论藏药“佐太(汞制剂)”的工艺发展历程及研究现状

佐太(汞制剂)是藏药类的珍宝,享誉“众药王”之称,具有治疗疾病、解毒、养生补养、增效等作用,以“佐太”为核心成分的珍宝类藏药复方在临床使用广泛。本文通过搜集与整理藏医药经典著作及近年来的研究文献,梳理了“佐太”炮制方法的发展历程及其现代应用研究进展。佐太炮制,主要有三个代表性的方法,分别为宇妥·元丹贡布(708-833年)所著《四部医典》中的水银炮制法、顿慢逊努嘉措(13世纪)所著《水银炮制经典》中的水银炮制法,以及新中国成立以来大力传授佐太炮制工艺的措如·才朗(1926-2004年)大师的水银炮制法。此外,研究人员从现代药物理化、药代动力学和毒理学等方面对“佐太”开展了大量研究。本文综述了藏医药经典古籍中佐太历代的炮制方法及现代药理毒理研究,为深入理解“佐太”的来龙去脉提供重要的参考价值。

藏药“佐太”的研究进展

藏医药是我国重要的传统医学。“佐太”是藏药中最具代表性的炮制品,是用来配制多种珍宝类藏药制剂的主要原料之一,在藏药体系中发挥着重大作用。由于“佐太”成分复杂,含有诸多重金属物质,在现代医学临床的应用和推广受到一定的限制。本研究对近年来有关“佐太”的化学成分、作用机制研究、安全性研究、应用研究进行综述,旨在为“佐太”进一步的研究提供参考。

藏药佐太的化学成分、汞配位结构及微观形貌分析

佐太是一种古老的传统藏药,由水银、硫磺、八金、八矿等原辅料炮制而成,主要用来配制多种珍宝类藏药制剂。佐太作为含重金属藏药的典型代表,安全性与有效性一直备受质疑,而探明佐太的精确理化表征,则是科学阐释该疑问的重要切入点。该研究采用X射线能谱（EDX）、X射线荧光谱（XRF）、同步辐射X射线吸收精细结构（XAFS）、X射线衍射（XRD）、扫描电子显微镜（SEM）、原子力显微镜（AFM）,对佐太的元素组成、汞的化学价态与配位结构、物相成分与空间结构、微观形貌进行系统分析。EDX和XRF结果发现,佐太中主要元素为Hg和S,另外还有少量的O,Fe,Al,Cu,K,Ag,Ca,Mg等元素。XAFS分析发现,佐太中Hg是以正二价形式存在,配位数为4,配位原子为S。XRD结果发现,佐太中存在立方晶系β-HgS（空间群为F-43m216）、斜方晶系单质硫S8（空间群为Fddd 70）,以及少量的六方晶系C（空间群为P63/mmc 194）、六方晶系Fe1.05S0.95（空间群为P63/mmc1 94）、六方晶系Cu6S6（空间群为P63/mmc 194）、立方晶系Cu1.8S（空间群为F-43m216）等;另还发现,佐太的结晶度约为59%,无定型态物质约占41%。SEM和AFM分析发现,佐太应为古代微纳米药物,其微粒多在100~600nm,并有不少低于100nm,这些微粒常堆聚成1~20μm松散的无定型态颗粒。本研究探明了佐太的元素组成、汞的配位信息、物相成分和微观尺寸特征等,对科学解读神秘藏药——佐太的生物效应具有重要的启发。

藏药佐太中的汞在大鼠体内吸收和排泄的初步研究

目的以藏药佐太主要成分汞为研究对象,初步探讨其在大鼠体内的吸收和排泄情况。方法采用微波消解技术和原子荧光光度计测定血清、肝脏组织、肾脏组织、尿液和粪便中的汞含量。结果实验1组和实验2组大鼠分别连续给予佐太7 d和21 d后,血清中汞含量较低,肾脏组织中汞含量显著增多;实验1组大鼠肝脏组织中汞含量显著增多,但实验2组显著减少;实验组大鼠尿液中检测到的汞较少,粪便中检测到大量的汞。结论佐太中的汞在大鼠体内吸收较少,主要通过粪便排出体外,长期使用在肾脏有蓄积现象。

