PI3K在BCR/ABL阳性细胞中促进细胞周期进程和抗凋亡的作用

BCR/ABL阳性细胞中,磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)途径是BCR/ABL激活的一条重要途径,它对于BCR/ABL阳性细胞恶性表型的维持是必不可少的。现对PI3K在BCR/ABL阳性细胞中促进细胞周期进程和抗凋亡的作用和机制作一综述。

罕见的慢淋伴Ph^1阳性、bcr/abl融合基因阳性

临床上 ,Ph1阳性、bcr/abl阳性见于慢性粒细胞白血病的病人 .本病例则在外周血淋巴细胞绝对值、骨髓淋巴细胞形态和数值异常、免疫学B细胞表型的高表达以及临床表现等方面均符合慢性淋巴B细胞型白血病诊断的病人 ,染色体检查发现细胞Ph染色体阳性 ,即t (9;2 2 ) ,经RTPCR检测 。

bcr/abl融合转录子阳性的B细胞型急性淋巴细胞白血病免疫表型特点

为探讨B细胞型急性淋巴细胞白血病 (B ALL)中bcr/abl融合转录子阳性白血病细胞的生物学特征 ,用流式细胞术检测 2 6例bcr/abl阳性及 32例bcr/abl阴性B ALL病例的免疫表型 ,用PCR法检测免疫球蛋白重链(IgH)基因重排。结果表明 :所有的病例均为CD19阳性。bcr/abl阳性与bcr/abl阴性B ALL表面分子有显著统计学差异 (P <0 .0 5 )的是CD34(96 .2 %与 6 5 .6 % ) ,CD10 (96 .2 %与 71.8% )及CD38(43.8%与 95 .4 % )。在 2 6例bcr/abl阳性病例中 ,原始细胞共表达CD10 + /CD19+ /CD34+ ,CD10 + /CD34+ /HLA DR+ 和CD10 + /CD34+ /CD38-分别为 92 .3% (2 4 / 2 6 ) ,73 1% (19/ 2 6 )和 5 6 .2 % (9/ 16 )。对bcr/abl阳性组的 17例进行了IgH基因重排检测 ,10例阳性 (5 8.8% )。 14例bcr/abl阴性组中 12例 (85 .7% )阳性。在 32例bcr/abl阴性病例中 ,原始细胞共表达CD10 + /CD19+ /CD34+ 和CD10 + /CD34+ /HLA DR+ 分别为 4 3.8% (14 / 32 )和 37.5 % (12 / 32 ) ,无 1例表型为CD10 + /CD34+ /CD38-。结论 :bcr/abl阳性B ALL患者CD34和CD10阳性率较高 ,而CD38阳性率较低 ,且IgH基因重排检出率较低 ,其独特的免疫表型特征是CD10 + /CD34+ /CD38-。

新型Bcr／Abl和Src双靶点抑制剂FB2治疗慢性髓系白血病的作用及机理研究

目的：临床研究表明，酪氨酸激酶抑制剂imatinib能有效地控制gcr／Abl阳性的慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia，CML），但随着临床用药，imatinib逐渐出现耐药。FB2属噻唑嘧啶胺化合物，是一种新型Ber／Abl和Src双靶点抑制剂。本研究旨在探讨FB2对慢性髓系白血病的治疗作用及作用机理。方法：采用MTT法观察FB2在体外对人慢性髓系白血病细胞K562及K562的imatinib耐药株（K562R／5．0）细胞增殖的抑制作用；采用流式细胞技术观察FB2对K562及K562R／5．0细胞的周期阻滞作用；western blot分析方法检测FB2对K562及K562R／5．0细胞的总Bcr／Abl、c-Src和Lyn的蛋白表达及其磷酸化水平的影响；在体内采用荷人慢性髓系白血病K562细胞的重症联合免疫缺陷小鼠模型，观察FB2对其治疗作用。结果：FB2在体外抑制K562及K562R／5．0细胞增殖的IC50分别为0．03nM和0．43nM;在体内FB2明显降低白血病小鼠脾脏指数，降低白细胞总数及中性粒细胞数。作用机理研究表明，FB2阻滞慢性髓系白血病细胞于Gl期；明显降低Bcr／Abl、c-Src和Lyn的磷酸化水平；与阳性对照药dasatinib相当。结论：FB2在体内外均可明显抑制人慢性髓系白血病细胞的增殖，其抗慢性髓系白血病的作用与抑制Bcr／Abl、c-Src和Lyn的磷酸化水平直接相关，提示FB2很可能成为新型的治疗Bcr／Abl阳性白血病且克服imatinib耐药的双重靶点药物。

