ADAM10在人动静脉内瘘狭窄处血管组织中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨去整合素金属蛋白酶10 (ADAM10)在人动静脉内瘘(AVF)狭窄处血管组织中的表达及其对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:收集42例因AVF狭窄再次接受手术治疗的终末期肾病(ESRD)患者狭窄静脉血管组织(AVF组)及其首次手术的正常静脉血管组织(正常对照组)。采用免疫组织化学法检测2组患者静脉血管组织中ADAM10蛋白表达情况,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组患者静脉血管组织中ADAM10 mRNA表达水平。将VSMCs分为对照组、模型组[脂多糖(LPS)组,给予10 mg·L^(-1)LPS]、LPS+si-NC组(转染si-NC质粒+10 mg·L^(-1) LPS)、LPS+si-ADAM10组(转染si-ADAM10质粒+10mg·L^(-1)LPS)、 LPS+Notch信号通路抑制剂DAPT组(10mg·L^(-1)LPS+10μmol·L^(-1)Notch信号通路抑制剂DAPT)和LPS+si-ADAM10+DAPT组(转染si-ADAM10质粒+10 mg·L^(-1)LPS+10μmol·L^(-1) DATP),CCK-8法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移细胞数,Western blotting法检测各组细胞中ADAM10、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Notch同源蛋白1 (Notch1)、Notch细胞内片段(NICD)和发状分裂相关增强子1 (Hes1)蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,AVF组患者静脉血管组织中ADAM10蛋白表达量明显增加,ADAM10 mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。与对照组比较,LPS组细胞增殖活性和迁移细胞数及细胞中ADAM10、PCNA、MMP-9、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组和LPS+si-NC组比较,LPS+si-ADAM10组细胞增殖活性和迁移细胞数及细胞中ADAM10、PCNA、MMP-9、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与LPS组比较,LPS+si-ADAM10组和LPS+DAPT组细胞增殖活性和细胞迁移数量及细胞中PCNA、MMP-9、 Notch1、 NICD和Hes1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与LPS+si-ADAM10组比较,LPS+si-ADAM10+DAPT组细胞增殖活性和细胞迁移数及细胞中PCNA、MMP-9、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:ADAM10在人AVF狭窄处血管组织中高表达,沉默ADAM10基因表达可抑制LPS诱导的VSMCs增殖和迁移,其作用机制可能与阻断Notch信号通路有关。

血清MMP9、ADAM10联合对类风湿关节炎患者颈动脉粥样硬化的诊断价值

目的 探究血清基质金属蛋白酶9(MMP9)、解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)联合检测对类风湿关节炎(RA)患者颈动脉粥样硬化(CAS)的诊断价值。方法 纳入2021年2月至2022年7月在我院就诊治疗的89例RA患者为研究对象,将RA患者分为合并CAS组(RA-CAS组)和非CAS组(RA-nonCAS组),同期选择50例在我院进行体检健康者为对照组。使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清MMP9、ADAM10水平;Pearson相关性分析患者血清MMP9、ADAM10水平与颈动脉内膜中层厚度(IMT)之间的关系;受试者工作特征曲线(ROC)评估MMP9、ADAM10对RA患者并发CAS的诊断价值;Logistic回归分析RA患者发生CAS的影响因素。结果 3组研究对象在性别、年龄、吸烟史、BMI、TC、TG、HDL、LDL上差异无统计学意义(P>0.05);RA-CAS组和RA-nonCAS组在病程上差异有统计学意义,RA-CAS组患者病程显著长于RA-nonCAS组(P<0.05);与对照组相比,RA-CAS组和RA-nonCAS组IMT值、血清MMP9、ADAM10水平均显著升高(P<0.05),且RA-CAS组显著高于RA-nonCAS组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,RA患者并发CAS血清MMP9、ADAM10水平与IMT值均呈显著正相关(r1=0.568,r2=0.571,P<0.05);ROC曲线显示,MMP9、ADAM10单独诊断RA患者并发CAS的AUC分别为0.879、0.865,灵敏度分别为83.3%、77.1%,特异性分别为66.8%、63.9%,两者联合诊断RA患者并发CAS的AUC为0.963,灵敏度、特异性分别为95.8%、87.0%;多因素Logistic回归分析表明,MMP9、ADAM10是影响RA患者并发CAS的危险因素(P<0.05)。结论 RA并发CAS患者血清MMP9、ADAM10水平显著升高,血清MMP9、ADAM10水平与IMT呈正相关,并且血清MMP9、ADAM10可作为诊断RA患者并发CAS的血清标志物。

