金黄仓鼠卵子冷冻及在人精子受精能力检测中的应用

通过对比试验，筛选出含３．０％牛血清白蛋白的ＢＷＷ培养基和２·０ｍｏｌ／Ｌ最终浓度的二甲基 亚砜（ＤＭＳＯ）冷冻保护剂配制成冷冻液，将金黄仓鼠卵以０．３－１·０℃／ｍｉｎ的冷冻速率分别降温至 －４０℃和－８０℃，再浸入液氮中冷冻保存（３～３１天）。结果表明：冷冻降温速率以０·３℃－０·５℃／ｍｉｎ 为宜，降温到一８０℃浸入液氮的冻卵存活率（６３％）比－４０℃（４６％）的高。将解冻后存活卵去除 透明带，与人获能精子进行体外穿透试验，穿卵率达３４． ４％，与新鲜卵对照组（５０％）相比，无统 计学差异（Ｐ＞０·０５）；扫描电镜观察结果与压片光镜观察相吻合。

金黄地鼠卵母细胞4℃保存的研究

去透明带地鼠卵穿透试验（ＨＯＰＴ）是评价人精子受精能力的有效模型。本文探讨４℃冷保存金黄地鼠卵母细胞的可穿透性。结果表明，与对照组的穿透率（４３．９４±３０．０５％）比较，冷保存２４小时卵子的穿透率（４１．４９±２５．９６％）没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），冷保存４８小时卵子的穿透率（２４．２５±１７．１８％）显著下降（Ｐ＜０．０１）；冷保存４８小时３２％的卵子呈现多种老化现象；去除卵透明带后不利于冷保存。提示４℃保存２４小时的卵子可应用于ＨＯＰＴ。

人精子穿去透明带金黄地鼠卵实验和精子DNA完整性检测在体外受精-胚胎移植中的应用

目的:探讨人精子穿去透明带金黄地鼠卵实验(SPA)和精子DNA完整性检测在体外受精_胚胎移植术(IVF_ET)助孕中的应用价值。方法:选择兰州大学第一医院生殖医学研究中心,行IVF_ET助孕的不孕不育夫妇中的41名男性,根据不孕不育原因分为完全男方因素引起的不孕不育组(n=20)和完全女方因素引起的不孕不育组(n=21),比较分析两组男方年龄、穿透率、受精指数、IVF受精率、DNA碎片率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎着床率及临床妊娠率的差别。结果:完全男方因素引起的不孕不育组和完全女方因素引起的不孕不育组之间,在男方年龄、IVF受精率、卵裂率、胚胎着床率、临床妊娠率等方面的差异均无统计学意义(P均>0.05),在穿透率、受精指数、DNA碎片率方面的差异均具有统计学意义(P<0.05);前者的SPA穿透率与IVF受精率、卵裂率和优质胚胎率之间均存在显著正相关(r=0.908,0.55,0.852,P均<0.05),DNA碎片率与IVF受精率和优质胚胎率均存在显著负相关(r=-0.636,-0.634,P均<0.05);后者SPA穿透率与IVF受精率、卵裂率和优质胚胎率之间均存在显著正相关(r=0.893,0.53,0.626,P均<0.05),DNA碎片率与IVF受精率和优质胚胎率之间均存在显著负相关(r=-0.636,-0.634,P均<0.05)。结论:SPA和精子DNA完整性检测在辅助生殖技术中可能具有一定的应用价值。

比较金黄地鼠和人卵浆内单精子注射技术受精率

卵浆内单精子注射技术（ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｓｐｅｒｍｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＩＣＳＩ）１９９２年后已广泛应用于治疗严重的男性不孕患者，平均受精率可达６５％～７０％。但仍有大约１／３的卵在ＩＣＳＩ后未能受精。金黄地鼠ＩＣＳＩ试验（ｈａｍｓｔｅｒＩＣＳＩａｓａｙ）可能有助于在临床ＩＣＳＩ治疗前了解精子受精的潜力。为了证明金黄地鼠ＩＣＳＩ和人类ＩＣＳＩ受精率之间的相关性，探索金黄地鼠ＩＣＳＩ能否用为临床ＩＣＳＩ的预试验，本研究采用同一男性不孕患者的精子经显微注射技术在同一天分别注入人和金黄地鼠卵。１６～１８小时后在光镜下观察有无双原核形成（２ｐｒｏｎｕｃｌｅｕｓ，２ＰＮ）。人卵１１０个其受精率为５８２％（６４／１１０）。金黄地鼠卵１１４个其受精率为１６５％（１４／８０）。经统计学处理，二者无相关性。金黄地鼠ＩＣＳＩ分为两组，Ａ组：无选择地注射了已激活与未激活的卵６３个；Ｂ组：注意选择未激活的卵共５１个。虽经统计学处理无明显差异，但仍可看出Ｂ组的损伤率（１９７±１６６％）低于Ａ组（３５９±５．７％）（Ｐ＝００８）；而Ｂ组的受精率（１８３±１０．９％）略高于Ａ组（１４２±８．７％）（Ｐ＝０?