CD34阳性慢性粒细胞白血病细胞生物学特征及其意义

慢性粒细胞白血病是源于骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病。其CD34抗原阳性伴bcr／ ab(?)融合基因阳性的白血病细胞具有独特的生物学特征,并与病情进展及转归相关。清除CD34阳性慢性粒细胞白血病细胞有助于防止疾病复发。本文就其近年来的研究进展作一综述。

我国210例伊马替尼耐药慢性髓细胞白血病和Ph阳性急性淋巴细胞白血病ABLl基因突变特征

目的 了解伊马替尼治疗后效果不佳的慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）及Ph阳性急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）患者BCR-ABL1激酶区突变（kinase domain mutation,KDM）的特征.方法 选取2007年9月至2010年12月北京市道培医院177例CML患者和33例Ph（＋）ALL患者,均为我国患者.在患者治疗初期有效、后出现耐药时,或者治疗3个月以上疗效不佳时采集骨髓或外周血标本,共计243份.提取标本有核细胞中总RNA,反转录为cDNA.用巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增标本中BCR-ABL1融合基因的激酶区全长（第242～ 493位氨基酸的编码序列）,使用AB3130XL型基因测序仪测定ABL1激酶区的基因序列,使用Variant Reporter V1.0软件分析基因突变结果.结果 共检测到32种ABL1基因不同种类的点突变,检出率为34.2％（ 83/243）.其中T315I占12％ （10/83）,检出的突变率最高；其余依次为Y253H占11％ （9/83）,G250E占7％ （6/83）,E255K占7％ （6/83）,M351T占6％ （5/83）,E459K占5％ （4/83）；Q252H、D276G、F317L、E355G、F359V、H396R均与4％ （3/83）.并发现了3例插入突变,2例为357-358insk,1例为V304RfsX17.在7例患者中发现同时存在2种以上的点突变.多种耐药突变可同时存在于1个克隆中,同一个体不仅有常见的耐药突变,也会出现少见的点突变、缺失突变、插入突变甚至导致激酶活性缺失的突变.结论 伊马替尼药物压力下白血病细胞的ABL1基因突变会随机出现,产生不同的耐药克隆；不同的耐药克隆可以在同一个体内并存.耐药克隆不仅有基因突变,还存在插入缺失突变.

干细胞来源DC与CIK共培养抗K562／A02干细胞的体外研究

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)源干细胞体外诱导生成树突细胞(DC)与同来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,对白血病耐药株K562/A02干细胞(LSC)的杀伤作用。方法提取BCR/ABL阳性CML患者骨髓单个核细胞(BMMC),流式分选技术分离纯化CD34+CD38-干细胞,体外扩增诱导生成DC。取同来源的CML患者BMMC诱导出CIK。DC与CIK共培养,流式细胞术(FCM)检测其对K562/A02干细胞的凋亡及杀伤情况。光镜下观察细胞形态,FCM分析DC和CIK免疫表型、K562/A02及DC的P-糖蛋白(P-gp)表达情况,荧光原位杂交(FISH)检测BCR/ABL融合基因在LSC及DC中的表达。结果 LSC能成功诱导为成熟DC,且LSC来源DC的P-gp阳性表达率约为51.8%。DC免疫表型CD40、CD80、CD83、CD86以及HLA-DR的表达率均高于共培养前;共培养后CIK免疫表型CD3、CD8、CD56的表达率高于单独培养的CIK,差异均有统计学意义(P<0.01)。DC与CIK共培养后对CD34+CD38-干细胞的杀伤效应明显高于单独培养的CIK。CIK、DC-CIK均可诱导K562/A02细胞凋亡,凋亡率分别为(32.56±3.20)%、(40.21±3.09)%,且2组比较差异有统计学意义(P<0.01),但对CD34+CD38-干细胞无明显的诱导凋亡作用。结论来源LSC的DC功能正常,同时该来源DC联合CIK能杀伤K562/A02干细胞,但对其无明显凋亡作用。