妊娠期高血压疾病患者血清ANGPTL2、ADAM10水平与病情严重程度及预后关系

目的:探讨血清血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)、解整合素-金属蛋白酶10(ADAM10)在妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清中的表达,以及与病情严重程度、预后的关系。方法:收集本院2019年11月-2021年11月收治的106例HDCP患者为HDCP组,其中重度子痫前期28例(重度组)、子痫前期34例(中度组)、妊娠期高血压44例(轻度组),同期产前检查健康孕妇100例为对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清ANGPTL2、ADAM10的水平,Spearman分析HDCP病情严重程度与血清ANGPTL2、ADAM10及血压的相关性,根据羊水污染程度、新生儿Apgar评分将HDCP患者分为预后不良组(56例)和预后良好组(50例),多因素logistic回归分析影响HDCP患者预后的因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清ANGPTL2、ADAM10对HDCP患者预后的预测价值。结果:HDCP组ANGPTL2(8.54±2.13 ng/ml)、ADAM10(1700.54±300.35 pg/ml)高于对照组(6.46±1.21 ng/ml、1348.65±280.32 pg/ml)(均P<0.05)。HDCP患者中,轻度组、中度组、重度组血清ANGPTL2、ADAM10、收缩压、舒张压依次升高,且与患者病情严重程度呈正相关;预后不良组24 h尿蛋白(PRO)、ANGPTL2、ADAM10水平均高于预后良好组(均P<0.05)。24 h PRO、ANGPTL2、ADAM10异常高表达是影响HDCP患者不良预后的因素(均P<0.05)。血清ANGPTL2预测HDCP患者预后的曲线下面积(AUC)为0.838,最佳临界值为8.14 ng/ml;血清ADAM10预测HDCP患者预后的AUC为0.834,最佳临界值为1627.11 pg/ml,两者联合的AUC为0.921,预测效能高于单一指标(均P<0.05)。结论:血清ANGPTL2、ADAM10在HDCP患者中表达上调,二者与其病情严重程度、预后密切相关,并可预测患者预后。

ADAM10在骨髓间充质干细胞成骨分化及胫骨骨折愈合中的作用及可能机制

目的 探索解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化及胫骨骨折愈合中的作用及可能机制。方法 培养SD大鼠BMSCs,建立稳定转染阴性对照(NC)shRNA pGFP-V-RS载体的BMSCs并分为sh-NC组和sh-NC+DMSO组,建立稳定转染ADAM10 shRNA pGFP-V-RS载体的BMSCs并分为sh-ADAM10组、sh-ADAM10+DMSO组、sh-ADAM10+丙戊酸(VPA)组。成骨诱导14 d后进行茜素红染色并检测405 nm波长吸光值、ALP活性及ADAM10、成骨标志物基因(骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、胶原蛋白-I(Col-I))、Notch1信号通路分子(Notch细胞内片段(NICD)、Hes1)的表达水平。建立SD大鼠的胫骨骨折模型,局部注射NC shRNA、ADAM10 shRNA的pCMV5.0载体,4周后观察骨折愈合的情况以及基因表达水平。结果 sh-ADAM10组BMSCs中ADAM10的表达水平低于sh-NC组,成骨诱导后茜素红染色的405 nm波长吸光值、ALP活性及OCN、Runx2、Col-I、NICD、Hes1的表达水平均高于sh-NC组(P<0.05);sh-ADAM10+VPA组BMSCs成骨诱导后茜素红染色的405 nm波长吸光值、ALP活性及OCN、Runx2、Col-I的表达水平均低于sh-ADAM10+DMSO组(P<0.05);sh-ADAM10组胫骨骨折大鼠的骨折愈合情况优于sh-NC组,骨折部位OCN、Runx2、Col-I、NICD、Hes1的表达水平均高于sh-NC组(P<0.05)。结论 敲低ADAM10表达促进BMSCs的成骨分化及胫骨骨折愈合,这一作用与抑制Notch1通路有关。

