衍生化LC-MS法测定人体内佐芬普利及其活性代谢物以及药代动力学研究

目的:建立衍生化LC-MS法同时测定佐芬普利及其活性代谢物佐芬普利拉的人体血药浓度,研究健康中国受试者单次和多次口服佐芬普利钙片后,佐芬普利和佐芬普利拉的药代动力学特征。方法:10名健康受试者先分别单次口服15,30和60 mg受试制剂,然后连续6 d多次口服30 mg受试制剂,以对溴苯甲酰甲基溴为衍生化试剂,采用衍生化LC-MS法同时测定人血浆中佐芬普利及其活性代谢物佐芬普利拉的浓度,并计算二者的药代动力学参数。结果:健康受试者分别单次口服佐芬普利片后,3个剂量组的佐芬普利和佐芬普利拉的半衰期相近;在15～60 mg剂量范围内,佐芬普利和佐芬普利拉的AUC0-24 h和cmax均与剂量呈良好的线性关系,且均不存在性别差异。多剂量(每日1次,每次30 mg)连续给药6 d后,佐芬普利的平均稳态血药浓度cav为(5.07±1.06)ng/mL,血药浓度波动度DF为14.26±2.94,蓄积常数为0.94±0.31。佐芬普利拉的cav为(40.31±5.40)ng/mL,DF为11.61±4.68,蓄积常数为0.83±0.13。结论:佐芬普利及活性代谢物佐芬普利拉在中国人体内均呈线性药代动力学特征,多次给药后在体内均无蓄积;二者在中国人体内的药代动力学特征和代谢与欧洲人之间存在种族差异。

反相高效液相色谱法测定佐芬普利钙原料的有关物质

目的建立测定佐芬普利钙原料中有关物质的反相高效液相色谱法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水-冰醋酸(76∶24∶1)为流动相,检测波长220 nm,柱温40℃,流速1 mL/min。结果佐芬普利钙质量浓度在1.02～6.12μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),最低检测限为0.204 ng,佐芬普利钙主峰与有关物质峰分离良好。结论所用方法专属性强,适用于佐芬普利钙原料有关物质的测定。

佐芬普利的合成工艺研究

本文报道了一条简便的佐芬普利合成方法,在中间体的合成过程中,无需进行结晶纯化。采用二环己胺对佐芬普利酸进行拆分,收率达36%。该方法能较大程度上简化操作步骤,避免了对侧链进行拆分时烦琐的重结晶过程和使用价格昂贵的拆分剂。

佐芬普利原料药中钙含量的测定

根据佐芬普利的分子结构及性质,建立了以EDTA为滴定剂、钙紫红素为指示剂测定佐芬普利原料药中钙含量的方法。结果表明,所称样品的质量与消耗的滴定剂体积之间具有很好的线性关系:V=93.37m-0.042,r=0.9999;精密度实验的RSD=0.17%;分析结果的准确度为-0.076%。该方法可靠,可用于佐芬普利原料药中钙含量的测定,也可用于佐芬普利原料药的质量控制。

佐芬普利治疗轻中度高血压的临床应用

目的观察血管紧张素转换酶抑制剂佐芬普利治疗轻中度高血压的效果及安全性。方法采用随机、双盲对照研究方法,设马来酸依那普利分散片为对照药物,入选病人67例,其中佐芬普利组48例,马来酸依那普利组19例。两组分别服用佐芬普利15~30mg,马来酸依那普利10~20mg,每天1次,疗程8周。结果与治疗前相比,两组在治疗2、4、6、8周SBP与DBP均下降（P〈0.05）;与马来酸依那普利组相比,佐芬普利组治疗2、4、6、8周末,SBP与DBP下降差异均无显著性（P〉0.05）。结论每天服用佐芬普利片15~30mg 1次,能显著降低轻、中度双期高血压患者的血压且安全,患者依从性好。