慢性髓性白血病合并T淋巴母细胞性淋巴瘤1例报告

1病例介绍 患者，男性，24岁，以“颈部无痛性肿物进行性增多2月”为主诉于2011年3月就诊。入院前2月开始出现颈部多发无痛性肿物，自觉有发热，未测体温，当时未就诊，随后颈部肿物进行性增大伴腋窝出现无痛性肿物，就诊当地医院，查血常规提示：白细胞（WBC）516．4×10^9^-1血红蛋白（Hb）77g／L，血小板（PLT）212×10^9L^-1；未治疗转诊笔者医院。

MiRNA在慢性粒细胞白血病中的研究进展

微小RNA(miRNA)为非编码单链小分子RNA,通过调控其靶基因及下游信号通路,影响细胞的增殖、分化及凋亡,在多种肿瘤中发挥着癌基因或抑癌基因的作用。慢性粒细胞白血病(CML)为起源于骨髓造血干细胞的恶性克隆性疾病,越来越多的研究发现,miRNA与CML的发生发展密切相关,且部分miRNA与疾病的诊断、治疗及预后有关。我们总结了近年来CML相关miRNA的研究进展及其介导的调控网络。

异硫氰酸苯己酯诱导伊马替尼耐药K562/G01细胞株凋亡的组蛋白调控机制研究

目的体外观察异硫氰酸苯己酯(PHI)对人慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药的K562/G01细胞株的凋亡的影响,初步探讨其可能的组蛋白调控机制。方法流式细胞仪检测PHI作用前后K562/G01细胞凋亡的变化;Western Blot检测PHI处理K562/G01细胞株后凋亡相关蛋白Bcl-2,procaspase-3,组蛋白H3、H4乙酰化状态,组蛋白H3K4、H3K9甲基化状态的变化。结果 PHI可以诱导K562/G01细胞凋亡,且呈浓度依赖性。PHI终浓度为0,10,20,40μmol/L时,K562/G01细胞凋亡率分别为(3.76±1.46)%,(8.89±2.31)%,(18.10±3.56)%,(35.35±3.70)%,差别有统计学意义(n=3,P<0.05);凋亡相关蛋白Bcl-2及procaspase-3的表达下降;组蛋白H3、H4乙酰化及组蛋白H3K4甲基化水平均上升,而H3K9甲基化水平下降,随着作用时间的延长变化趋势更加明显。结论 PHI能诱导K562/G01细胞凋亡,可能与PHI对组蛋白的乙酰化及甲基化调控有关。

STI571治疗BCR/ABL融合基因阳性白血病观察

目的 :观察酪氨酸激酶抑制剂STI5 71在BCR/ABL融合基因阳性表达白血病的治疗效果和副作用。方法 :已确诊BCR/ABL+ 的 8例慢性粒细胞性白血病 (CML)和 1例急性淋巴细胞白血病 (ALL)患者采用STI5 71+Ara -C治疗。结果 :2例CML -慢性期患者均CR至今 ,6例CML -急粒变患者有 2例CR ,其中 1例CR至今已 3 7周 ,1例ALL在第三次血液学CR后经治疗维持CR2 8周后复发。结论 :STI5 71可诱导BCR/ABL+ 白血病患者完全缓解 ,降低骨髓BCR/ABL+ 白血病细胞 ,延长CR期 ,药物副作用轻微易耐受 。