解整合素金属蛋白酶10通过介导Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞上皮-间质转化

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)对子宫内膜癌(EC)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:收集84例EC患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测癌组织及其癌旁组织中ADAM10 mRNA表达水平。以人EC细胞株HEC-1B作为研究对象,采用ADAM10过表达慢病毒感染HEC-1B细胞,并联合Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939进行干预,再将细胞分为空白对照组(blank)、慢病毒阴性对照组(Lv-NC)、ADAM10过表达慢病毒组(Lv-ADAM10)和Lv-ADAM10+XAV939组。采用qRT-PCR检测感染后各组细胞中ADAM10 mRNA表达水平;划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法分析各组细胞中ADAM10及EMT相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:EC患者癌组织中ADAM10 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。与blank组或Lv-NC组比较,Lv-ADAM10组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平以及N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),同时细胞迁移和侵袭能力显著增强(均P<0.05)。与Lv-ADAM10组比较,LvADAM10+XAV939组细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且细胞迁移和侵袭能力明显降低(均P<0.05)。结论:ADAM10在EC组织中高表达,其过表达可促进HEC-1B细胞的EMT进程,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

Role of ADAM10 and ADAM17 in CD16b Shedding Mediated by Different Stimulators

Objective To investigate the main proteinases responsible for CD16b shedding under different stimulators. Methods HEK293 cell line stably expressing CD16b was constructed by lentivirus system. The cell line was then overexpressed with a disintegrin and metalloproteinase 10 (ADAM10) or ADAM17, suppressed with short hairpin RNA of ADAM10 or ADAM17, and reconstituted with ADAM10 or ADAM17, respectively. After each treatment, the cell line was stimulated with ionomycin or phorbol 12-myristate13-acetate (PMA) for 12 hours. The soluble CD16b released from cell membrane was detected by immunoprecipition and immunoblot. Quantitation was then implemented to compare the amount of soluble CD16b in cell supernatant after stimulation. Results HEK293 cell line stably expressing CD16b was successfully established. When CD16b expressing cell line was overexpressed with ADAM10, shedding of CD16b was increased after stimulation with ionomycin but not PMA; when the cell line overexpressed with ADAM17, shedding of CD16b was increased after stimulation with PMA but not ionomycin. Similarly, when ADAM10 was suppressed by short hairpin RNA, CD16b shedding was decreased after stimulation with ionomycin; when ADAM17 was suppressed by short hairpin RNA, CD16b shedding was decreased after stimulation with PMA. The shedding of CD16b was increased again when CD16b expressing cell line was reconstituted with ADAM10 and stimulated by ionomycin or reconstituted with ADAM17 and stimulated by PMA. Conclusions Both ADAM10 and ADAM17 could shed CD16b, but they possess differed preferences. ADAM10 is the main sheddase under stimulation of ionomycin, while ADAM17 is the main sheddase under stimulation of PMA.

