Determination of ganoderic acids in rat plasma after oral administration of total triterpenoids from Ganoderma lucidum

To investigate the absorption of total triterpenoids from Ganoderma lucidum in rats. HPLC-DAD and LC-MS methods were used to identify ganoderic acids in rat plasma after oral administration of total triterpenoids from G. lucidum by comparing their HPLC retention behaviors, UV absorption spectra, and mass spectra with authentic samples. Five ganoderic acids, ganoderic acid C2, C6, G, B and A were simultaneously detected in rat plasma. Ganoderic acids can be directly absorbed into circulation after oral administration of total triterpenoids from G. lucidum in rats.

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS的灵芝不同生长阶段的成分分析

[目的]探究灵芝(Ganoderma lucidum)不同生长阶段的成分差异。[方法]使用气相色谱-质谱检测法(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-offlight mass spectrometry,UPLC-QTOF/MS)技术,选用ACQUITY超高效液相色谱仪HSS T3色谱柱在Waters超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)系统上对灵芝原基、产孢前和产孢后的子实体进行成分分析与鉴定。[结果]GC-MS共检测到24种成分,其中醛类8种、酯类4种、烃类1种、酸类1种、醇类1种、酮类2种、胺类2种、吡嗪类1种、咪唑类1种、吡咯类1种、呋喃类1种、酚类1种。UPLC-QTOF/MS共检测90种成分,最主要的成分三萜类共有67种,此外还包括脂肪酸类8种、氨基酸及其衍生物类3种、苷类2种、维生素1种、生物碱类2种、有机酸类2种、糖类2种、萜1种、杂萜1种、甾体1种。共有73种成分在原基中检出,其中三萜类成分54种;72种成分在产孢前子实体中检出,其中三萜类成分57种;52种成分在产孢后子实体中检出,其中三萜类成分有42种。[结论]灵芝不同生长阶段成分存在明显差异,本研究结果为灵芝不同时期的化学成分的分析与鉴定,以及化学物谱图的完善提供了基础数据,为相关药理、药效分析提供了有效参考。

超临界CO_2萃取灵芝子实体中的三萜类成分

目的:筛选超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件。方法:采用RP-HPLC测定灵芝酸B的含量、可见分光光度法测定灵芝总三萜含量,设计正交试验优化超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分的工艺条件。结果:超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件:萃取压力为25 MPa,萃取温度为45℃,萃取时间为1.5 h,夹带剂(95%乙醇)用量为3 mL.g-1。结论:超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分具有萃取效率高、萃取时间短、操作简单等优点,其方法可靠,切实可行。

不同脂肪酸对灵芝液体发酵的影响

研究硬脂酸、亚油酸和棕榈酸对灵芝液体发酵的影响。结果表明,3种供试脂肪酸都能促进灵芝菌丝体生物量的积累;硬脂酸有利于灵芝胞外多糖的产生,在添加浓度为1.0g/L时,胞外多糖量达到(1 066.74±11.27)mg/L,是对照的3.37倍;亚油酸利于胞内多糖的合成,在浓度为1.5g/L时,胞内多糖量达到(620.90±7.11)mg/L,是对照的2.56倍;另外,亚油酸还对灵芝胞内三萜和胞外三萜量表现出较强的促进作用,在浓度为2.0 g/L时,胞内及胞外三萜量分别达到(394.23±10.32)mg/L和(551.32±6.22)mg/L,分别比对照提高了1.13和1.12倍;而硬脂酸和棕榈酸的添加则降低胞内和胞外三萜的量。

不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定

建立不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定方法.灵芝样品用乙醇提取,依次经氯仿、5%碳酸氢钠萃取,酸化后再用氯仿萃取、浓缩至干,称重,即得灵芝总三萜酸量.结果:灵芝子实体总三萜酸为(8.58±0.25)mg/g,孢子粉为(3.48±0.03)mg/g,菌丝体仅为(1.75±0.09)mg/g;菌盖总三萜酸含量为(12.62±0.22)mg/g,菌柄为(7.66±0.08)mg/g.10批次灵芝子实体的总三萜酸含量范围为4.3416.39 mg/g.灵芝子实体提取物中的总三萜酸含量以醇-水提取物的最高为(208.70±5.54)mg/g;碱水提取物的最低,仅为(123.07±4.99)mg/g.HPLC初步分析子实体和孢子及子实体提取物间三萜酸成分大部分相同.本法适用于灵芝子实体及其提取物、灵芝孢子和菌丝体总三萜酸的含量测定,结果可靠,可为灵芝产品质量指标提供依据.