藏药佐太中汞的长期蓄积性实验研究

目的探索KM小鼠以临床等效剂量长期给予佐太后汞在体内的蓄积情况,为佐太复方制剂临床用药安全提供科学依据。方法 KM小鼠分为空白组和给药组,给药剂量为每天6.67 mg.kg-1bw,给药4.5个月,停药1.5个月。分别于给药前、给药后0.5个月、1个月、1.5个月、2个月、2.5个月、3个月、3.5个月、4个月、4.5个月、停药0.5个月、停药1个月和停药1.5个月13个时间点采集血液、肾、脑、肝、脾,并检测汞含量。结果与空白组比较,给药组小鼠的肾脏中汞含量变化显著,在给药1.5个月后开始升高为38.24 ng/g,到3个月时达到最高值84.68 ng/g,停药1.5个月后逐渐恢复至正常水平31.46 ng/g;脑组织中汞含量在给药2个月后开始升高为23.60 ng/g,至4.5个月一直高于空白组,但数据呈波动状态,和空白组比较无统计学差异。血液、肝脏、脾脏中汞含量给药组较空白组变化不显著,停药0.5个月后汞含量接近空白组值。结论 KM小鼠长期给予临床等效剂量佐太后,汞在肾脏中产生一定蓄积,脑组织中的汞含量略高于空白组,血液、肝脏和脾脏中汞蓄积不明显,停药后各器官中的汞含量均可逐步恢复至正常水平。

藏药佐太对秦艽中龙胆苦苷药物动力学的影响

目的探讨藏药佐太对秦艽中龙胆苦苷在家兔体内的药动学特征的影响。方法对照组家兔给予龙胆苦苷提取液、实验组家兔给予龙胆苦苷和佐太的混合溶液后,采用RP-HPLC法测定给药后其血浆中的龙胆苦苷,DAS2.0软件计算各组家兔血浆中龙胆苦苷的药动学参数。结果对照组、实验组的家兔血浆中主要药物代谢动力学参数T1/2分别为1.66±0.32、1.74±0.39h,AUC0-t分别为99.84±28.36、86.35±4.53μg·h·ml-1,Cl分别为0.46±0.13、0.50±0.09L·h-1·kg-1,Vd分别为1.10±0.39、1.24±0.25L·kg-1,MRT分别为2.88±0.16、2.83±0.13h。两组的主要药动学参数无显著性差异。结论单次给予佐太对家兔龙胆苦苷的药动学特征无影响。

藏药佐太中汞在小鼠体内的蓄积

目的探索给予KM小鼠不同剂量和不同时间的佐太后,汞在体内的蓄积情况。方法 KM小鼠随机分为空白组,佐太低、中、高剂量组(42 d,6.07、60.70、606.97 mg/kg;14 d,606.97 mg/kg),给药后,测定小鼠脑(嗅球、皮层、海马、下丘脑、脑干、小脑)、心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、血清、肌肉中汞含有量。结果与空白组相比,给予42 d低剂量佐太后,能够显著增加小鼠海马、小脑、肺脏、肾脏、肝脏、血清中汞含有量;给予42 d中剂量佐太后,能够显著增加小鼠嗅球、皮层、海马、脑干、小脑、心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、血清中汞含有量;给予42、14 d高剂量佐太后,能够显著增加小鼠嗅球、皮层、海马、下丘脑、脑干、小脑、心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、肌肉、血清中汞含有量。结论小鼠灌胃佐太后,汞在不同组织中产生蓄积,且表现出剂量和时间依赖性,提示佐太及其复方制剂不宜过量、长期使用。

佐太、β-HgS、HgCl_2对PC12细胞活性和凋亡相关基因表达影响的比较

目的比较佐太、β-HgS、HgCl_2对PC12细胞活性和凋亡相关基因表达的影响。方法 MTT法测定3种药物对细胞活性的影响,实时荧光定量PCR法检测Bax、Bak、Bcl2、Fas、FasL表达。结果 0.250 g/L佐太作用2 h后细胞活性下降约10%,等汞量β-HgS使其下降12%左右,而含汞量只有佐太1/10的HgCl_2却导致其下降约70%;佐太降低Bax、Bak、Bcl-2、FasL表达,β-HgS降低Bax、Bak、Fas、FasL表达,HgCl_2降低Bcl-2表达而增加Fas、FasL表达。结论佐太、β-HgS对PC12细胞的毒性远小于HgCl_2,两者可能对细胞中线粒体凋亡通路的激活有抑制作用,而HgCl_2可能通过激活死亡受体通路诱导细胞凋亡。