敲低阿霉素心肌病大鼠心肌细胞ADAM10后大鼠心功能的改善及机制

目的建立阿霉素心肌病动物模型,观察解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)小干涉RNA(siRNA)重组慢病毒对神经钙黏素(N-cadherin)加工水解途径的调控。方法 SD大鼠腹腔注射阿霉素,建立阿霉素心肌病大鼠模型。将ADAM10 siRNA重组慢病毒进行心内注射,分为模型组、重组慢病毒治疗组、空白载体组及正常对照组。分离原代心肌细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,确定感染效率。超声检测各组大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病变情况,Western blot法检测心肌细胞N-cadherin在ADAM10水解后产生的C末端片段1(CTF1)的蛋白水平,免疫组织化学染色检测心肌组织N-cadherin的表达和分布。结果原代培养的感染后心肌细胞可见大量GFP表达,说明慢病毒成功感染心肌细胞;与阿霉素心肌病组相比,ADAM10 siRNA重组慢病毒治疗组死亡率下降,心功能及心肌组织形态明显改善,心肌细胞N-cadherin蛋白水平增加并主要定位于细胞表面、CTF1蛋白水平降低。结论敲低ADAM10水平,增加阿霉素心肌病大鼠心肌细胞N-cadherin的表达、降低CTF1的表达,改善心功能。

鹿茸多肽对轻度认知功能障碍模型大鼠海马组织中ADAM10、BACE-1表达的影响

目的观察鹿茸多肽对轻度认知功能障碍模型大鼠学习记忆功能及海马组织中解聚素和金属蛋白酶10(A DisintegrinAnd Metalloproteinase 10,ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1,BACE-1)表达的影响,探讨鹿茸改善MCI学习记忆障碍的相关作用机制。方法 Wistar大鼠60只随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性对照组、鹿茸多肽高、中、低剂量组,连续给药21 d,末次给药后1 h,腹腔注射氢溴酸东莨菪碱复制MCI大鼠模型。Morris水迷宫观察各组大鼠行为学变化,Elisa法检测各组大鼠海马组织中ADAM10和BACE-1含量,RT-PCR法检测各组大鼠海马组织中m RNA表达水平。结果 Morris水迷宫结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可以延长模型动物的平台穿越次数,增加有效区停留时间(P <0.05或P <0.01)。Elisa检测结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可明显提高模型动物海马组织中的AMAM10、降低BACE-1含量(P <0.05)。RT-PCR检测结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可明显提高模型动物海马组织中的AMAM10、降低BACE-1 mRNA表达水平(P <0.05或P <0.01)。结论鹿茸多肽可以提高氢溴酸东莨菪碱所致的MCI模型大鼠的学习记忆能力,其作用机制与提高海马组织中ADAM10m RNA表达水平,抑制BACE-1 mRNA表达有关。

过表达ADAM10通过Notch/Akt信号通路抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨过表达解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡及Notch/Akt信号通路的影响。方法将40只SD大鼠随机均分为假手术组(sham)、急性心肌梗死组(AMI)、空载腺病毒组(Ad-NC)和ADAM10腺病毒组(Ad-ADAM10)。除sham组外,其他各组均采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射腺病毒进行干预。干预72 h后,超声心动图评估大鼠心功能;取心肌组织,TCC染色评估心肌梗死面积,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况,RT-PCR检测心肌组织中ADAM10 mRNA表达水平,Western blot检测心肌组织中ADAM10、凋亡相关蛋白以及Notch/Akt信号通路相关蛋白表达水平。结果与sham组比较,AMI组大鼠心功能下降,心肌梗死面积和心肌凋亡率均增加,并且心肌组织中ADMA10 mRNA和蛋白水平以及Bcl-2、Notch1、Hes1、p-Akt等蛋白表达水平均降低,而Cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与AMI组比较,Ad-ADAM10组大鼠心功能得到改善,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡率均降低,心肌组织中ADMA10 mRNA和蛋白水平以及Bcl-2、Notch1、Hes1、p-Akt等蛋白表达水平均升高,而Cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。而Ad-NC组以上指标与AMI组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADAM10过表达可改善AMI大鼠心功能,并抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与Notch/Akt信号通路激活有关。