佐芬普利对肾血管性高血压大鼠肾脏血管肾张素转换酶2及Mas受体的影响

目的:探讨佐芬普利对大鼠肾血管性高血压、心肌肥厚及肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)及血管紧张素1-7(Ang1-7)受体Mas的影响。方法:清洁型雄性SD大鼠70只,随机分为假手术组(S)20只、2K1C手术组50只。采用两肾一夹法(two-kidney one clip,2K1C)制作肾血管性高血压模型,高血压造模成功大鼠46只,随机分为2K1C+蒸馏水组(K)23只、2K1C+佐芬普利组(Z)23只。分别于术后第4、8、12周,无创血压仪套尾法监测血压,二维超声心动图监测心脏结构和功能;术后第8、12周分别处死大鼠取其代偿肾脏,荧光定量PCR检测其ACE2及Ang1-7受体Mas mRNA表达,Western blot技术检测ACE2及Mas蛋白表达。结果:①术后K组各时间段血压均明显升高,Z组较K组血压显著降低(P均<0.01);②术后第8、12周,K组收缩及舒张末期左室后壁厚度、室间隔厚度均显著增加,Z组上述指标明显改善(P均<0.01),第12周时K组射血分数显著降低,Z组显著增加(P均<0.01);③K组中,Mas基因及蛋白水平第8周时上调,第12周时下调,与K组相比,Z组第8周时明显下调,第12周时明显上调(P均<0.01);K组中ACE2基因及蛋白水平第8周时上调,第12周时无显著变化,与K组相比,Z组第8周时上调,第12周时显著下降(P<0.01);结论:2K1C法成功复制肾血管性高血压大鼠模型,并致高血压性心脏改变;佐芬普利不仅能显著降低肾性高血压大鼠血压,还能改善心肌重构,上调肾脏组织中Mas基因与蛋白水平,下调ACE2基因及蛋白水平。

高效液相色谱法测定佐芬普利原料药的含量

建立了用高效液相色谱法测定佐芬普利原料药的含量方法。色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(15 cm×4.6 mmLD);流动相:甲醇-0.01 mol/L盐酸(70:30);流速为1.0 ml/min;柱温37℃;检测波长230 nm.结果表明:佐芬普利含量在15μg/ml^1 500μg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7);平均回收率为100.03%,RSD为0.43%.该方法准确、可靠、重现性好,可用于佐芬普利原料药的含量测定和质量控制。

佐芬普利钙片治疗原发性轻中度高血压的疗效和安全性

目的：评价佐芬普利钙片治疗原发性轻中度高血压的疗效和安全性。方法：采用随机双盲对照研究，设马来酸依那普利片为对照药物。随机入选病人共47例，佐芬普利组23例，依那普利组24例。两组分别服用佐芬普利15．0～30．0mg和马来酸依那普利10．0—20．0mg，两药用法均为每日1次，共8周。结果：与治疗前相比，治疗8周后佐芬普利组收缩压和舒张压分别下降6．72mmHg和9．64mmHg（P〈0．05），依那普利组分别下降为5．03mmHg和9．06mmHg（P〈0．05），均有统计学意义。佐芬普利组和依那普利组均无严重不良事件发生，佐芬普利组可能与药物相关的不良事件1例，依那普利组6例，有统计学差异（P〈0．05）。结论：佐芬普利15～30mg每日服用1次，可以显著地、平稳地降低血压，患者耐受性好。

佐芬普利对大鼠肥大心肌细胞血管紧张素转换酶2及Mas受体的影响

目的观察佐芬普利对大鼠肥大心肌细胞ACE2和Mas受体的影响。方法原代培养大鼠心肌细胞,随机分为3组:正常组、模型组、实验组。模型组与实验组以去甲肾上腺素干预,致细胞肥大;48 h后,实验组加佐芬普利干预。RT-PCR法检测正常组、模型组的心肌细胞脑钠肽(BNP)mRNA水平及各组ACE2和Mas mRNA表达水平,Western blotting技术检测两者蛋白表达水平。结果去甲肾上腺素诱导48 h后,体外培养的心肌细胞BNP mRNA水平较正常组显著升高(P<0.01);与正常组相比,模型组心肌细胞ACE2和Mas mRNA及蛋白水平无明显变化(P>0.05)。实验组较模型组ACE2显著升高(P<0.01),Mas轻度升高(P<0.05)。讨论去甲肾上腺素成功诱导心肌细胞肥大,佐芬普利逆转心肌肥厚作用,可能与其上调心肌细胞ACE2和Mas受体表达有关。

