miR-141-5p/ZNF705A对慢性粒细胞白血病细胞源外泌体调控骨髓间充质干细胞黏附作用的机制

目的探讨慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞源外泌体(exosome,Exo)中miR-141-5p/ZNF705A对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)黏附作用的影响。方法电镜和NTA粒径分析检测CML患者外周血和K562细胞中的Exo形态大小;qRT-PCR和Western blot检测转染前后K562细胞的Exo、BMSCs标记分子及黏附蛋白的表达情况;细胞黏附实验检测BMSCs的黏附能力;CCK-8法检测BMSCs活性、萤光素酶实验检测miR-141-5p与ZNF705A结合情况等。结果qRT-PCR结果显示,miR-141-5p表达在CML患者和K562细胞源Exo中均明显降低;qRT-PCR和Western blot等结果表明,CML患者中BMSCs的黏附蛋白CD44和CXCL12表达明显降低,且能够吞噬K562细胞源Exo。进一步发现,与CD34^(+)细胞相比,K562源性Exo能够降低Exo促进的BMSCs中CD44和CXCL12表达和黏附作用;同时,双萤光素酶基因报告等验证miR-141-5p与ZNF705A靶向结合;最后发现通过上调K562细胞源Exo中miR-141-5p的表达,靶向抑制ZNF705A,进而促进BMSCs的活性和黏附功能。结论K562细胞下调Exo中miR-141-5p表达,减少对ZNF705A的靶向抑制,进而抑制BMSCs的黏附功能,从而调控CML患者的骨髓造血功能。

绵羊ZNF521基因多态性与生长性状的关联性分析

锌指蛋白521(Zincfinger Protein521,ZNF521)属于C2H2锌指蛋白家族,是生长板软骨形成和软骨内骨化的重要调节因子,影响骨的纵向生长。本研究旨在通过研究ZNF521基因g.31731118 A>G位点多态性与绵羊生长性状的关联性,筛选与绵羊生长性状相关的潜在分子标记位点。试验采用Illumina OvineSNP 600K BeadChip和Illumina OvineSNP 50K BeadChip芯片检测技术分别对乌珠穆沁羊(n=269)和湖羊群体(n=997)ZNF521基因g.31731118A>G位点进行基因型检测,并分别与2个群体生长性状进行关联性分析。ZNF521基因遗传特征分析发现,g.31731118 A>G位点在乌珠穆沁羊和湖羊中均检测出3种基因型:AA、GA和GG,且在2个群体中均处于中度多态(0.25<PIC<0.50),并符合哈代-温伯格平衡。关联分析结果表明,ZNF521基因g.31731118A>G位点与乌珠穆沁羊4月龄胸围显著相关,与湖羊6月龄体重和体斜长显著相关。此外,6月龄乌珠穆沁羊体斜长、湖羊管围和十字部高GA基因型均优于GG和AA基因型。综上所述,ZNF521基因与绵羊生长发育相关,g.31731118A>G位点可作为绵羊生长性状的潜在分子标记。

香猪ZNF805-like基因结构变异与皮肤皱褶性状的关联研究

基于比较基因组学分析,从皱皮香猪锌指蛋白805-like(Zinc Finger Protein 805-like,ZNF805-like)基因外显子4中检测到一个81 bp的结构变异(Structure Variant,SV),缺失型基因产生的转录本是NCBI记录的转录本变异体X2(XM_021097285.1)。为解析该SV对香猪皮肤皱褶形成的影响,本研究首先建立特异性PCR检测方法,明确普通香猪和皱皮香猪群体中该SV的分布;采用RT-qPCR方法分析了ZNF805-like基因在不同组织中的表达水平,并比较了具有不同基因型的皮肤组织中该基因的表达差异,进一步克隆出香猪ZNF805-like基因的CDS区;在此基础上,采用生物信息学方法分析SV对编码蛋白的理化性质、三维结构和对靶基因的影响。结果显示,在皱皮香猪和普通香猪群体中,ZNF805-like基因的E4-sv81位点存在2种基因型:Ⅱ型和ID型(D为缺失基因,Ⅰ与参考基因一致),皱皮香猪的D等位基因频率显著高于普通香猪,且皮肤组织中ID型的基因表达量显著高于Ⅱ型。基因克隆结果显示,野生型蛋白由725个氨基酸组成,突变型蛋白异构体2的肽链较短,由698个氨基酸组成。SV导致突变型蛋白异构体2的极性氨基酸减少,丢失了一个磷酸化位点,第1个锌指结构与其他锌指的间距拉大。本文研究结果提示,皱皮香猪的缺失型SV可上调皮肤ZNF805-like基因转录本X2的表达,产生较短的蛋白异构体2,可能通过改变蛋白异构体的高级结构和靶基因谱,参与香猪皱皮的形成过程。本研究将有助于在香猪群体中识别并淘汰携带皱皮基因的个体,从而为优质香猪的选择性育种提供科学依据和技术支持。