精索静脉曲张不育患者术后未育者精子穿卵率的远期观察

目的 :对精索静脉曲张不育患者术后未育者的精子穿卵率作远期观察。方法 :1双侧经髂窝或经腹腔镜精索静脉高位结扎术 ;2人精子去透明带地鼠卵穿透试验 (SPA)。结果 :2 9例精索静脉曲张不育患者 ,术后 1 .5～ 2年随访仍未育 ,作 SPA,与术前 SPA穿卵率对比 ,精索静脉曲张 °组 (n=1 7)有 7例改善了穿卵率 ,精索静脉曲张 °组 (n=1 2 )有 2例改善了穿卵率。但两组穿卵率的升高幅度不大。结论 :精索静脉曲张不育患者术后较长时间仍未育者 ,虽部份患者的精子穿卵率已有改善 ,但穿卵率的增加程度不高。术前精索静脉曲张严重的患者 ,术后可能难以提高穿卵率。应建立 SPA对患者术后精子受精能力作评估 ,以及时调整治疗措施。

自然流产妇女的丈夫精子染色体分析

应用人精子与去透明带金黄地鼠卵受精技术制备人精子染色体标本。对１０例有自然流产史妇女的丈夫共２３０个精子核型进行了分析，并与正常可育男性的２１０个核型对照。结果显示，流产组的精子染色体数目异常率为３９％，与正常组相比（２８％），两者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；但流产组中结构异常的断裂和无着丝粒断片的比率（６０％；９５％）显著性高于对照组（２５％；２８％）。

二十碳四烯酸对转基因中国仓鼠卵母细胞hKv1.5钾通道电流的作用

目的观察二十碳四烯酸对转基因中国仓鼠卵母细胞(CHO细胞)hKv1.5钾通道电流的影响。方法把hKv1.5钾通道基因转入CHO细胞膜中表达,给予不同浓度的ETYA,用全细胞膜片钳技术引出电流并观察不同电压条件下hKv1.5钾通道电流的变化情况。结果ETYA对hKv1.5稳态电流有明显的可逆性抑制作用,且具有浓度依赖性和电压依赖性。ETYA对hkv1.5通道电流的抑制系直接作用于通道而产生,并非影响脂氧合酶的活性而起作用。结论ETYA对hKv1.5钾通道电流有抑制作用。

Observation on Sperm Penetration Rate of Infertile Men with Varicocele at 1.5 to 2 Years after Varicolectomy

Objective To observe the sperm penetration rate among treated but 'unsuccessful' infertile men with varicocele Material & Methods Twenty nine infertile males with II°(n=17) or III°(n=12) varicocele were enrolled into this study. They underwent a varicolectomy, but their spouses had not achieved a pregnancy after 1.5~2 years of treatment. The sperm zona-free hamster oocyte penetration assay (SPA) was used to compare the sperm penetration rate (PR) before treatment and 1.5~2 years after treatment. Results After varicolectomy, enhanced PR were observed in 7 cases of the II°group and in 1 case of the III°group. However, the PR values of these 8 cases were still below 20% PR-level. Conclusion Among the treated but 'unsuccessful' men, some patients could obtain improvements on PR after varicolectomy. But PRs of men with III°grade varicele would still remain a low PR-level which indicate varicolectomy is ineffective in increasing PR among part of sever varicocele patients. SPA is a useful test for evaluating the fertilizing potential of treated infertile males with varicocele.