藏药珠西的化学成分与结构分析

采用X射线荧光(XRF)、电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)和X射线衍射(XRD)对不同来源藏药珠西中的元素成分和结构组成进行测定,以期揭示其药理作用的物质基础。XRF和ICP-OES分析结果表明,藏药珠西中主要元素为Fe,S和O,及少量的Si,Na,Mg,Al,K,Ni,Ca,Ti等元素。XRD分析表明,藏药珠西中主要存在立方晶系FeS2,此外还含有少量的斜方晶系Fe+3O(OH)等。通过XRF,ICP-OES和XRD分析,获得了藏药珠西的化学成分和结构组成基本数据,为其药理作用物质基础的揭示和质量标准的制定提供了科学依据。

藏药佐太在两种抑郁小鼠模型中的抗抑郁活性

目的通过行为绝望模型—悬尾实验(TST)、不可预测性慢性温和应激(CUMS)模型,探索藏药佐太(硫化汞、硫磺等煅制品的混合物)的抗抑郁作用。方法行为绝望模型—悬尾实验中,KM小鼠给予佐太14 d后,通过测定悬尾实验不动时间、开场实验(OFT)、血清中皮质酮(CORT)变化,评价佐太的抗抑郁活性。构建CUMS模型KM小鼠,给予佐太42 d,通过糖水偏好实验、开场实验和强迫游泳实验,进一步评价佐太的抗抑郁作用。通过ELISA法测定小鼠血清中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)和海马中脑源性神经营养因子(BDNF)的水平。结果行为绝望模型—悬尾实验中,与空白组相比,佐太在剂量为60.697、303.49 mg/kg时能显著降低小鼠悬尾不动时间和血清中CORT水平。CUMS模型实验中,与CUMS模型组相比,佐太在剂量为6.069 7、60.697、606.97 mg/kg时,均可显著提高受试小鼠的糖水偏好率、开场实验中的自主活动,同时可显著降低强迫游泳实验(CFST)中的不动时间,表明佐太能缓解慢性应激引起的抑郁样行为。另外,佐太在上述3个剂量下,可显著增加CUMS模型小鼠血清中NE和海马中BDNF的水平,并在剂量为6.069 7、60.697 mg/kg下,可显著增加CUMS模型小鼠血清中5-HT的水平。结论藏药佐太在行为绝望模型和CUMS模型小鼠中表现出一定的抗抑郁活性,可能是通过降低CORT,提高5-HT、NE、BDNF的水平而发挥作用。

藏药佐太的研究现状与进展

藏药佐太是一种古老的传统藏药,由水银、硫黄、八金、八矿等原辅料炮制而成。佐太含有汞、金、银、铅、铜、铁等多种金属,是藏药中重金属元素的主要来源,也是配制名贵藏成药的贵重原料,现代医药迫切需要对其临床合理应用进行深入研究。本文对近年来有关佐太的研究进行全面的分析和总结,从制备工艺、化学成分、药效学、药代动力学、毒理学、质量标准及临床应用等方面进行了综述。

藏药“佐太”长期给药对大鼠肾脏潜在氧化损伤的初步研究

目的:初步探讨长期给予藏药"佐太"对大鼠肾脏可能存在的氧化损伤,以期揭示藏药"佐太"长期用药对肾脏可能存在的过氧化毒性作用,为"佐太"制剂在临床上的安全合理使用提供一定的理论依据。方法:将120只SD大鼠随机分为空白对照组和藏药"佐太"高、中、低剂量组,通过对大鼠给予"佐太"混悬液90天、180天及停药恢复30天,对动物进行一般观察,检测大鼠肾脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,计算其肾脏系数并进行肾组织病理学检查。结果:连续给药"佐太"90天、180天及停药30天后,与空白对照组比较,藏药"佐太"各给药组大鼠外观体征、行为活动、进食及排便情况均无明显异常,各给药组大鼠肾脏中MDA含量、SOD活性、肾脏系数及肾组织病理学与空白对照组比较均无明显差异(P>0.05)。结论:推测长期使用藏药"佐太"对大鼠肾脏不产生明显的氧化损伤和肾脏毒性作用,但其安全性问题仍然需要广泛而深入地研究。

