He-Ne激光对产ALDC地衣芽孢杆菌的诱变效应

采用 He-Ne激光 (波长 63 2 .8mm,功率 9m W)对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶为 1 .2 2 IU/ m L的地衣芽孢杆菌 H-5 ,分别以 1 0 min、2 0 min、3 0 min、40 min进行照射处理 ,结果表明 ,1 0 min照射对H-5菌的芽孢萌发有激活作用 ,促进其生长速度 ;2 0 min和 3 0 min照射对 H-5菌株的产酶力有明显的影响 ,筛选出三株比出发菌株产酶力提高 2倍以上 ,且对啤酒发酵中双乙酰降解作用明显的变异菌株 ,其中 L -2 0 ′6 菌株经传代培养及酯酶同工酶分析 ,证明发生了稳定的遗传变异 .40

枯草芽孢杆菌产α-ALDC发酵条件的优化

以枯草芽孢杆菌BS059-22为供试菌株,考察了影响发酵的接种量、发酵温度、初始pH值、摇床转速及发酵时间等因素,结果表明,接种量8%,发酵温度33℃,初始pH6.5,摇床转速220r/min,发酵时间18h为生产-α乙酰乳酸脱羧酶最适发酵条件。

紫外辐照对产α-ALDC枯草芽孢杆菌的诱变效应

采用紫外诱变(波长260nm,功率15w)对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS059菌株进行诱变处理。结果表明,在紫外辐照时间为50s时,诱变效果较好。从正突变菌株中反复筛选,得到两株产酶量较高的菌株BS059-15和BS059-22,比原出发菌株的酶活分别提高了107.62%和162.25%。经过连续传代试验,证明其遗传性状稳定,为可遗传变异。

a-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)对酿酒中双乙酰控制效果研究

文章研究了α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)对啤酒双乙酰含量的影响。已知ALDC通过绕过双乙酰生成途径来减少双乙酰。在此,在添加ALDC的条件下酿造啤酒。游离氨基氮(如缬草碱)对双乙酰的生成有相反的影响。在样品中加入0.02,0.04,0.06单位/mL的ALDC,并对所得啤酒的理化性质进行了分析,以确定啤酒的质量。双乙酰含量随酶浓度的增加而降低。样品中的二乙酰基含量分别降低了25%和15%,产品质量大大提高。

α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对α-ALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226-5、V-20进行抗药性标记,筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17,并以P-67和S-17为融合的亲本在溶菌酶浓度,酶解时间,酶解温度,PEG浓度和pH等不同的条件下进行原生质体融合,从而确定了其融合的最佳条件。

α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对-αALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226-5、V-20进行抗药性标记,筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17,并以P-67和S-17为融合的亲本在溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度、PEG浓度和pH值等不同的条件下进行原生质体融合,从而确定了其融合的最佳条件。

α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对α-ALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226-5、V-20进行抗药性标记，筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17，并以P-67和S-17为融合的亲本对其原生质体融合条件进行了初探。

理化因素对ALDC热稳定性的影响

用多种物理因素和化学因素包括蛋白质稳定剂等对α 乙酰乳酸脱羧酶进行热稳定性试验 ,结果发现稳定剂A ,B和C可明显提高α 乙酰乳酸脱羧酶的耐热性。在此基础上 ,通过正交试验得出一个复合稳定剂的最佳组合配比A1B3 C2 。该组合试验中残余酶活高达 99.4 % ,而对照组仅为 17.4 %。

响应面法分析微量元素对ALDC酶活力的影响

考察了微量元素对乙酰乳酸脱羧酶活的影响,通过单因子实验确定微量元素的最佳产酶浓度,进一步通过回归方法计算出微量元素的理论最佳产酶浓度,并用响应面分析法确定微量元素的最佳配比:微量元素配比为Mg2+0.022g/L,Mn2+0.00076g/L,Zn2+0.00296g/L,酶活提高了3倍。

微波对α-ALDC产生菌W195的诱变效应探讨

利用微波诱变技术对产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌W195进行了微波诱变效应的研究。通过对微波辐照不同时间及不同强度的实验,对突变菌株的α-ALDC产量进行比较和分析,得出诱变剂量和诱变效应的关系及诱变的最佳剂量,同时测定所得较高产量突变菌株的遗传稳定性。研究结果表明,诱变剂量越大,菌体的致死效应越大,而诱变效应是先增大后减小,存在一个最佳值。本实验最佳诱变剂量为微波低强度间歇辐照40s,得到的突变株M3-14产量为0.375,相对出发菌株提高了55%,遗传性状基本稳定。

ALDC酶在啤酒工业中的应用

在啤酒生产中添加α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ＡｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅＤｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）可有效地分解α－乙酰乳酸，降低双乙酰含量，抑制双乙酰反弹幅度。加入量为１０ｇ／ｔ麦汁，６天左右可将双乙酰还原到０．

