较,STZ+Zn组大鼠肾指数升高(P<0.05);Zn组肾指数与NC组比较差异无显著性(P>0.05)。大鼠肾脏组织中存在VEGF、MT及MMP-9的表达,其中MMP-9和VEGF主要表达在远端肾小管,MT主要表达在近端肾小管;NC组、STZ组、STZ+Zn组及Zn组之间比较肾脏组织中VEGF、MT和MMP-9表达差异无显著性(P>0.05)。结论:锌制剂可以导致糖尿病大鼠肾指数增大,但不影响健康小鼠的肾指数;肾脏组织中存在VEGF、MT及MMP-9的表达;外源性锌制剂干预后VEGF、MT及MMP-9在糖尿病模型中的表达无明显变化。

金属硫蛋白水平与顺铂所致肾脏病理改变的相关性研究

本文作者应用硒利生、亚硒酸钠、甘草锌诱导合成金属硫蛋白（ＭＴ）的方法观察其对顺铂所致肾脏病理改变的影响，并对肾脏中ＭＴ含量与肾脏病理改变之间的相关性进行了分析。发现顺铂所致肾脏损害的病理变化总积分值在应用上述药物后可明显降低，其中以硒利生组保护作用最明显，以下依次为亚硒酸钠组和甘草锌组。与其测定的肾脏中ＭＴ含量呈明显负相关，相关系数为Ｒ＝－０．９８６，Ｐ＝０．０１４。由此提示应用上述药物诱导ＭＴ合成，是阻断顺铂肾毒性的重要途径。

金属硫蛋白在动物营养学上的应用

综述了金属硫蛋白(MT)在动物的健康、疾病以及生长性能等方面的重要作用。MT能参与畜禽体内微量元素Cu、Zn等的代谢,可利用MT来评价动物机体Zn的营养状态;MT具有抗应激的作用;MT有重金属解毒作用,在高铜、高锌日粮的促生长机理中发挥重要作用;MT促进动物机体生长发育;此外,MT在Se对动物机体的各种生理作用中发挥重要作用。

Zn^(2+)预处理对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的 :观察Zn2 + 预处理诱导金属硫蛋白 (MT)在心肌细胞的表达及对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法 :3 2只Sprague Dawley大鼠随机分为对照组及实验组 ,实验组按腹腔注射ZnSO4 到建立再灌注模型的时间分为E1 2h,E2 4h及E4 8h组 ,每组各 8只。检测LDH ,CK、ATP含量及心功能指标 (LVSP与±dp/dtmax) ,用1 0 9Cd/血红素饱和法测量心肌组织中金属硫蛋白的含量。结果 :E2 4h及E4 8h组MT表达量较对照组高 (P <0 .0 1) ,E1 2h组虽有表达 ,但其与对照组间差异无显著性。E2 4h及E4 8h组LDH与CK较其它二组低 ,而ATP较其它二组高 ,心功能指标较其它二组改善。E1 2h组及对照组之间相应各指标 (LDH ,CK、ATP、LVSP与±dp/dtmax)间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :Zn2 + 预处理可诱导MT在心肌细胞的表达而对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌具有保护作用。

舌鳞癌组织及转移淋巴结中MT和Cu/Zn-SOD的表达及意义

目的探讨金属硫蛋白(metallothionein,MT)及铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)在舌鳞癌组织和淋巴结中的表达及其意义。方法用免疫组化方法,观察41例舌鳞状细胞癌组织和颈淋巴结中MT和Cu/Zn-SOD的表达、定位,并进行定量分析和比较。结果舌鳞状细胞癌标本中,有淋巴结转移的原发病灶与无淋巴结转移的原发病灶MT和Cu/Zn-SOD表达的差异有统计学意义。结论MT和Cu/Zn-SOD表达与肿瘤的分化程度和转移相关。

锌_7与镉_7－金属硫蛋白清除羟自由基的比较

分离及纯化兔肝金属硫蛋白制备去金属金属硫蛋白、锌７与镉７金属硫蛋白．在不同ｐＨ条件下，比较后二者清除羟自由基能力；在ｐＨ６条件下，比较锌７－金属硫蛋白与有关蛋白和无机锌盐清除羟自由基效果．结论是在近生理ｐＨ条件下锌７－金属硫蛋白清除羟自由基能力远强于镉７－金属硫蛋白．金属硫蛋白清除羟自由基的能力主要来源于蛋白中处于还原态的流基．

镉饱和法测定小白鼠肝中金属硫蛋白

金属硫蛋白（ＭＴ）是一种低分子量的蛋白质，会大量的半胱氨酸，并对金属有较高的亲合力，镉饱和法测定金属硫蛋白正是利用了这些性质。在本研究中，小白鼠经口给以醋酸锌，１６小时后取出肝脏并用镉饱和法测其ＭＴ的含量。结果显示方法有较好的重复性，而且肝ＭＴ的含量随Ｚｎ剂量的增加而增加。

金属巯蛋白与人体内铜锌元素的代谢

金属巯蛋白是一类富含金属的化学结构极为特殊的内源性蛋白。它构成机体内金属元素的新陈代谢中快速应答的缓冲体系。尤其在铜、锌两种元素的吸收、转运、排泄方面发挥着重要作用。

中枢神经系统中锌离子释放的相关机制及其与脑缺血损伤的关系

近年来，锌离子敏感性探针、选择性螯合剂和转基因模型动物的应用，使人们可以更加深入地了解锌离子在中枢神经系统的细胞内和细胞间离子信号通路中所扮演的重要角色。现从锌离子导入蛋白家族、锌转运体蛋白家族和金属硫蛋白家族等对锌离子浓度的影响来阐述神经系统中锌离子释放的来源和机制以及对脑缺血损伤的影响。

蛹虫草金属硫蛋白分离纯化及性质研究

研究探讨锌离子胁迫下蛹虫草Cordyceps militaris金属硫蛋白的产生及性质。蛹虫草菌丝体以15g/L Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集12.021g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析,冷冻干燥得到蛹虫草金属硫蛋白纯品。利用Bradford法进行蛋白质含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,发酵终点处金属硫蛋白含量为12.876mg/g菌丝体(湿重)。用电喷雾质谱法测得金属硫蛋白的分子量为7 390Da,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得每分子蛋白质含有14个巯基、结合5个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含57个氨基酸,其中含有13个半胱氨酸,疏水氨基酸占29.8%,且含有组氨酸。以上表明,研究中的蛹虫草金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异较大,但与酵母菌金属硫蛋白结构组成类似。