比较佐太、朱砂与汞化合物对胎、幼、孕和老年鼠的肾脏毒性

目的比较佐太、朱砂和汞化合物对胎、幼、孕和老年鼠的肾毒性。方法采用孕19 d的胎鼠、母孕鼠、刚断奶的幼鼠和15月的老年鼠(均为SD大鼠),口服给于藏药佐太(30 mg/kg)、朱砂(Hg S,30 mg/kg),以及等汞量的氯化汞(Hg Cl_2,33.6 mg/kg)和1/10等汞量的甲基汞(Me Hg,3.1 mg/kg),连续7 d,观察动物的体重和一般情况,末次给药24 h后取肾脏,观察肾病理改变、肾汞蓄积和肾脏中肾损伤因子Kim-1 mRNA的表达。结果连续给予佐太和朱砂7 d后,大鼠未见明显异常,而氯化汞组体重明显下降(P<0.05)。氯化汞引起明显肾汞蓄积,甲基汞组大鼠也有所升高。而佐太组和朱砂组仅轻微增加。母孕鼠和老年鼠氯化汞组的肾损伤尤为明显,甲基汞组也出现肾损伤,而佐太和朱砂未见明显肾病理改变。肾脏毒性敏感基因Kim-1的表达表明,氯化汞组Kim-1的表达显著升高(P<0.05),只有Hg S 1/10等汞量的甲基汞也有所升高,而佐太和朱砂与对照组无明显差异。胎鼠对汞毒性不敏感,幼鼠轻度敏感,母孕鼠中度敏感,而老年鼠显著敏感。结论在等汞量的基础上,藏药佐太和朱砂的肾毒性远小于氯化汞和1/10等汞量的甲基汞;汞化合物的毒性随鼠年龄而异,胎鼠和幼鼠不敏感,成年孕鼠尤其老年鼠易受汞所致的肾毒性。

藏药佐太中碳的化学与结构分析

研究了藏药佐太中的碳的含量、存在形态与结构。分别采用X射线光电子能谱、X射线衍射、红外光谱、拉曼光谱、扫描电镜和热失重等手段对佐太进行了分析,发现佐太中含有49.7%的碳,其主要存在形式为无机形态,结构主要特征为氧化石墨。说明在佐太制备过程中加入的有机物基本上转化为了氧化石墨。

经典藏药佐太对15种人源肿瘤细胞系的体外增殖抑制研究

为了探索经典藏药佐太对人源肿瘤细胞系的体外抑制作用,文章选用11种临床常见癌症(肝癌、乳腺癌、胃癌、肠癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胶质母细胞瘤、肾癌、皮肤癌、白血病)15种人源肿瘤细胞系,在体外测定培养基稀释后的佐太5种前处理液(DMSO悬液、未过膜人工胃液浸提液、过膜人工胃液浸提液、未过膜人工肠液浸提液和过膜人工肠液浸提液)对肿瘤细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC_(50))。实验发现培养基稀释的佐太DMSO悬液对肝癌细胞(BEL-7402和SMMC-7721)、乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)、胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)、结肠癌细胞HCT 116、卵巢癌细胞(HO-8910和SK-OV-3)、宫颈癌细胞Hela、肺癌细胞A549、脑星型胶质母细胞瘤U-87 MG、肾透明细胞腺癌细胞786-O、表皮癌细胞A-431和人原髓细胞白血病细胞HL-60的半数抑制浓度(IC_(50))范围为0.094~0.453 mg/mL,小于有效阈值0.5 mg/mL,即有效;其他4种佐太的浸提液尽管对某些肿瘤细胞增殖显示显著性抑制,但是未达到有效阈值。由此初步揭示了佐太5种前处理液对15种人源肿瘤细胞系抑制的差异,其中佐太DMSO悬液具有抗肿瘤潜能,为探索佐太体内抗癌活性提供了重要的体外实验数据支撑。