短芽孢杆菌a-乙酰乳酸脱羧酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

用PCR方法扩增短芽孢杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因,引入原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pALDl。pALDl中的ALDC基因在大肠杆菌中高效表达,每毫升发酵液产酶80单位以下,比原始菌株提高200余倍。SDS-PAGE蛋白质分析表明,大肠杆菌DH5α(pALDl)表达的ALDC占细胞总蛋白量的40％以上。研究了重组质粒稳定性,大肠杆菌DH5α(PALDl)和HB101(pALDl)分别在无选择压力下30℃连续培养50代以上,41℃诱导不同时间,DH5α(pALDl)在热诱导5h后,未发现质粒不稳定性,HB101(pALDl)在热诱导3h后,质粒基本稳定,但热诱导5h后,丢失质粒的细胞约占70％。

高产双乙酰乳球菌的研究进展

双乙酰是乳制品中一种重要的风味物质。大多数乳酸菌(如乳球菌)都可以发酵葡萄糖和 柠檬酸产生双乙酰。描述了在乳球菌中从柠檬酸代谢和糖酵解途径来生成双乙酰的代谢途径, 以及利用基因工程和代谢工程技术来提高乳球菌的双乙酰生成量的策略。

枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因在啤酒酵母工业菌株中的表达

Yeast YIp\|type expression recombinant plasmid(pCMA2\|1) was constructed. The expression of α\|acetolactate decarboxylase gene from \%Bacillus subtilis\% was controled by \%CUP1\% promoter and its own terminator. The recombinant plasmid pCMA2\|1 was introduced into the brewer’s yeast PJ3\|5. Transformants were selected using copper resistance as selected marker. The results of activity assay showed that PJ3\|5 didn’t produce α\|acetolactate decarboxylase(ALDC), where as the activity of α\|ALDC in transformants were induced by copper sulfate. The laboratory scale fermentation test confirmed that the total diacetyl concentration was reduced effectively by α\|ALDC in transformant.

二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用

利用已构建的含有短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）和产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ， α-ＡＬＤＣ）基因的工程菌株，并使它们分别在大肠杆菌中高效表达，获得重组α－ＡＬＤＣ。在实验室，用 ２Ｌ体积的麦芽汁进行啤酒生产试验，添加 ２种重组α－ＡＬＤＣ后，使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在０.１ｍｇ／Ｌ以下。证明得到的重组ａ－ＡＬＤＣ能有效地降低啤酒中双乙酰含量。

一种耐低温α-乙酰乳酸脱羧酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达

从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中。SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilisWB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103。采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8%。该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20～35℃范围内均表现出较高的活性。Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失。经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍。经5 L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL。

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis)AS10 10 6α 乙酰乳酸脱羧酶经硫酸铵沉淀 ,聚乙二醇沉淀 ,DEAE SepharoseFastFlow离子交换 ,GigapiteK 10 0S柱层析及SephadexG 10 0分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤 ,得到SDS PAGE电泳纯 ,α 乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了 5 3.5倍。对该酶性质的研究表明 ,酶单亚基分子量为 32Kda ,等电点为 4 .5 ;该酶的最适反应温度为 4 0℃ ,最适反应 pH为 6 .0 ,对热 (40℃以上 )敏感 ,在 pH5 .0～ 6 .5之间稳定。酶活不需要金属阳离子 ,Cu2 +、Co2 +强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明 ,纯化的地衣芽孢杆菌α

产气肠杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性的因素

用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从产气肠杆菌（ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ） 中克隆出０９ｋｂ 的 Ｄ Ｎ Ａ 片段，经 Ｄ Ｎ Ａ 测序证明是α乙酰乳酸脱羧酶（αａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ，α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ） 基因。将α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ基因重组到质粒ｐ Ｂ Ｖ２２０ 后，转化大肠杆菌，经筛选获得高效表达的重组子菌株。重组α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 基因表达量占菌体总蛋白量的２７ ％ 。酶活检测表明重组子细胞表达的α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 活性是产气肠杆菌的１２０００ 倍。另外，粗提的重组α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 的最适ｐ Ｈ 为６５ ～７０ ，ｐ Ｈ 稳定范围为５５ ～８０ ，适合的温度为３５ ～４５ ℃。 Ｂａ２ ＋ 、 Ｃｄ２ ＋ 、 Ｆｅ２ ＋ 、 Ｃｏ２ ＋ 、 Ｍｎ２ ＋ 、 Ｓｎ２ ＋ 可提高重组α Ａ Ｌ Ｄ Ｃ 的活性。氨基酸修饰剂可降低其活性。

代谢工程方法改造谷氨酸棒状杆菌生产乙偶姻

应用代谢工程方法对Corynebacterium glutamicum ATCC 13032生物合成乙偶姻进行了研究.在C.glutamicum ATCC 13032中导入了Bacillus subtilis 168的乙偶姻合成途径的相关基因als SD操纵子,工程菌株的乙偶姻产量为2.14,g/L.为了增加合成乙偶姻的直接前体物丙酮酸的供给,进一步敲除了丙酮酸脱氢酶复合体E1亚基的编码基因(ace E)和乳酸脱氢酶基因(ldh A),工程菌株的乙偶姻产量提高到5.09,g/L.最后,敲除了工程菌株的2,3-丁二醇脱氢酶基因(but A)以阻断副产物2,3-丁二醇的合成,在优化的溶氧条件下,菌株CGL3在基本培养基中乙偶姻产量提高到8.33,g/L,达到理论得率的51.5%.实验结果表明经过代谢工程改造的C.glutamicum ATCC 13032具有良好的乙偶姻合成能力和应用潜力.