miR-122-5p靶向ADAM10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

目的研究miR-122-5p对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮-间质转化(EMT)的影响,阐明其可能机制。方法常规体外培养人卵巢癌细胞SKOV-3,将miR-122-5p模拟物(miR-122-5p mimic)及其阴性对照(mimic NC)转染至SKOV-3细胞,分为空白对照组(Blank组)、mimic NC组和miR-122-5p mimic组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-122-5p和ADAM10 mRNA的表达水平;Western blot检测各组细胞ADAM10蛋白的表达水平;生物信息学预测miR-122-5p与ADAM10靶向匹配,采用双荧光素酶报告系统验证两者在SKOV-3细胞中的靶向关系。再将miR-122-5p mimic和ADAM10过表达质粒(pcDNA-ADAM10)分别或同时转染至SKOV-3细胞中,分为空白对照组(Blank组)、miR-122-5p mimic组、ADAM10过表达组(pc-ADAM10组)和miR-122-5p mimic+pc-ADAM10组,采用Transwell检测SKOV-3细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞Notch信号通路相关蛋白Notch1、HES1和HEY1,EMT相关蛋白Snail、E-cadherin和N-cadherin的表达水平。结果 miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中miR-122-5p的表达水平较mimic NC组的升高(P<0.01),表明miR-122-5p mimic稳定转染至SKOV-3细胞。miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中ADAM10 mRNA和蛋白的表达水平较mimic NC组的降低(P<0.01),双荧光素酶报告系统证实ADAM10是miR-122-5p靶基因。与Blank组比较,miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞发生迁移和侵袭的数量降低(t=6.004,P<0.05;t=7.289,P<0.01),而pc-ADAM10组的升高(t=13.181,P<0.001;t=11.504,P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的Notch、HES1、HEY1、Snail和N-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),而pc-ADAM10组的上升(P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的E-cadheirn蛋白表达水平上升(P<0.01),而pc-ADAM10组的下降(P<0.01)。与pc-ADAM10组比较,miR-122-5p mimic+pc-ADAM10能减弱pc-ADAM10的促EMT作用,且下调Notch信号通路活性。结论 miR-122-5p通过阻断Notch信号通路抑制人卵巢癌细胞SKOV-3的EMT,其机制可能与miR-122-5p靶向抑制ADAM10的表达有关。

肿瘤相关基因ADAM15在结肠癌中一个非同义变异对细胞黏附及侵袭的影响

目的解析ADAM15基因单核苷酸变异(single nucleotide variant,SNV)在结肠癌肿瘤发生发展相关的细胞学过程中的具体功能作用。方法首先对具有侵袭表型的结肠癌患者癌组织及癌旁组织全外显子组测序,然后进行野生型/突变型ADAM15结肠癌HCT-8细胞系细胞功能实验,进而完成野生型/突变型ADAM15细胞系的转录组测序分析。结果采用全外显子组测序在预后不良的患者中检出ADAM15基因SNV rs6427128,提示可能影响结肠癌的进展。细胞功能实验显示,rs6427128损失了ADAM15所具有的上调细胞侵袭能力的作用,而使细胞黏附能力增加约26%。转录组测序分析显示,与野生型相比,rs6427128过表达细胞的差异表达基因富集在细胞黏附、DNA的复制与转录、炎症反应等多种细胞生物学过程,提示rs6427128变异可能通过促进肿瘤细胞的黏附参与调节肿瘤微环境的重塑,从而影响结肠癌的进展。结论结合适当的细胞模型和较为精细的分析方法,深入解析临床样本中所检出的一些高频非同义潜在功能性变异体,可以为肿瘤相关基因的结构功能关系提供有益的提示性实验室数据。