藏药佐太和甲基汞对神经细胞Neuro-2a毒性的差异比较

【目的】探索藏药佐太和甲基汞对神经细胞Neuro-2a凋亡情况的影响差异.【方法】用磺基罗丹明B法测定细胞存活率,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因表达量的变化.【结果】与空白组相比,随着孵育时间的增加(6、12、24 h),佐太组(1.83 mg/L,含汞1 mg/L)的细胞存活率和细胞形态无显著变化,孵育12 h时细胞凋亡率显著增加,孵育24 h时炎症因子基因IL-6的表达显著增加,对Caspase家族基因和线粒体相关基因的表达影响无显著影响;而甲基汞组(1.25 mg/L,含汞1 mg/L)的细胞存活率由(97.1±0.082)%降至(26.3±0.069)%,细胞形态被破坏程度逐渐加剧,细胞凋亡率随孵育时间的增加而显著增加,且均高于佐太组,炎症因子基因IL-6、IL-1β、TNF-α的表达显著增加,线粒体凋亡相关基因Bcl-2和Bax的比值表达降低,Caspase-3和Caspase-9基因的表达增加.【结论】汞含量相同时藏药佐太对神经细胞Neuro-2a的毒性远小于甲基汞.

佐太及珍宝类藏成药中汞在大鼠体内的蓄积研究

目的:通过给SD大鼠灌胃服用不同剂量和不同时间的佐太及含佐太复方制剂,探索研究血液和主要器官中总汞和不同价态汞的蓄积情况,为临床用药提供参考依据。方法:采用原子荧光法(光电倍增管负高压270 V,原子化器高度10 mm,载气流量400 mL·min-1,屏蔽气流量800 mL·min-1,灯电流20 mA)及高效液相色谱串联电感耦合等离子体质谱法(射频功率1420 W,射频电压1.79 V,载气体积流量1.10 L·min-1,蠕动泵流速0.1 r·s-1,氦反应碰撞模式,Hypersil gold C18色谱柱,柱温30℃,流动相为含0.06 mol·L-1乙酸铵和1 g·L-1半胱氨酸的5%甲醇-水溶液,流速1.0 mL·min-1)测定大鼠血清、血浆、全脑、肝脏、肾脏中总汞及甲基汞、乙基汞、无机汞的蓄积量。将60只SD大鼠随机分为空白组、佐太常剂量短期组(15 d,4.93 mg·kg-1)、常剂量长期组(30 d,4.93 mg·kg-1)、高剂量长期组(30 d,98.60 mg·kg-1)和2个复方制剂组(30 d,15.25~16.66 mg·kg-1),给药完成后测定大鼠血液和主要器官中总汞和不同价态汞的含有量。结果:对照空白组结果,给予15 d常规剂量佐太后,血清、血浆、全脑和肝脏中总汞量有所增加,但无显著性差异,肾脏中总汞含量显著增加;给予30 d常规和高剂量佐太后,全脑、肝脏和肾脏中总汞含量显著增加,血清、血浆中总汞量有所增加,但无显著性差异;给予30 d常规剂量含佐太复方制剂后,肾脏中总汞含量显著增加,血液和其他器官无显著性差异。各组别大鼠血液和主要器官中以无机汞为主,血浆和肾脏中含有少量甲基汞,各部位均未检出乙基汞。结论:大鼠灌胃给予佐太和含佐太珍宝类藏成药后,汞在肾脏、肝脏中和脑组织中产生蓄积,蓄积汞的形态多为二价无机汞,提示服用佐太及含佐太的珍宝类藏成药制剂时应控制剂量和服用周期。