佐芬普利对肾血管性高血压大鼠肥厚心肌血管紧张素转换酶2/血管紧张素(1-7)/Mas与转化生长因子β_1水平的影响

目的研究肾血管性高血压大鼠肥厚心肌中血管紧张素转换酶2(ACE2)/血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]/Mas轴及转化生长因子β1(TGF-β1)的变化,探讨佐芬普利改善其心肌肥厚的机制。方法清洁级雄性SD大鼠68只,分为假手术组(n=18)和模型组(n=50)。模型组用两肾一夹法制备高血压模型。术后4周末,将成功造模大鼠随机分为模型组(n=22)和佐芬普利组(n=22)。佐芬普利组以佐芬普利10mg/(kg·d)灌胃;术后8、12、14周末,测量血压,行心脏超声观察心脏结构及功能,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测动脉血清Ang(1-7)及TGF-β1水平,RT-PCR检测心肌细胞ACE2、Mas及TGF-β1 mRNA水平,Western blot检测ACE2及Mas蛋白水平。结果①模型组大鼠收缩压升高,室间隔厚度、左心室后壁厚度增加,佐芬普利组血压降低,心室肥厚改善(均P<0.01)。②与假手术组比,模型组大鼠动脉血清Ang(1-7)水平在8、12周时较高;与模型组相比,佐芬普利组Ang(1-7)水平8周时较低,12、14周时较高。③术后8、12、14周,模型组动脉血清TGF-β1水平均高于假手术组和佐芬普利组[8周:(22.03±1.09)比(14.22±1.24)比(16.29±1.41);12周:(23.95±1.41)比(14.26±1.28)比(14.39±1.38);14周:(25.91±1.59)比(13.98±1.07)比(14.48±1.52)ng/L;均P<0.01]。④与假手术组和佐芬普利组比较,模型组大鼠心肌Mas、ACE2mRNA及蛋白水平8周时较高,12、14周时较低(均P<0.01)。结论佐芬普利明显降低肾血管性高血压大鼠的血压,改善左心室肥厚,并与其抑制血清Ang(1-7)水平及组织Mas、ACE2基因与蛋白水平下调,抑制血清及心肌TGF-β1水平上调有关。

柱前衍生化GC测定佐芬普利钙中间体光学杂质

目的建立测定佐芬普利钙中间体（S）-（？）-3-苯甲酰巯基-2-甲基丙酸的光学异构体杂质（R）-（＋）-3-苯甲酰巯基-2-甲基丙酸含量的柱前衍生化GC。方法以高纯试剂D-（＋）-2-辛醇对（S）-（？）-3-苯甲酰巯基-2-甲基丙酸样品进行衍生化处理,衍生产物以Agilent DB-1701（30 m×0.53 mm,1.0μm）柱为分析柱,以氮气为载气,流速为2.0 m L·min-1,检测器温度为250℃,进样口温度为200℃,柱温为程序升温,进样量为1.0μL。结果光学杂质（R）-（＋）-3-苯甲酰巯基-2-甲基丙酸在3.22～121.44μg·m L-1内线性关系良好（r=0.995 2）,定量限为3.22μg·m L-1,加样回收率为99.6%～102.4%,日内和日间精密度RSD均〈2.0%。结论该方法操作简便、专属性强,试剂成本低廉、易得,结果准确性高、重复性好,可用于佐芬普利钙中间体（S）-（-）-3-苯甲酰巯基-2-甲基丙酸光学杂质的含量测定。