灵芝三萜类成分研究进展

灵芝中的三萜类成分是灵芝中除多糖外的另一大类有效成分,综合近年来灵芝三萜类成分的化学结构、药理活性、质量控制等方面的研究,总结三萜类成分的研究现状。

原木灵芝孢子研究——(Ⅲ) 与木屑袋栽灵芝孢子的鉴别

原木灵芝孢子与木屑袋栽灵芝孢子可以鉴别如下:1.在扫描电镜下,前者形态饱满,后者大多数孢壁内陷;2.X-射线能谱面扫描分析结果表明,两者Mg、Al、Si、P、S、Cl、K、Ca、Fe、Ni等无机元素相对含量差异显著,前者Si、Ca含量较高;3.高效液相色谱分析结果表明,前者灵芝酸(Ganoderic acid)A、B等灵芝三萜酸含量较高,而后者未检出Ganoderic acid C;4.孢子粉经乙醚脱脂后用乙醇回流提取、浓缩成浸膏,前者提取率(固形物含量)达4.2％～4.8％,而后者仅为1.9％～2.1％。

赤芝子实体的化学成分研究

目的研究赤芝子实体的化学成分。方法应用多种色谱方法进行分离和纯化,通过1H,13C-NMR和MS等波谱技术确定化合物的结构。结果从赤芝子实体中分离得到8个化合物,分别被鉴定为:灵芝醇B(ganoderiol B,1)、灵芝酸A(ganoderic acid A,2)、赤芝酸A(lucidenic acid A,3)、灵芝萜酮二醇(ganodermanondiol,4)、3,7,11,15,23-5O-5α-羊毛甾-8-烯-26烷酸(3,7,11,15,23-pentaoxo-5α-lanosta-8-en-26-oic acid,5)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五烷酸酯(ergosta-7,22-dien-3β-ol-pentadecanoate,6)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(ergosta-7,22-dien-3β-ol,7)及正二十六烷酸(n-hexacosanoic acid,8)。结论其中化合物8为从该植物中首次分离得到。

无柄灵芝提取物中营养成分及体外抗氧化活性分析

为进一步探究无柄灵芝提取物中营养成分及其抗氧化能力。本研究以赤芝为对照,先用蒸馏水和55%的乙醇按照一定比例提取获得相应的水提物和醇提物,接着通过苯酚-硫酸法、香草醛-冰醋酸法分别测定4种提取物中的总糖和总三萜含量。再利用L-8900型氨基酸自动分析测定游离氨基酸含量。最后检测4种提取物分别对2,2′-联氨-二-3-基-苯并噻唑-6-磺酸(2,2′-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、羟基自由基的清除能力。结果表明,无柄灵芝与赤芝水提物总糖含量均显著高于相应的醇提物(P<0.05),无柄灵芝醇提物总糖含量为48.77%,赤芝醇提物总糖含量为51.54%,两种灵芝水提取物之间的总糖含量没有显著性差异(P>0.05);无柄灵芝醇提物总三萜含量显著高于其它3种提取物(P<0.05),达25.37 mg/g,但其水提物三萜含量却是最低,仅1.30 mg/g。无柄灵芝水提物中游离必需氨基酸总含量最高,为45.542 mg/g,而赤芝水提物含量最低,为2.381 mg/g。无柄灵芝醇提物对ABTS、DPPH、羟基自由基清除率均最高,分别为54.48%、24.42%、10.32%,说明其抗氧化能力较强。本研究可为无柄灵芝的进一步开发应用提供理论依据。

不同栽培条件对灵芝质量的影响

目的分别研究不同光强、采收时间、菌株等对灵芝多糖和三萜含量的影响,筛选适宜代料栽培灵芝的条件。方法采用紫外-可见分光光度法测定灵芝多糖和灵芝三萜含量,超高效液相色谱法测定灵芝子实体6种灵芝酸含量。结果研究发现,在320~400 lx光强条件下生长的灵芝子实体多糖含量最高,随着灵芝弹孢过程的持续,灵芝子实体的多糖、总三萜及6种灵芝酸总量均呈现下降趋势。通过对4种不同菌株栽培灵芝的质量评价,发现子实体和孢子粉的多糖含量高低依次为4号菌株>2号菌株>1号菌株>3号菌株,各菌株多糖含量差异显著(P<0.05);4号菌株子实体的灵芝酸总含量高达17.005mg/g,显著高于其他3个菌株(P<0.05)。结论研究结果显示4号菌株为适宜栽培的优良灵芝菌种,灵芝生长的光强条件应控制在320~400 lx,以子实体多糖为指标应该在弹孢前采收灵芝。