锌指蛋白ZNF23在非小细胞肺癌中表达的研究

目的 探讨ZNF23非小细胞肺癌中的表达、对肺癌生物学行为的影响及相关作用机制。方法 免疫组化检测非小细胞肺癌组织中ZNF23表达,Western Blot及realtime PCR方法检测ZNF23在癌与癌旁组织中蛋白及mRNA表达,siRNA转染及细胞周期实验检测ZNF23在调节细胞周期进展中发挥的作用。结果 与癌旁正常组织相比,ZNF23在非小细胞肺癌临床石蜡切片中表达降低,并与组织类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关;Western Blot及realtime PCR结果显示ZNF23的蛋白及mRNA水平在癌旁正常组织中多于癌组织。流式细胞仪结果显示ZNF23干扰细胞周期进展较快,多在S/G2期。结论 ZNF23在非小细胞肺癌组织中的表达低于癌旁正常组织,是一个癌症抑制因子,并且可以通过阻滞细胞周期进展而抑制细胞增殖,从而发挥肿瘤抑制作用。

艾迪注射液治疗晚期胃癌的预后及与外周血lncRNA ZNF667⁃AS1及miR⁃126表达与的关系

目的探讨艾迪注射液治疗晚期胃癌的预后及与外周血lncRNA ZNF667⁃AS1及miR⁃126表达的关系。方法收集2022年1月至2023年3月间于安徽省颍上县人民医院接受治疗的晚期胃癌患者60例,所有患者接受放化疗配合艾迪注射液治疗,随访1年,存活病例纳入预后良好组(n=44),死亡病例纳入预后不良组(n=16)。比较两组患者一般资料及外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平,分析外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平与晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后的关系,评估外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平对晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后的预测价值。结果经随访发现,预后不良16例、占26.67%;预后良好44例、占73.33%。预后不良组外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平均低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126异常低表达均是晚期胃癌患者预后不良的独立危险因素(OR>1,P<0.05);ROC曲线图显示,外周血lncRNA ZNF667⁃AS1+miR⁃126预测晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后的AUC为0.924,灵敏度、特异度分别为90.20%、83.60%。结论外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126低表达与晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后不良有关。

circ_HIPK3靶向miR-381-3p/ZNF217轴调控Aβ诱导的海马神经元功能和形态

目的分析环状RNA同源结构域相互作用蛋白激酶3(circ_HIPK3)靶向miR-381-3p/锌指蛋白217 ZNF217)轴对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元功能和形态的影响。方法制备新生大鼠海马神经元,分为对照组、Aβ组、si NC1组、si HIPK3组、si HIPK3+inhibitor NC组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si NC2组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组,除对照组外其余组均通过40μmol/L Aβ1~42诱导。qRT-PCR法测定海马神经元circ_HIPK3、miR-381-3p、ZNF217 mRNA表达,透射电镜观察细胞形态,CCK-8法测定海马神经元存活率,Hochesst 33342法测定海马神经元凋亡,流式细胞仪检测海马神经元内Ca^(2+)荧光强度,Western blot法测定海马神经元磷酸化Tau蛋白(P-Tau)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、ZNF217蛋白表达,双萤光素酶报告基因分析miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217靶向关系。结果对照组海马神经元结构正常,胞核形态正常,线粒体、内质网无病理改变;Aβ组海马神经元呈退行性改变,核形态异常,膜内陷,可见大量线粒体肿胀,胞浆内含大量脂滴空泡;与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元结构部分恢复;与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元结构损伤严重;与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元结构损伤减轻。与对照组相比,Aβ组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p水平、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元ZNF217 mRNA和蛋白表达水平、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217均靶向结合。结论circ_HIPK3沉默可能通过调控miR-381-3p/ZNF217轴改善Aβ诱导的海马神经元结构功能损伤。