miR-25-3p下调ADAM10表达阻断Notch信号通路抑制P19细胞向心肌细胞分化

目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。

甲醛对肝脏miRNA122及其下游解离素-金属蛋白酶10和血清应答因子的影响

目的:探讨甲醛对小鼠肝脏miRNA122及其下游解离素-金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)和血清应答因子(serum response factor,SRF)的影响.方法:将40只♀昆明小鼠随机分为3个甲醛染毒组(低浓度组、中浓度组和高浓度组)和1个对照组,每组10只.染毒组每日上午9:00腹腔注射不同浓度的甲醛溶液,对照组注射等量的生理盐水.30 d后,实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法检测4组小鼠肝脏组织mi RNA122的表达情况;免疫组织化学法检测4组小鼠肝脏组织ADAM10和SRF的表达情况.结果:对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组小鼠肝脏miRNA122的相对表达量分别是0.99±0.005、0.94±0.074、0.72±0.062和0.38±0.091,各组之间有明显差异(F=22.988,P<0.01).与对照组相比,甲醛可明显降低肝脏中mi RNA122的表达,且呈浓度依赖关系;染毒组中ADAM10和SRF的表达均明显高于对照组(H=21.484,P=0.000;H=31.566,P=0.000).mi RNA122相对表达量与ADAM10及SRF阳性表达率均呈负相关(r=-0.975,P=0.025;r=-0.799,P=0.02).结论:甲醛染毒可以明显降低肝脏中mi RNA122的表达,且呈浓度依赖关系;并可能通过增加ADAM10、SRF蛋白的异常表达进而诱发肝癌.

2型糖尿病患者血清Ficolin-3 ADAM10水平与颈动脉粥样硬化的关系

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)、解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法:选取234例T2DM患者为T2DM组,根据是否CAS分为CAS组(n=68)和无CAS组(n=166),另选取同期78名体检健康者为对照组。收集T2DM患者临床资料,酶联吸附法测定所有受试者血清Ficolin-3、ADAM10水平。Pearson相关性分析T2DM患者血清Ficolin-3、ADAM10水平与颈动脉内中膜厚度的相关性。多因素Logistics回归分析血清Ficolin-3、ADAM10水平与T2DM患者CAS的关系,ROC曲线分析二者对T2DM患者CAS的预测价值。结果:与对照组比较,T2DM组血清Ficolin-3、ADAM10水平升高(P<0.05);与非CAS组比较,CAS组血清Ficolin-3、ADAM10水平亦升高(P<0.05)。T2DM患者血清Ficolin-3、ADAM10水平与颈动脉内中膜厚度呈正相关(r=0.576、0.630,P均<0.05)。Ficolin-3(OR=1.196,95%CI:1.104~1.295)、ADAM10(OR=2.896,95%CI:1.497~4.602)是T2DM患者CAS独立影响因素(P<0.05)。Ficolin-3联合ADAM10预测T2DM患者CAS的曲线下面积(AUC)明显大于Ficolin-3、ADAM10预测(P<0.05)。结论:T2DM患者血清Ficolin-3、ADAM10水平升高,为CAS独立危险因素,可作为T2DM患者CAS预测指标。

白藜芦醇对阿尔茨海默病小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ、ADAM10蛋白表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对阿尔茨海默病(AD)小鼠前额叶皮质沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)、维甲纬酸受体β(RARβ)、含有解整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白10(ADAM10)表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法选取6月龄C57BL/6雄性小鼠6只作为空白对照组(BC组,生理盐水灌胃),6月龄APPswePSEN1dE9(APP/PS1)转基因小鼠12只制备AD小鼠模型后均分为AD组(生理盐水灌胃)、AD+Res组(800 mg/kg Res灌胃),采用Morris水迷宫实验(MWM)检测3组小鼠6月龄和9月龄时找到水中平台的时间;9月龄小鼠完成MWM后麻醉处死,取前额叶皮质,采用荧光实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测3组小鼠前额叶皮质SIRT 1和ADAM 10 mRNA表达水平,采用免疫蛋白印迹(Western blot)技术检测3组小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ及ADAM10蛋白表达及Tau蛋白磷酸化位点Ser396位点[p-tau(S396)]磷酸化水平。结果9月龄AD组和AD+Res组小鼠小鼠较本组6月龄时找到水中平台的时间延长(P<0.01),9月龄AD组小鼠较同月龄BC组小鼠找到平台的时间延长(P<0.01);AD组小鼠前额叶皮质SIRT 1和ADAM 10 mRNA表达水平较BC组小鼠下降(P<0.01),AD+Res组小鼠前额叶皮质ADAM 10 mRNA表达水平较AD组升高(P<0.01);AD组小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ、ADAM10蛋白表达水平较BC组降低(P<0.01),AD+Res组小鼠前额叶皮质SIRT1、ADAM10表达水平较AD组升高(P<0.05);AD组小鼠前额叶皮质p-tau(S396)磷酸化水平较BC组升高(P<0.001),AD+Res组小鼠前额叶皮质p-tau(S396)磷酸化水平较AD组降低(P<0.01)。结论Res可改善AD小鼠的认知功能,其机制可能与AD小鼠前额叶SIRT1、RARβ及ADAM10表达上调和Tau蛋白磷酸化水平降低有关。