紫外分光光度法测定破壁灵芝孢子粉提取物总三萜含量

确定一种破壁灵芝孢子粉提取物总三萜紫外分光光度测定方法。采用紫外分光光度法,以熊果酸为对照品测定样品。溶液在波长548 nm处具有最大吸光度,熊果酸含量在14~54μg范围内呈良好的线性关系,r为0.999 4,平均回收率为92.94%。提示使用上述方法绘制标准曲线可计算出样品中三萜类化合物的含量。测定方法操作简便、检验快速、稳定性高、重复性好,可以用于灵芝孢子粉产品的质量控制。

紫芝中三萜类化学成分研究

采用色谱法从紫芝(Ganoderma sinense) 95%乙醇溶液中分离得到7个三萜类化合物,利用波谱学方法鉴定了它们的结构,分别鉴定为紫芝烯酸C(1)、赤芝酸A(2)、赤芝酮B(3)、灵芝烯酸B(4)、灵芝烯酸E(5)、灵芝酸H(6)和灵芝酸I (7),其中化合物1为新化合物。采用MTT法检测不同浓度化合物1对DU145细胞株、CEM细胞株及Hela细胞株细胞活力的影响,其半数抑制浓度为28. 8±1. 5μMol/L(Hela细胞株),说明化合物1对Hela细胞具有抑制效果。

不同颗粒度桑枝屑代料栽培灵芝产量和品质差异

为丰富桑枝屑栽培灵芝相关技术参数,明确桑枝屑的最适颗粒度,以20、18、14、12、8 mm 5个不同粒径桑枝屑配方(45%桑枝屑、45%玉米芯、5%麸皮、4%玉米粉、1%石膏)代料栽培‘川圆芝1号’,比较不同处理灵芝菌丝生长速度、子实体性状、产量和活性成分。结果表明,中等颗粒度(8~14 mm)桑枝屑栽培灵芝可促进菌丝较快生长(6.27 mm/d);而桑枝颗粒度为18 mm时,灵芝单朵鲜重及产量最大,分别达95.59、34.10 g/袋,且子实体三萜酸和多糖含量较高(1.33、1.20 g/100 g)。综上,以18 mm颗粒度的桑枝屑栽培灵芝更加优质高产。

灵芝提取物中多种三萜的质量控制研究

目的研究灵芝提取物中多种三萜类成分的质量控制方法,使用一测多评法检测灵芝提物物种多种灵芝三萜的含量。方法采用高效液相色谱法,以C 18为固定相,以乙腈∶0.04%甲酸水溶液为流动相的色谱条件下,建立灵芝酸A与灵芝酸B、灵芝酸C、灵芝烯酸D、灵芝酸G、灵芝酸C2、灵芝酸F、灵芝酸H和赤芝酸A的相对保留时间与相对校正因子。结果各三萜成分的色谱峰相对保留时间和相对校正因子重现性好,与外标法相比测定了7批灵芝提取物中的9种灵芝三萜成分,相对标准偏差(RSD)在2%以内。结论该方法可应用于灵芝提取物三萜多种成分的检测和质量评价工作。

亚临界水提取灵芝酸性和中性三萜的工艺研究

为优化亚临界水提取灵芝酸性和中性三萜的工艺参数,采用正交试验方法,考察提取温度、压力、时间对提取结果的影响,以HPLC法测定灵芝酸性和中性三萜含量。结果表明,亚临界水提取灵芝三萜的优化条件为料液比1︰16,温度180℃,压力4 MPa,提取时间10 min。此条件下灵芝酸性三萜得率为1.132 mg/g,中性三萜得率为0.582 mg/g。结论:亚临界水提取灵芝酸性和中性三萜,较超临界CO_(2)提取方法成本低,较传统的乙醇回流方法提取时间明显缩短,且不含有机溶剂,是一种于环境友好的产业化提取技术。

分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中三萜类化合物的含量

目的:建立破壁灵芝孢子粉中三萜及甾醇含量的测定方法。方法:以齐墩果酸为对照品,用5%香草醛冰醋酸、高氯酸显色,在546 nm波长处测定样品吸光度。结果:齐墩果酸在0.01834~0.0917 mg·mL^(-1)线性关系良好,回归方程为y=7.54560x-0.01161,相关系数R^(2)=0.99954,回收率为95.52%~101.29%,均值为98.55%,RSD为2.5%,方法重复性试验测定样品含量值范围为3.66%~3.85%,均值为3.76%,RSD为1.9%。结论:该方法操作简便、快速,结果稳定,重现性好,适用于破壁灵芝孢子粉中三萜及甾醇含量的测定。