p230阳性慢性粒细胞白血病急性淋巴细胞白血病转变1例并文献复习

目的提高对p230阳性慢性粒细胞白血病(CML)急性淋巴细胞白血病转变(简称:急淋变)的认识。方法回顾性分析江苏省苏北人民医院2021年12月收治的1例p230阳性CML急淋变患者的临床资料,并复习相关文献。结果患者男性,37岁,确诊CML 1年余,皮肤出现瘀斑、瘀点3 d而就诊,经骨髓穿刺涂片、骨髓流式细胞术免疫分型及二代测序(NGS)检测诊断为CML急变期,急淋变。经达沙替尼联合IVP(伊达比星、长春地辛、泼尼松)方案治疗后复查骨髓涂片、BCR⁃ABL融合基因等示再次缓解。后患者使用达沙替尼单药维持治疗,定期随访中,病情稳定。结论e19a2转录本可表现出与经典CML相似甚至更易急性变的病程,且可因更易产生ABL激酶区突变而表现出对一代酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药,此类患者应定期进行分子监测,必要时实施NGS检测ABL激酶突变位点,以选择合适的TKI,这对p230阳性CML治疗有重要的指导意义。

BCR-ABL突变检测指导下的达沙替尼治疗伊马替尼耐药的慢性髓性白血病疗效分析

目的探讨在BCR—ABL突变检测指导下选用达沙替尼治疗伊马替尼耐药慢性髓性白血病（CML）患者的有效性。方法83例伊马替尼耐药和39例伊马替尼与尼洛替尼均耐药的CML患者，持续口服达沙替尼，其中慢性期（CP）55例，加速期（AP）21例，急变期（BP）46例。达沙替尼治疗前，经BCR—ABL突变筛查，除外具有对达沙替尼高度耐药突变类型（T315I／A、F317L／V／C和V299L）的患者。定期监测血液学、细胞遗传学和分子学反应，评估疾病进展和生存情况。当发生达沙替尼治疗失败时检测BCR．ABL突变。结果CP患者中，完全血液学反应（cHR）率为92．7％，完全细胞遗传学反应（CCyR）率为53．7％，主要分子学反应（MMR）率为29．6％，MR4．5率为14．8％，4年疾病无进展生存（PFS）率和总生存（OS）率分别为84．4％和89．5％。AP患者中，血液学反应（HR）率和CCyR率分别为81．0％和35．0％，3年PFS率和OS率分别为56．1％和59．3％。BP患者中，HR率和CCyR率分别为63．0％和21．4％，1年PFS率和OS率分别为43．6％和61．8％。达沙替尼作为二线和三线酪氨酸激酶抑制剂时，治疗反应相似。当发生达沙替尼治疗失败时，75例患者中37例（48．7％）检出新突变，T315I最为多见（59．5％）。达沙替尼治疗前存在突变的患者与无突变患者相比，治疗反应、PFS和OS差异均无统计学意义，但当出现达沙替尼耐药时，发生新突变的可能性显著增高（65．7％对34．1％，P=-0．006）。结论达沙替尼可以有效治疗伊马替尼耐药或伊马替尼与尼洛替尼均耐药的CML各期患者，CP和AP患者疗效持久。达沙替尼治疗前BCR-ABL突变筛查及治疗中突变监测非常重要。