ZNF268在肝细胞癌中的表达及临床诊断价值探讨

目的:分析ZNF268在肝细胞癌(HCC)与正常肝脏中的表达差异,探讨ZNF268在HCC中的临床诊断价值。方法:实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)分别检测人肝癌细胞株HepG2、Huh7与人正常肝细胞株LO2中ZNF268 mRNA的表达情况;免疫组织化学技术(IHC)检测64例HCC及其癌旁对照组织中ZNF268的表达情况。结果:人肝癌细胞株HepG2、Huh7中ZNF268 mRNA的表达均明显低于人正常肝细胞株LO2 (P < 0.0001, P < 0.0001);HCC组织中ZNF268的表达明显低于癌旁组织(P < 0.05)。结论:ZNF268在HCC中的表达低于正常肝脏,ZNF268有望作为HCC鉴别诊断和治疗的潜在生物标志物。

pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒的构建与鉴定

目的构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒靶向敲低ZNF703。方法根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区在RNA干扰平台上(broadinstitute.org)设计shRNA的靶向序列,并根据pLKO.1中Age I和EcoR I酶切位点序列设计并合成ZNF703 shRNA的引物;对引物进行退火;将pLKO.1质粒进行酶切、胶回收;用T4酶进行连接、转化、涂板,对阳性克隆菌落PCR鉴定和测序鉴定;将构建好的质粒利用慢病毒包装并转染HCT-116细胞系,Q-PCR检测ZNF703的敲低效率。结果成功构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒,并且利用病毒包装体系构建ZNF703 shRNAHCT-116细胞系,RT-PCR结果显示设计并构建的pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒可用于有效敲低ZNF703。结论成功构建可用于有效敲低人或鼠源细胞系中ZNF703的pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒。

The Role of ZNF207 in Liver Hepatocellular Carcinoma:Expression Analysis and Prognostic Implications

Objective:To analyze the expression and clinical significance of the zinc finger protein ZNF207 gene in liver hepatocellular carcinoma(LIHC)based on The Cancer Genome Atlas(TCGA)database.Methods:The mRNA sequencing data of 371 cases of primary liver cancer,50 cases of normal tissues,and 3 cases of recurrent liver cancer were downloaded from the TCGA database.The corresponding clinical information of the 371 cases of hepatocellular carcinoma was subsequently analyzed.The difference in ZNF207 expression between normal and tumor tissues was analyzed using the UALCAN online database.The impact of ZNF207 expression on survival prognosis was assessed using the Kaplan-Meier method in R software.The GO and KEGG pathways of ZNF207 were analyzed.The Cox proportional hazards model was used to evaluate the prognostic factors of patients with LIHC.RT-qPCR was employed to verify the expression of ZNF207 in LIHC cells.Results:ZNF207 was highly expressed in LIHC tissues and HepG2 cells,with a significant difference(P<0.05).Multivariate Cox regression analysis revealed that patients with high ZNF207 expression had a significantly shorter overall survival time compared to those with low ZNF207 expression(HR=1.466,95%CI:1.011-2.126,P<0.05).GO enrichment analysis suggested that ZNF207 may influence the onset and progression of hepatocellular carcinoma by regulating mRNA splicing and mRNA transcription processing through the spliceosome.KEGG pathway enrichment analysis indicated that ZNF207 might affect the onset and progression of hepatocellular carcinoma through mitophagy,mRNA surveillance,homologous recombination,spliceosome,and nuclear-cytoplasmic transport.Conclusion:The expression of ZNF207 may be an independent predictor of the prognosis of patients with LIHC and could influence the development of hepatocellular carcinoma through various gene functions and pathways.It has the potential to serve as a novel molecular marker for predicting the prognosis of hepatocellular carcinoma.