基质金属蛋白酶-10基因敲除对植入肺腺癌细胞株A549的裸鼠皮下移植瘤生长及细胞凋亡的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-10(MMP-10)基因敲除对植入肺腺癌细胞A549的裸鼠皮下移植瘤生长及细胞凋亡的影响。方法将人肺腺癌细胞A549细胞分为实验组和对照组,分别含MMP-10基因低表达序列、无用RNA序列。将12只裸鼠随机分为实验组及对照组各6只,皮下接种相应的细胞悬液。每2~3 d测量肿瘤大小,绘制肿瘤增长曲线。25 d后处死裸鼠,取皮下肿瘤,比较两组裸鼠瘤体体积,并通过流式细胞术检测两组瘤体细胞凋亡情况。结果两组肿瘤体积均随时间延长而增长,且对照组肿瘤增长速度较实验组快,实验结束时对照组瘤体体积为(920.12±196.77)cm^3,大于实验组的(462.33±188.11)cm^3(P<0.05)。实验组凋亡晚期细胞和坏死细胞比例为(20.46±2.29)%,高于对照组的(1.22±0.21)%(P<0.05)。结论 MMP-10在肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的生长过程中起重要作用,敲除MMP-10基因可促进癌细胞凋亡、坏死。

长链非编码SNHG1/miR-145/ADAM17轴在椎间盘髓核退变中的作用及其调控机制

目的 :研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)、miR-145及解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)在椎间盘退变(IDD)组织中的表达,探讨SNHG1调控miR-145/ADAM17轴对椎间盘髓核细胞退变的影响及机制。方法 :采用qRT-PCR、免疫印迹检测30例IDD患者经手术摘除的髓核组织SNHG1、miR-145与ADAM17的表达;双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀等确定SNHG1、miR-145与ADAM17的关系;白介素(IL)-1β诱导髓核细胞建立细胞退化模型,SNHG1 siRNA或miR-145模拟物等转染后,CCK-8、流式细胞术等检测细胞增殖、凋亡以及相关分子指标的变化。结果 :相比于对照髓核组织,IDD髓核组织中SNHG1与ADAM17表达上调,miR-145表达下调,均与Pfirrmann分级显著相关。SNHG1可通过海绵作用靶向miR-145,miR-145也可靶向ADAM17的3’-非编码区(3’-UTR)抑制ADAM17蛋白表达。SNHG1沉默逆转了IL-1β诱导的髓核细胞凋亡及基质酶(基质金属蛋白酶13、ADAMTS4)合成,上调了collagenⅡ和aggrecan表达;而SNHG1过表达增强了IL-1β诱导的上述效应。结论 :SNHG1调控miR-145/ADAM17分子轴,促进髓核细胞凋亡和细胞外基质降解,参与椎间盘退变的发展变化。

