骨脱细胞后的有机成分分析

目的 探讨脱细胞骨细胞外基质 (AECM)的制备 ,并对其进行有机成分分析。 方法 采用低渗和除垢剂脱细胞方法制备 AECM。使用 HE、Mallory- Heidenhain氏快速一步法染色和阿利新蓝染色观察形态学改变 ;免疫组织化学检测纤维连接蛋白 (FN)和层连接蛋白 (L N)。 结果 HE、Mallory- Heidenhain氏快速一步法染色后镜下可见AECM胶原纤维排列规则 ,骨陷窝空虚 ;阿利新蓝染色可见 AECM骨陷窝周边染色呈不同程度蓝绿色 ;免疫组织化学染色可见 FN和 L N的抗体染色阳性部位在细胞外基质 (ECM)。 结论 低渗和除垢剂二步法脱细胞是 AECM制备的有效方法。脱细胞过程中去除了细胞成分 ,保留了天然的胶原纤维分布及 ECM主要支架成分蛋白多糖、FN和 L N。

脱细胞骨基质的立体构筑及TritonX-100残留量测定

目的制备骨组织工程的新型天然支架材料。方法取兔双侧胫骨,修整成片状,使用含3%TritonX-100及蛋白酶抑制剂的Tris-HCL的缓冲液洗脱掉骨片中的细胞成份。取脱钙后骨片行HE染色及阿利新蓝染色并用免疫组化方法检测骨片中纤维连接蛋白及层黏连蛋白;Mallory-Heidenhain染色测量骨陷窝形态;对骨片进行扫描电镜及透射电镜观察;使用反相高效液相色谱检测TritonX-100残留量。结果 HE、阿利新蓝染色见脱细胞骨基质胶原纤维排列规则,骨陷窝空虚;骨陷窝形态测量表明脱细胞骨基质的骨陷窝数量与正常骨的骨陷窝数量没有差异;免疫组织化学染色及免疫透射电镜均见纤维连接蛋白与层黏连蛋白存在于脱细胞骨基质和正常骨的骨陷窝周边处;TritonX-100残留量测定表明脱细胞骨基质最低检出极限为0.5μL/mL。结论脱细胞骨基质保持了骨的正常立体构筑,是一种新型的生物衍生材料,具有广阔的应用前景。

小鼠骨髓基质干细胞与脱细胞基质骨联合培养的实验研究

目的 研究小鼠股骨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)在同种异体脱细胞基质骨(acellular extra cellular matrix,AECM)上的生长情况。 方法 昆明种小鼠 8只共 16侧股骨 ,用 Triton X- 10 0处理后获 AECM。另将 1月龄昆明种小鼠 2 0只双侧股骨切断 ,用 4 ml PBS反复冲洗骨髓腔后 ,离心分瓶 ,取 MSCs进行原代培养 ,以 5× 10 6 /ml浓度将原代培养的小鼠 MSCs种植于 AECM中 ,进行体外联合培养 7d,通过相差显微镜、光镜、电镜等方法观察细胞在材料中的生长情况。 结果 在 AECM的孔隙中 ,有成团蓝染的 MSCs核团 ,周边部分大于中间部分 ,且靠近细胞培养液层面的 AECM中蓝染的核团数量明显比远离细胞培养液的层面多。 AECM具有良好的孔隙率 ,MSCs可在 AECM上良好生长。 结论 AECM可作为构建组织工程骨的一种较好的支架材料。