ZNF580基因原核表达载体的构建与鉴定

【目的】构建ZNF580基因原核表达载体,为获得大量重组ZNF580蛋白并制备其多克隆抗体奠定基础。【方法】根据ZNF580cDNA序列的开读框架设计上、下游引物,利用PCR技术扩增ZNF580开放阅读框cD-NA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,EcoRI、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】双酶切pET30a-ZNF580,电泳分析插入片段长度为524 bp,与预期的结果一致,经连接点两端进行测序,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建原核表达载体pET30a-ZNF580。

一个人类新基因ZNF322的研究初报

利用果蝇心脏发育基因 zfh-1的 c DNA序列和计算机克隆方法 ,在 9号染色体上发现了一个新的人类同源基因 .经国际基因命名委员会批准 ,命名为 ZN F32 2 .该基因总长度约为 2 .8kb,为一个连续的序列 ,编码一个 4 0 2个氨基酸的蛋白质 ,与小鼠 zfp-35编码的蛋白质最相似 (同源度为 51 .4 % ) .该基因在人体肾、脑、结肠、胚胎心脏及黑色素瘤等多种组织中广泛表达 ,其功能有待深入研究 .

ZNF185基因的克隆及在小鼠睾丸中的定位

目的:克隆ZNF185基因并检测ZNF185在小鼠睾丸中的定位。方法:从小鼠睾丸中提取RNA,经RT-PCR,再对目的片段进行克隆和鉴定;提取小鼠肝、睾丸与卵巢组织的蛋白质,进行Western blot分析;制备小鼠睾丸冰冻切片,应用免疫荧光技术分析。结果:(1)ZNF185基因克隆完全正确。(2)Western blot显示,睾丸中的ZNF185含量最多。(3)免疫荧光显示,ZNF185定位于睾丸间质细胞和精子,在睾丸间质细胞表达较弱,而在圆形精子和成熟精子高表达。结论:成功克隆了ZNF185基因,并初步探明了ZNF185在小鼠睾丸中的定位。

miR-362靶向ZNF644基因调控猪未成熟支持细胞的增殖和凋亡

睾丸组织中未成熟支持细胞的增殖能力决定成熟支持细胞的数量,进而制约成年雄性动物的精子生成能力。研究表明microRNA(miRNA)参与调控猪未成熟支持细胞的增殖和凋亡,但大部分鉴定出的miRNA功能仍不明确。本文基于前期RNA-seq数据筛选结果,研究了miR-362对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的调控作用。首先利用生物信息学方法预测miR-362的靶基因,通过qRT-PCR技术检测miR-362和ZNF644基因在不同发育阶段的猪睾丸组织中的表达水平以及在猪未成熟支持细胞中过表达或抑制表达miR-362后ZNF644基因的表达水平,采用双荧光素酶报告基因系统验证miR-362与ZNF644基因之间的靶向关系。结果显示,miR-362与ZNF644基因3′UTR具有一个潜在的结合位点,miR-362和ZNF644基因在猪睾丸组织中的mRNA表达水平显著负相关(r=-0.723,P<0.01),miR-362和psi CHECK2-ZNF644-WT 3′UTR共转染组的双荧光活性显著降低,且miR-362显著调节ZNF644基因的表达水平,表明miR-362靶向ZNF644基因并抑制其表达水平。为进一步检测过表达miR-362或抑制表达ZNF644基因对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的影响,通过流式细胞术检测细胞周期,CCK8和EdU试剂盒检测细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI方法和qRT-PCR技术检测细胞凋亡情况及凋亡相关基因的表达水平。结果表明,过表达miR-362后,猪未成熟支持细胞周期被阻滞在G_1期,抑制表达ZNF644基因后,猪未成熟支持细胞被阻滞在G2期,细胞增殖能力显著减弱,细胞凋亡率显著提高,细胞凋亡相关基因呈促进凋亡的差异表达。本研究结果证实miR-362靶向ZNF644基因抑制猪未成熟支持细胞的增殖而促进其凋亡,为深入研究miR-362在猪精子生成过程中的生物学功能提供了理论基础。