白介素-4和白介素-13促进人肺成纤维细胞ADAM33基因的表达

目的探讨白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)对人肺成纤维细胞ADAM33(a disintegrin and a metal-loproteinase33,ADAM33)mRNA表达的影响。方法以不同浓度的IL-4或/和IL-13刺激培养的人肺成纤维细胞(MRC-5),然后用实时定量反转录多聚酶链反应(real-time RT-PCR)法测定ADAM33mRNA表达的变化。结果人肺成纤维细胞上存在着ADAM33mRNA的表达,当分别以10ng/mL的IL-4或IL-13刺激时,AD-AM33mRNA的表达增加呈现时间依赖性,至24h达到高峰。随着IL-4和IL-13刺激浓度的增加,ADAM33mRNA的表达也明显增加:以100ng/mL的IL-4和100ng/mL的IL-13刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞分别增加了(9.49±2.83)倍和(14.21±3.35)倍(P<0.01);而以10ng/mL的IL-4和10ng/mL的IL-13联合刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞增加了(15.06±4.57)倍(P<0.01)。结论IL-4和IL-13能明显促进肺成纤维细胞ADAM33mRNA的表达。

去整合素金属蛋白酶10基因启动子区多态性变化与腔隙性脑梗死发病风险的关系

目的观察腔隙性脑梗死患者去整合素金属蛋白酶(ADAM)10基因启动子区多态性变化,分析此多态性变化与腔隙性脑梗死发病风险的关系。方法研究对象为173例腔隙性脑梗死患者(梗死组)和297例非脑血管病体检者(对照组),采用Snapshot分型技术检测ADAM10基因启动子区rs653765和rs514049位点多态性,采用B型彩色多普勒超声仪测量颈动脉内膜中层厚度(CIMT);比较两组位点多态性及其与梗死组性别、年龄、CIMT的关系。结果梗死组ADAM10基因rs653765位点CC基因型频率显著低于对照组(P=0.008 0)、隐性模型CT+TT基因型频率显著高于对照组(OR=0.54,95%CI为0.36~0.81,P=0.002 9),T等位基因频率显著高于对照组(OR=1.95,95%CI为1.37~2.79,P=0.000 2);两组ADAM10基因rs514049位点的基因型频率和等位基因频率无显著差异(P>0.05)。携带ADAM10基因rs653765位点T等位基因的男性发生腔隙性脑梗死的风险显著升高(OR=1.51,95%CI为1.00~2.28,P=0.048),而≥70岁人群中携带CT基因型或T等位基因者发生腔隙性脑梗死的风险显著升高(OR=1.69,95%CI为1.00~2.85,P=0.046);ADAM10基因rs653765和rs514049位点的多态性与腔隙性脑梗死患者CIMT无明显相关。结论 ADAM10基因rs653765位点T等位基因可能与腔隙性脑梗死的发病有关。

不明原因不孕妇女着床期子宫内膜αvβ3、Hox10、MMPs基因的表达

目的明确不明原因不孕妇女子宫内膜中αvβ3、Hox10、MMPs表达和正常生育妇女的差异。方法选取2016年10月—2018年5月收治90例患者作为研究对象,其中正常生育组(对照组)45例,不明原因不孕组(试验组)45例,观察比较两组患者子宫内膜厚度、分型、容积以及内膜下血流的变化,并观察比较患者两侧子宫动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、内膜下血管化指数(VI)、血流指数(FI)、血管化血流指数(VFI)的水平及HCG日E 2、LH、P的比较,同时比较两组患者着床期子宫内膜中整合素(αvβ3)mRNA、同源框基因10(Hox10)mRNA、基质金属蛋白酶-9(MMPs-9)mRNA的表达情况。结果试验组患者的子宫内膜厚度、内膜下血流以及PI和RI,VI、FI、VFI与对照组有明显差异,子宫内膜分型、容积及HCG日E 2、LH、P无明显差异,即对照组患者子宫内膜容受性的指标优于试验组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组患者在着床期子宫内膜αvβ3mRNA、Hox10mRNA、MMPs-9mRNA表达上亦明显高于试验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不明原因不孕妇女或许是因为子宫内膜中αvβ3、Hox10、MMPs-9的mRNA表达含量低,从而影响子宫内膜容受性,继而影响临床妊娠,为临床治疗不明原因不孕提供了科学理论依据。