人精子诱变检测中新体外代谢活化系统的研究

人精子与去透明带金黄地鼠卵受精，在受精后异合卵培养阶段，用终浓度分别为２０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ的间接诱变剂环磷酰胺进行处理，继而制备精子染色体进行核型分析。得到环磷酰胺诱发的染色体畸变精子率在上述剂量组依次为３３％、５０％、３３％；断裂均数依次为０．５４、１．９４和０７２。与空白对照组比较，差异具有显著性（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜００１）。本研究结果表明，用人精子／金黄地鼠异合卵为靶细胞，能够检出间接诱变剂的诱变性。异合卵内源性代谢活化体系的发现和应用在哺乳动物配子的毒理遗传研究中具有重要意义。

东莞市不育男性精子功能检查参数的分析

目的：分析东莞地区不育男性患者精子功能相关检查结果。方法随机选取本院25～44岁300例诊断为男性不育患者（不育组）与200名正常生育男性（对照组）精液标本，比较两组精子形态学分析、顶体酶定量、精子DNA碎片检测及进行去透明带仓鼠卵人精子穿透实验的受精指数的差异，并将各项指标与不育进行相关性分析。结果不育组精子正常形态百分率（3.00±2.30）%，对照组精子正常形态百分率（8.00±4.30）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。不育组精子顶体酶活性为（69.40±31.50）μIU/106精子，对照组精子顶体酶活性（93.50±32.70）μIU/106精子，差异有统计学意义（P＜0.05），不育组DNA碎片率（20.94±1.00）%，对照组DNA碎片率（11.27±0.79）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。不育组与对照组中去透明带仓鼠卵人精子穿透实验受精指数差异无统计学意义（P＞0.05）。各种检查结果与不育的相关回归分析结果是，精子正常形态率与不以呈负相关（r=-0.823，P＜0.05）、顶体酶活性与不育呈负相关（r=-0.723，P＜0.05），与不育呈正相关的有头部畸形率（r=0.894，P＜0.05）、DNA碎片率（r=0.778，P＜0.05）。结论精子形态分析、顶体酶活性、精子DNA碎片检测是检测精子功能的有效指标。精子正常形态率、顶体酶活性与不育呈负相关关系，与不育正相关的有头部畸形率、DNA碎片率。

DNA诱发损伤的修复与染色体畸变的研究——咖啡因对人精子染色体的影响

应用人精子去透明带卵异种体外受精技术，对第１次卵裂中期相的染色体畸变进行分析。实验分为对照、咖啡因后处理、丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）预处理、ＭＭＣ预处理同时加咖啡因后处理４个组。咖啡因组、ＭＭＣ组和ＭＭＣ＋咖啡因组染色体结构畸变精子率依次为２７．０％，２３．０％和４５．０％；断裂均数依次为０．７２，０．６０和１．６５，各组上述参数均高于空白对照组（８．０％，０．１４），差异非常显著（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。与ＭＭＣ组和咖啡因组相比较，ＭＭＣ＋咖啡因组诱发的染色体型和染色单体型畸变均明显增加，以染色体型畸变增加更为明显（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。结果显示，咖啡因可诱发人精子染色体畸变并能通过抑制金黄地鼠卵母细胞的复制前和复制后修复系统，有效地增强ＭＭＣ对人精子染色体的诱变效应。

精子-去透明带仓鼠卵穿透试验与精液分析主要参数的关系

目的 了解精液分析 (SA)与精子 -去透明带仓鼠卵穿透试验 (ZHOT)检测结果的关系 ,以评价此两种实验方法对评估男性生育力的临床实用价值。方法 对 2 2例男性不育症患者作了SA和ZHOT(改良的Yanagimachi方法 )的检测 ,并对SA主要参数指标的检测结果与ZHOT的检测结果 (穿卵率 )进行统计分析。结果 ZHOT之穿卵率与SA主要参数 :精子密度、正常形态精子百分率间有显著的正相关 (P <0 0 5 ) ,与a ,b级活动精子百分率间则有非常显著的正相关 (P<0 0 1)。另外 ,以ZHOT检测结果正常与否分成之两组间其SA主要参数的检测结果间差异均有显著性 (t检验 ) ,其中a ,b级活动精子百分率之差异最为显著 (P <0 0 0 1)。结论 改良的Yamagimchi精子 -去透明带仓鼠卵穿透试验确实能比较好的综合反映精液的质量 ,但因其方法较复杂 ,设备要求较高 ,精液分析仍应是一般临床单位评估男性生育力的首选实验室方法。特别是其中精子活动力的测定对男性生育力的评估更具临床实用价值。

人精子单倍染色体标本制备技术的研究

利用去透明带金黄地鼠卵与人精子受精后，经过受精卵温育，制备出人精子单倍染色体，初期制片成功率４７％。经过改善实验室条件和改进方法学，制片成功率达８７％。本文还对一些技术上的关键问题进行了讨论。