慢病毒介导shRNA靶向ZNF217抑制胶质瘤细胞生长、迁移和侵袭

目的探讨癌基因ZNF217对胶质瘤U251细胞迁移、侵袭以及增值的影响以及相应的分子机制。方法构建shRNAZNF217慢病毒干扰载体,在将其包装成成熟的慢病毒后感染胶质瘤U251细胞。Western blot检测ZNF217干扰效率。利用transwell、Boyden、MTT和流式细胞仪分别检测细胞迁移、侵袭、增殖以及细胞周期能力的改变。western blot检测相应基因表达改变。结果与对照细胞相比,ZNF217基因在慢病毒shRNA-ZNF217作用下,其表达水平在胶质瘤U251细胞中显著下调。Transwell和Boyden结果显示,在抑制ZNF217表达后细胞迁移和侵袭能力也明显下降。此外,MTT和流式细胞仪分析结果表明,细胞的增值和周期转化能力也明显降低。机制分析显示,在抑制ZNF271表达后,磷酸化的PI3K/AKT以及癌基因C-Myc和间质标志物N-Cadherin活性减低,而上皮标志物E-Cadherin活性增高。结论 ZNF217在胶质瘤中通过激活PI3K/AKT上调CMyc基因以及调控上皮向间质转化相关基因(Epithelial–mesenchymal transition EMT)从而促进细胞生长、迁移和侵袭。

ZNF230/荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在Cos细胞中的表达与定位

为了用绿色荧光蛋白标记观察人类无精症相关基因ZNF230在Cos7细胞中的蛋白质表达及定位,用PCR方法扩增得到突变的人和小鼠mt ZNF230和mt znf230基因,使其3′端的终止密码TGA突变为TGG,并装入T 载体,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP N1的绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)基因融合,构建了ZNF230—荧光蛋白融合基因表达载体。然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入Cos7细胞系。荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP N1转染的Cos细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP ZNF230和pEGFP znf230的Cos细胞中荧光主要聚集在细胞核中。表明转染的Cos细胞系能高效表达人ZNF230和小鼠znf230蛋白,ZNF230基因表达的蛋白定位于细胞核内。

Co^(2+)离子在MgF_2和ZnF_2晶体中的各向异性g因子的理论研究

利用基于基团模型的 3d7离子在斜方对称中的高阶微扰公式计算了MgF2 和ZnF2 晶体中Co2 + 杂质中心的各向异性g因子 gx,gy 和gz.在计算中 ,考虑了共价效应 ,组态相互作用和斜方晶体场的贡献 ;而且与此相关的参量可由所研究的晶体的光谱和结构数据得到 .计算结果与实验符合较好 .

ZNF217基因在卵巢癌中的表达及意义

目的检测ZNF217基因在卵巢囊腺癌、卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中的表达,初步探讨其与卵巢癌发生发展的关系。方法用免疫组织化学法及实时RT-PCR方法检测卵巢囊腺癌、卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中ZNF217基因在蛋白及转录水平的表达情况。结果ZNF217基因在卵巢囊腺癌中的蛋白表达高于卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中的(P<0.05),而且ZNF217基因的蛋白高表达与卵巢癌的发生显著相关(r=0.627),卵巢囊腺瘤组织与正常的卵巢组织相比差异则无显著性(P>0.05),在mRNA水平的检测与上述结果一致。结论ZNF217基因的表达与卵巢癌的发生高度相关,且与卵巢癌的临床分期相关。ZNF217基因可能是导致卵巢癌发生发展的重要候选基因之一。

奶牛乳房炎抗性相关基因Znf313的电子克隆与序列分析

电子克隆是基因克隆的新策略。利用一个患乳房炎奶牛外周血白细胞中差异表达的EST序列为信息探针进行电子克隆,根据电子克隆序列设计引物,以奶牛外周血白细胞cDNA为模板进行RT-PCR验证,PCR产物克隆入pGEM-T质粒载体,测序得到的序列已被GenBank收录(DQ010409)。该基因被命名为牛锌指蛋白313(Znf313)基因,开放阅读框1～693bp,推测编码230个氨基酸,预测其编码蛋白分子量为25.67kD,等电点6.90。

高度近视家系ZNF644基因突变筛查

目的明确10个高度近视家系是否与ZNF644基因突变有关。方法收集符合常染色体显性遗传的10个高度近视家系,对同意参加本研究的99例成员进行详细的临床检查,提取所有成员外周血白细胞DNA,采用PCR方法,对家系先证者ZNF644基因的外显子各片段进行扩增,并对PCR产物进行正、反双向测序。结果 10个高度近视家系先证者ZNF644基因测序发现3个已知单核苷酸多态性,分别为rs358691、rs17131232和rs76101054,未发现ZNF644基因突变。结论高度近视存在遗传异质性,遗传性高度近视发病可能只部分与ZNF644基因突变相关。