东方山羊豆Cu/ZnSOD基因的克隆及表达分析

超氧化物歧化酶是一种广泛存在于真核生物中的金属酶类,在植物的抗逆性中起到重要的作用。文章采用RACE方法,从东方山羊豆中克隆了Cu/ZnSOD基因,并对其进行了初步分析。该基因cDNA序列全长935 bp,开放阅读框600 bp,编码199个氨基酸,蛋白质分子量为20.35 kDa。通过实时荧光定量PCR结果分析,该基因在东方山羊豆叶中表达量最多,茎中次之,根中最少。在NaCl和PEG诱导下,Cu/ZnSOD基因表达量先上调后下降。NaCl诱导24 h后,该基因的表达量显著低于对照。ABA胁迫抑制了该基因的表达。亚细胞定位结果表明,Cu/ZnSOD蛋白定位于叶绿体中。实验结果证明,Cu/ZnSOD基因主要在东方山羊豆的绿色组织中表达,在抵抗渗透性胁迫方面起到一定作用。

Cu/ZnSOD基因敲除小鼠——研究耳蜗氧化损伤的理想模型

目的 确定一个理想的耳蜗氧化损伤模型。方法 对 5只Cu/ZnSOD基因敲除纯合突变 (Cu/ZnSOD无活性 ,Sod1- / - )小鼠和 10只Cu/ZnSOD杂合突变 (5 0 %Cu/ZnSOD失活 ,Sod1+/ - )小鼠及 5只野生小鼠 (Cu/Zn SOD活性正常 ,Sod1+/ +)进行ABR检测及内、外毛细胞计数。应用PCR技术检测Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗mtDNA缺失情况。结果 Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗内外毛细胞大量缺失 (P <0 .0 0 1) ,ABR检测 ,Sod1- / -小鼠ABR阈值在 8,16 ,32kHz及Sod1+/ -小鼠ABR阈值在 16 ,32kHz明显增大 (P <0 .0 0 1)。Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗mtDNA有三种缺失 ,分别为mtDNA 386 7bp、mtDNA 372 6bp及mtDNA 432 6bp缺失。结论 Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗在细胞及分子水平上均表现出受到ROS损伤的改变 ,是一个理想的耳蜗氧化损伤模型。

林蛙油灌胃对小鼠肝组织中Cu/ZnSOD基因表达的影响

以小鼠为动物模型,通过直接灌胃的方法,验证不同剂量林蛙油抗氧化、抗衰老的作用;利用Realtime PCR的方法分析小鼠肝脏组织中与抗氧化相关基因Cu/ZnSOD的时空表达规律。结果表明,5周龄组和15月龄组小鼠灌胃林蛙油后,肝组织中Cu/ZnSOD基因表达量显著增加,但总体上看,5周龄鼠0.45 g·kg-1剂量组Cu/ZnSOD基因表达增加量要普遍高于2.25 g·kg-1剂量组,但与1.35 g·kg-1剂量组差异不显著;而15月龄鼠1.35 g·kg-1剂量组Cu/ZnSOD基因表达增加量要显著高于0.45和2.25 g·kg-1剂量组,但0.45和2.25 g·kg-1剂量组差异不显著;而且15月龄组Cu/ZnSOD基因表达量升高的速度较慢,一般在灌胃第30天或第45天才出现显著差异。

Cu／ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗易于出现mtDNA缺失突变—FOS对组织损伤的特异性研究

目的：探讨ROS对各种组织mtDNA的损伤情况，耳蜗mtDNA是否为ROS损伤的标靶。方法：应用套式PCR及分子克隆测序技术对10只Sod1基因敲除小鼠及5只同系野生型小鼠耳蜗、脑、肝脏、肾脏、心脏及皮肤组织进行研究。结果：1.各组mtDNA可检测到3种缺失，常见的缺失为mtDNA3867bp和mtDNA3726bp缺失，mtDNA4236bp缺失不常见。2.mtDNA缺失在不同组织的含量有明显的不同，肝脏和肾脏组织含量最高，耳蜗、心脏和大脑组织其次，脾脏及皮肤组织含量最低。与野生型小鼠比较，Sod1基因敲除小鼠mtDNA在不同组织的缺失量是野生型小鼠的3-20倍，其中耳蜗组织mtDNA缺失量约是WT小鼠的15倍。结论：缺乏Sod1的保护，ROS可以攻击各种组织mtDNA，但具有明显的组织特异性，耳蜗mtDNA是其损害的敏感标靶。

昆虫杆状病毒细胞凋亡相关基因的研究进展

细胞凋亡(Apoptosis)或细胞程序性死亡(Programmed cell death,PCD),最早被Kerr(1972)定义为一种有秩序、受控制并按某种预定程序发展的细胞生理性自然死亡过程.

东亚砂藓Cu/Zn SOD基因的克隆及序列分析

[目的]对东亚砂藓(Rhacomitrunm japonicum)的Cu/Zn SOD基因进行克隆,并对其序列进行分析。[方法]利用RT-PCR技术获得东亚砂藓Cu/Zn SOD基因的cDNA,同时对该序列进行生物信息学分析。[结果]东亚砂藓Cu/Zn SOD基因cDNA长565 bp,包含一个长为465 bp的ORF,编码154个氨基酸残基,预测的该蛋白的分子量为15.5 kD,理论等电点为5.77,负电荷残基(Asp+Glu)总数为18个,正电荷残基(Arg+Lys)总数为12个,不稳定系数是13.36;其编码的氨基酸序列包含了5个蛋白保守区,均为铜锌超氧化物歧化酶超家族所有;Blastn比对表明东亚砂藓Cu/Zn SOD基因与毛尖紫萼藓、小立碗藓相关基因的同源性高达99%和82%。[结论]该研究为进一步研究紫萼藓科植物的抗旱性及苔藓Cu/Zn-SOD在抗非生物胁迫方面的功能提供了理论依据与基础。