子宫内膜异位症不孕妇女腹腔液对精子运动及穿卵的影响

目的探讨子宫内膜异位症(内异症)性不孕妇女的腹腔液对人精子运动及穿卵率的影响。方法将行诊断性腹腔镜检查的不孕妇女40例分为内异症组20例,根据r-AFS分期:早期(Ⅰ?Ⅱ)12例,晚期(Ⅲ?Ⅳ)8例,对照组20例为其它原因不孕者,酶标双抗体夹心法(ELISA)测定两组患者腹腔液肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;正常人精液按1∶1比例和两组腹腔液共同孵育,测定精子运动参数(平均曲线速度、平均直线速度、平均路径速度、直线前向运动百分率)和去透明带地鼠卵穿透试验的变化。结果内异症组腹腔液TNF-α含量高于其它原因不孕组(P<0.05),且晚期内异症组的TNF-α又明显高于早期患者(P<0.05);内异症组四项精子运动参数指标均低于对照组,与TNF-α含量呈负相关(P<0.05);内异症组穿卵数值明显低于对照组(P<0.05)。结论体外观察内异症不孕患者腹腔液对精子活力及穿卵受精能力有明显抑制作用,内异症患者腹腔液内TNF-α值升高与疾病程度正相关,可能是导致不孕的机理之一。

去透明带地鼠卵穿透试验与人工授精受孕率关系的临床研究

对１１８对不孕夫妇，拟采用ＩＵＩ前用ＨＯＰ系统检测男方精液，并以精子穿卵率为指标进行分组，统计ＩＵＩ的受孕率。结果：１１８例的４１２个治疗周期中，第一组：穿卵率≥１５％的患例，ＩＵＩ受孕率为４２％；第二组：１０％≤穿卵率＜１５％的患例，ＩＵＩ受孕率为１３％；第三组：穿卵率＜１０％者，ＩＵＩ受孕率为２％。第一组与第二、三组间其受孕率有明显差异，经统计学检验有显著意义（Ｐ＜０．００５）。结果表明，采用ＨＯＰ作为ＩＵＩ病例筛选指标，提高ＩＵＩ的成功率，对不孕症病因诊断与治疗具有重要的临床实用价值。

piRNA通路在哺乳动物雌性生殖中具有不可或缺的功能

piRNA是一类非编码小RNA,它在生殖细胞中针对基因组行使"免疫系统"的功能,抑制转座元件,维持基因组的稳定性。已有的研究表明,piRNA在模式动物果蝇和斑马鱼的两性生殖,以及小鼠的雄性生殖中都是必需的,但对小鼠的雌性生殖却是非必需的,因此形成了piRNA对哺乳动物的雌性生殖不重要的默认共识。该团队通过建立单细胞小RNA测序技术,描绘了多种哺乳动物卵细胞中小RNA的表达谱,发现了小鼠卵细胞中无论是Piwi基因还是piRNA的组成类型和表达特征在哺乳动物中均不具有代表性。该团队以piRNA表达情况更接近人类的金黄地鼠为模型,重新研究了piRNA通路在哺乳动物中的功能,发现了piRNA通路关键基因被敲除后雄性和雌性的生殖都受到了严重的影响,与非哺乳动物中的表型一致。上述发现不仅为深入研究piRNA通路在高等动物卵细胞发生和早期胚胎发育中的功能和机制提供了新的切入点,更重要的是为研究piRNA通路相关基因突变与女性生殖障碍的关联,并针对性地开发新的治疗方法提供了重要的动物模型。

^（60）Coγ射线离体照射人精子诱发染色体畸变的研究

本文作者用６０Ｃｏγ对线对一名健康男性的精液样本照射处理，与去透明带地鼠卵受精制备精子染色体核型，研究离体照射诱发的人精子染色体畸变。结果表明：在０．００，１．０１，１．８１和２．９９Ｇｙ剂量点的结构畸变精子率和结构畸变率（Ｙ）均与照射剂量（Ｄ）呈非常显著正相关，回归式分别为Ｙ＝６．６２＋１６．１１Ｄ和Ｙ＝５．７５＋２７．３３Ｄ，精子染色体以染色体型和断裂型畸变为主，分别是单体型和互换型畸变的１１倍和８倍。结果提示：染色体严重受损的精子仍保持较高的受精能力。