HPLC测定不同产地灵芝中9种三萜酸

目的:建立HPLC测定灵芝子实体中9种三萜酸的方法。方法:采用Alltima C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 mL.min-1,柱温15℃。结果:灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、赤芝酸A、灵芝烯酸D、灵芝酸C1的线性范围分别为6.81～40.88,6.38～38.25,6.75～40.50,6.38～38.25,5.95～35.65,5.90～35.25,7.00～42.00,6.20～37.15,6.05～36.4 mg.L-1(r=0.999 4,0.999 2,0.999 4,0.999 2,0.999 2,0.994 5,0.999 0,0.999 2,0.998 4),加样回收率分别为102.1%,102.3%,100.6%,103.3%,104.1%,103.2%,96.42%,102.5%,101.5%,RSD为1.5%,0.96%,1.9%,1.3%,1.7%,2.5%,0.62%,2.9%,1.3%。测定了31个不同地区、不同栽培条件下灵芝样品的三萜含量。结论:该方法可行、重复性好,可定量测定灵芝中三萜酸的含量。

赤芝子实体中三萜酸类成分及其抗人乳腺癌SKBR3细胞增殖活性

目的研究赤芝Ganoderma lucidum子实体中三萜酸类成分及其抗肿瘤活性。方法用硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、反相HPLC等方法分离得到13个化合物,利用波谱学方法鉴定它们的化学结构,并进一步确定各化合物对乳腺癌SKBR3细胞的生物活性。结果分离得到13个三萜酸类的化合物,分别鉴定为灵芝烯酸C(1)、灵芝酸C2(2)、灵赤酸A(3)、灵芝酸G(4)、灵芝烯酸B(5)、灵芝酸B(6)、灵芝酸H(7)、灵芝烯酸A(8)、灵芝酸I(9)、灵芝酸A(10)、灵芝烯酸K(11)、灵芝烯酸D(12)、灵芝酸D(13)。化合物6在20μmol/L浓度下对人乳腺癌细胞SK-BR-3的抑制率为40.3%。结论化合物11是首次从该植物中分离得到的,化合物6对人乳腺癌细胞SK-BR-3显示了一定的抑制活性,其他化合物在该浓度下未显示活性。

赤芝水提取物中的三萜类成分

采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、HPLC等色谱技术手段,从赤芝水提物中分离得到1个新的灵芝三萜酸和18个已知类似物。利用理化性质和波谱数据,鉴定新化合物为2β-acetoxy-3β,25-dihydroxy-7,11,15-trioxo-lanost-8-en-26-oic acid(1)。通过与文献数据比较,已知化合物分别鉴定为ganoderic acid H(2),12β-acetoxy-3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(3),ganoderenic acid D(4),ganoderic acid C1(5),ganoderic acid G(6),3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(7),ganoderic acid B(8),ganoderic acid C6(9),3β,15α-dihydroxy-7,11,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid(10),ganoderic acid A(11),ganolucidic acid A(12),lucidenic acid E2(13),lucidenic acid N(14),lucidenic acid P(15),lucidenic acid B(16),lucidenic acid A(17),lucidenic acid C(18),lucidenic acid L(19)。虽然化合物2~19在赤芝中已经报道,但是化合物1是新化合物。因此,该研究进一步丰富了赤芝的化学成分,尤其是填补了赤芝传统水煎剂化学成分研究的空白。

灵芝提取物3种中性三萜及麦角甾醇的定量分析

目的建立灵芝提取物中中性三萜——灵芝醇A、灵芝醛A、灵芝酮三醇及麦角甾醇的超高效液相色谱(UPLC)定量分析方法及一测多评法。方法甲醇超声提取法制备灵芝提取物;超高效液相色谱(UPLC)法采用Phenomenex Luna Omega PS C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.6μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温30℃;一测多评法应用灵芝醇A作为内参物,计算灵芝醛A、灵芝酮三醇及麦角甾醇的相对校正因子;精密吸取10批灵芝供试品溶液进样检测,比较建立的外标法与一测多评法结果是否一致。结果4种成分在设定的质量范围内线性关系良好(r≥0.9988),方法的精密度、重复性、稳定性的RSD均小于2.13%,加样回收率在92%~105%、RSD均小于1.99%,准确度良好;灵芝醛A、灵芝酮三醇及麦角甾醇的相对校正因子分别为1.02、0.99、1.80,一测多评法和外标法测定结果差异不大。结论建立的测定灵芝中灵芝醇A、灵芝醛A、灵芝酮三醇和麦角甾醇UPLC外标法和一测多评法的专属性强,便捷高效,结果准确,适用于灵芝提取物中性三萜的定量分析。