佐太及其主要辅料中无机元素分析

目的测定佐太及其主要辅料中人体必需元素、有害元素及其他元素的含量。方法采用微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定佐太及其主要辅料中各元素的含量。结果佐太及其主要辅料中测得K、Na、Ca、Mg 4种人体必需常量元素和Fe、Ni、V、Co、Mo、Mn、Se、Cr、Sn、Cu和Zn 11种人体必需微量元素,以及As、Al、Pb、Sb、Cd、Tl 6种对人体有害元素。佐太中人体必需元素和其他元素总量均比主要辅料灰中元素总量要少,且有害元素的总量(除汞外)也明显下降。在佐太炮制过程中基于汞的溶解性和揉擦、洗涤、煎煮等工序,作为主要原料的汞单质转化为化合态汞,同时,其他金属的含量有所降低,而汞的总量比Na、K的各大10倍。结论藏药炮制过程中改变了元素存在态,保证了药物安全性。

藏药佐太对药物代谢酶CYP2C11和CYP2D1的活性及蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨佐太对药物代谢酶CYP2C11和CYP2D1活性,以及蛋白和mRNA表达的影响。方法 140只SD大鼠,雌雄各半,随机分为CYP2C11(给予探针药物苯妥英)和CYP2D1(给予探针药物右美沙芬)两大组,每大组设7个小组,为对照组、小剂量单次给药组、小剂量多次给药组、中剂量单次给药组、中剂量多次给药组、大剂量单次给药组、大剂量多次给药组,每小组10只。采用探针药物法测定大鼠给予佐太后药物代谢酶活性的变化;ELISA法测定大鼠给予佐太后药物代谢酶蛋白表达的变化;实时定量PCR法测定大鼠给予佐太后药物代谢酶mRNA表达的变化。结果与对照组比较,单次给予佐太12.0 mg·kg^(-1)后,CYP2C11的活性显著升高105.3%;单次给予佐太3.8 mg·kg^(-1)后,CYP2D1的活性显著升高193.5%;CYP2D1的蛋白表达显著升高84.3%;CYP2D1的mRNA表达显著升高76.4%,其他组无显著性变化。多次给予佐太1.2、3.8、12.0 mg·kg^(-1)后,CYP2C11的活性分别显著升高436.8%、131.6%、226.3%;CYP2C11的蛋白表达分别显著升高88.1%、38.7%、54.2%;CYP2C11的mRNA表达分别显著升高126.8%、135.2%、100.0%;CYP2D1的活性分别显著升高145.2%、71.0%、58.1%;CYP2D1的蛋白表达分别显著升高84.5%、73.7%、33.4%;CYP2D1的mRNA表达分别显著升高118.2%、67.3%、36.4%,其他组无显著性变化。结论藏药佐太对CYP2C11和CYP2D1的活性,蛋白质及mRNA表达均具有显著升高效果,显示佐太在作为合剂时可诱导肝药酶代谢加快。

藏药佐太中单质硫对β-HgS中汞溶出的影响

【目的】研究单质硫对β-HgS在胃肠道条件下汞溶出的影响及机制.【方法】模拟佐太中β-HgS和单质硫的组成,采用体外溶出试验方法,测定β-HgS、β-HgS与单质硫混合物在含或不含L-半胱氨酸的模拟胃、肠液及不同pH条件下溶出的汞浓度,测定β-HgS在不同浓度Na2S,Na2SO3或Na2S2O3的含L-半胱氨酸的模拟肠液中溶出的汞浓度.【结果】单质硫对β-HgS中汞溶出的影响及其与pH、L-半胱氨酸关系的试验表明,单质硫可抑制β-HgS在不含L-半胱氨酸的模拟肠液和含L-半胱氨酸的模拟胃、肠液中汞的溶出;该抑制作用与溶液pH条件有关,与溶液中是否含有L-半胱氨酸关系较小.硫离子形态对β-HgS在含L-半胱氨酸的模拟肠液中汞溶出影响的试验表明,Na2S和Na2S2O3分别在5~50、1000 mg/L下抑制β-HgS中汞溶出的作用与单质硫的抑制作用相似.【结论】单质硫是造成β-HgS在不含L-半胱氨酸的模拟肠液和含L-半胱氨酸的模拟胃、肠液中溶出的汞浓度显著降低的主要因素;单质硫主要通过生成S2-来抑制β-HgS在含L-半胱氨酸的模拟肠液中的汞溶出.