慢性髓性白血病一种新剪接体ABL^△exon7＋35INS

目的探讨ABL基因的剪接体ABL^△exon7和ABL^35INS是否与酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药的发生有关。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法结合PCR扩增产物直接测序法，检测74名健康人和76例慢性髓性白血病（CML）患者（TKI治疗有效组53例，耐药组23例）ABL^△exon7和ABL^35LNS剪接体的发生率。结果发现并鉴定一种新的剪接体ABL^△exon7＋35INS（ABL^△exon7和ABL^35INS剪接体同时存在），在健康对照组、TKI治疗有效组和耐药组检出率分别为10．8％（8／74）、7．5％（4／53）和8．7％（2／23）。74名健康对照者中47名（63．5％）表达ABL^△exon7剪接体，8名（10．8％）表达ABLINS剪接体；53例TKI治疗有效的CML患者中30例（56．6％）表达ABL“””剪接体，5例（9．4％）表达ABL””剪接体；23例发生耐药的CML患者中12例（52．2％）表达ABL^△exon7剪接体，3例（13．0％）表达ABLINS剪接体，比较以上各组结果，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论新剪接体ABL^△exon7＋35INS和ABL^35INS与TKI治疗发生耐药无关，同时发现ABL^35INS剪接体的发生往往会伴随外显子7的缺失。

伊马替尼体外对c-kit阳性急性髓系白血病患者骨髓细胞增殖和凋亡的影响

伊马替尼是一种2-苯胺嘧啶衍生物，除对bcr／abl融合基因阳性的慢性粒细胞白血病（CML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞有明显的作用外，还可以抑制c—kit酪氨酸激酶。在急性髓系白血病（AML）中c-kit被异常磷酸化。我们用不同浓度的伊马替尼对c—kit^＋AML患者骨髓细胞进行体外处理，采用MTT法、RT—PCR法及流式细胞术探讨其对骨髓细胞凋亡的影响，旨在为临床应用伊马替尼治疗AML提供理论依据。

Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病发生Ph染色体阴性急性淋巴细胞白血病变一例

患者，女，17岁。2000年10月因疲乏、反复鼻出血就诊，查体：肝肋缘下3cm，脾肿大：AB线4cm，AC线5cm，DE线5．5cm。血常规检查：WBC179×10^9／L，Hb102g／L，BPC917×10^9／L。骨髓检查结果为慢性粒细胞白血病（CML）慢性期。骨髓荧光原位杂交（FISH）检查示bcr／abl融合基因阳性（95％）。羟基脲诱导缓解后予以IFN—α治疗（300万U皮下注射，隔日1次），其间多次FISH复查bcr／abl融合基因均为阳性（90％～100％）。2005年5月将IFN—α剂量增加至600万U（隔日1次），因白细胞降低（1×10^9／L）而停用3个月，

细胞遗传学检测在慢性髓性白血病中的临床意义

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂（TKI）时代，慢性髓性白血病（cML）病程演进与细胞遗传学的关系。方法应用骨髓细胞短期培养法，对387例初诊CML患者行染色体G显带技术核型分析，结合ABL激酶区点突变检测分析细胞遗传学变化与CML病程演进的关系。结果间接荧光原位杂交（FISH）技术检测387例CML患者BCR—ABL融合基因阳性，其中Ph’CML占94．1％（364／387），Ph—CML占5．9％（23／387）；标准易位t（9；22）（q34；q11）320例（87．9％），变异易位5例（1．4％），初诊Ph’合并额外染色体异常（ACA）39例（10．7％）。合并ACA中“主要路径”异常22例（56．4％），“次要路径”异常15例（38．5％），-Y异常2例（5．1％）。23．4％（71／303）标准易位患者在TKI治疗中出现ACA，主要为染色体数目异常，此类患者疾病进展比例高（X2=168．21，P〈0．001）、更易合并点突变（x2=29．04，P〈0．001）。初诊CML慢性期合并ACA患者与标准易位患者相比，有较低的无事件生存（EFS）及无病生存（DFS）率（P值分别为0．037和0．003），但总生存（OS）率差异无统计学意义（P=0．209）。CML慢性期患者TKI治疗过程中出现ACA者与无ACA者相比，OS、EFS、DFS率均降低（P值均〈0．001）。进展期合并ACA患者长期生存率下降（P=0．086）。结论CML在病程演进中往往合并ACA，此类患者更易发生不良事件或疾病进展，在TKI治疗过程中规律、及时行染色体核型分析及点突变检测对疗效评估及预后判断具有重要意义。