右美托咪定通过a7nAChR依赖途径缓解脂多糖诱导的小鼠脓毒血症模型肾损伤机制

目的 观察右美托咪定通过a7nAChR依赖途径缓解脂多糖诱导的小鼠脓毒血症模型肾损伤的保护作用,并对其机制进行初步探讨。方法 将实验小鼠随机分为空白对照组(C组)、LPS诱导急性肾损伤组(AKI组)、右美托咪定防护组(D1组)和右美托咪定+LPS+a7nAChR抑制剂组(D2组),每组10只。建立内毒素血症小鼠模型,检测血清肌酐(SCr)和血清尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)的变化;HE检测肾脏病理组织学变化,Western blotting和实时PCR检测大鼠肾脏中a7nAChR蛋白及mRNA表达。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析各组大鼠肾组织中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达。结果 与C组相比,AKI组小鼠肾脏损伤明显,血清中SCr、BUN水平升高,肾脏病理组织学变化更明显;而在建模前给予右美托嘧啶可以改善AKI,降低血清中SCr、BUN水平,提升a7nAChR蛋白及mRNA表达;给予a7nAChR抑制剂后,右美托咪定对AKI的保护作用受到抑制。与C组SCr和BUN含量相比,AKI组TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与AKI组相比,D1组TNF-α、IL-1β、IL-6含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与D1组相比,D2组TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 右美托嘧啶对脂多糖导致的肾损伤有保护作用,其机制可能与a7nAChR依赖途径有关。

鬼臼毒素纳米脂质载体通过非Caspase依赖途径诱导VK2/E6E7细胞凋亡机制的研究

目的:探讨鬼臼毒素纳米脂质载体(POD-NLC)诱导人永生化阴道上皮细胞(VK2/E6E7)凋亡的作用及机制。方法:取对数期生长VK2/E6E7细胞,分别加入POD-NLC和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同培养24小时。实验分为4组:A组:空白对照组;B组:0.25μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;C组:1μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;D组:空白NLC+Caspase抑制剂组。采用流式细胞仪检测ROS水平,qPCR检测AIF mRNA表达,蛋白印迹检测各组细胞AIF、cyt-C蛋白表达。结果:B组、C组均可以上调ROS、AIF、cyt-C水平,与A组及D组相比均有统计学差异(P值均<0.05);B组与C组AIF mRNA及AIF蛋白表达无统计学差异(P值均>0.05);ROS、cyt-C各组间比较均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:鬼臼毒素纳米脂质载体可以通过非Caspase依赖途径诱导永生化阴道上皮细胞凋亡。

ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径在类风湿关节炎发病中的免疫调控

背景:胆碱能抗炎通路广泛参与类风湿关节炎发生发展,然而胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)/烟碱型乙酰胆碱7受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)/核因子κB信号途径在类风湿关节炎发病中的免疫调控机制研究未见报道。目的:探究类风湿关节炎发病中ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径的免疫调控机制。方法:取32只雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为4组,每组8只:除健康对照组外,关节炎模型组、迷走神经切断组和假手术组均采用牛Ⅱ型胶原和弗氏完全/不完全佐剂构建关节炎大鼠模型,造模成功后,迷走神经切断组切断颈部左侧迷走神经,假手术组仅分离迷走神经。术后5周,检测各组大鼠体质量、关节炎评分和关节肿胀度、脾脏及关节病理变化,ELISA检测血清白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平,qRT-PCR及Western blot、免疫组化检测ChAT/α7nAChR/核因子κB通路核心基因mRNA及蛋白表达。结果与结论:①与健康对照组相比,关节炎模型组大鼠体质量下降(P<0.05),关节炎评分升高(P<0.01),踝关节肿胀度加重,关节间隙减小伴炎细胞浸润,脾脏白髓及生发中心增大增多,血清白细胞介素、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05,P<0.01),关节中α7nAChR、ChAT、IκBα、核因子κB p50/p65的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),在关节面中显著表达;②与关节炎模型组和假手术组相比,迷走神经切断组大鼠体质量下降(P<0.05),关节炎评分升高(P<0.05,P<0.01),踝关节肿胀度加重伴畸形,关节间隙消失伴炎细胞浸润,脾脏白髓及生发中心增大融合,血清白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05,P<0.01),关节中α7nAChR、ChAT、IκBα、核因子κB p50/p65 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),在关节面中显著表达;③结果提示,迷走神经通过调控胆碱能抗炎通路刺激ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径,进而参与类风湿关节炎的疾病进程,提示胆碱能抗炎通路可能是治疗类风湿关节炎的潜在靶标。

Smad信号传递途径调节肾小管上皮细胞转分化实验

目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。方法:以细胞间粘连蛋白(Ecadherin)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标,借助细胞培养、蛋白印迹和基因转染等方法,检测TGFβ1引发的Smad信号途径的变化,和TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化作用。将含有Smad7基因表达质粒转染HKC细胞,观察高表达的Smad7蛋白对TGFβ1作用的影响。结果:实验结果表明①TGFβ1作用HKC细胞10min即可磷酸化HKC细胞内Smad2/3蛋白,而且此作用可持续48h以上;②TGFβ1作用HKC细胞6h即可下调Ecadherin蛋白的表达,24h后能诱导该细胞表达αSMA,其作用呈明显的剂量依赖关系;③转染Smad7表达质粒的HKC细胞,可拮抗TGFβ1诱导HKC细胞表达αSMA以及下调Ecadherin蛋白表达的作用;④应用特异性MAP激酶抑制剂(PD98059和SC68376)和PI3激酶抑制剂(Wortmannin)均不能拮抗TGFβ1的作用。结论:TGFβ1诱导的上皮细胞转分化作用是依赖其引发的Smad信号途径,阻断该信号传递途径则能够拮抗TGFβ的作用。