酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B对肺癌细胞增殖、迁移、凋亡的影响

目的探究酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B(acidic leucine⁃rich nuclear phosphoprotein 32B,ANP32B)在肺癌(lung cancer,LC)中的作用机制。方法利用TCGA公共数据库,分析肺癌组织中ANP32B的表达情况。通过Kaplan⁃Meier Plotter生物信息数据库,检索分析ANP32B表达与患者预后的关系。通过体外细胞实验检测ANP32B在肺癌细胞及正常肺上皮细胞的表达差距。在肺癌细胞系中沉默ANP32B的表达水平,利用平板克隆实验计数细胞克隆团数目,利用划痕实验观察伤口愈合情况。Western blot检测ANP32B对通路蛋白的影响。结果通过TCGA数据库分析发现ANP32B在肺癌组织中表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001);通过Kaplan⁃Meier Plotter生物信息数据库发现ANP32B高表达的肺癌患者的总体生存期(overall survival,OS)较短(P<0.001)。通过体外细胞实验证明ANP32B在肺癌细胞的表达量高于正常肺上皮细胞。沉默ANP32B后,肺癌细胞增殖较对照组明显减慢(P<0.01),迁移能力明显下降(P<0.001)。ANP32B沉默后,凋亡相关蛋白Cleaved⁃Caspase3明显下调。结论ANP32B在肺癌组织及肺癌细胞系中高表达。沉默ANP32B表达水平后,可明显抑制A549细胞增殖、迁移。ANP32B可能抑制A549细胞的凋亡。

酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B在肝癌组织表达增强并促进肝癌细胞生长的研究

目的 :检测酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B(acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32B,ANP32B)在肝细胞肝癌组织中的表达水平,并探讨其在肝癌细胞生长中的作用。方法:利用国际权威公共数据库,分析肝细胞肝癌组织中ANP32B mRNA的表达及其与患者生存期间的关系;用蛋白免疫印迹法检测患者肝癌组织样本和敲除ANP32B的肝癌细胞系中的ANP32B蛋白表达水平;并用RNA干扰技术在肝癌细胞系中沉默ANP32B的表达,通过计数检测细胞生长及克隆形成,用流式细胞仪检测其细胞周期和细胞凋亡。结果:通过数据库及肝癌组织样本分析发现,肝癌组织中的ANP32B mRNA表达值(9.763±0.04)相较于癌旁组织(9.293±0.03)明显升高,蛋白表达升高1.78倍,且ANP32B高表达的肝癌患者与ANP32B低表达的患者相比,5年总生存率明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。体外实验发现,2组敲除ANP32B的肝癌细胞和对照组肝癌细胞相比,细胞生长速度明显减慢(29.9×10~5比23.2×10~5,15.5×10~5),克隆形成数目减少(300个比146个比135个),细胞周期发生S期阻滞(47.9%比61.5%比57.1%),细胞凋亡数略有增加(1.8%比7.3%比4.9%)。结论:ANP32B在肝癌组织中高表达,在肝癌细胞系中沉默ANP32B表达后可明显抑制细胞生长,细胞周期发生阻滞,细胞凋亡增加。

ANP32A表达与结直肠癌肝转移的相关性

目的:研究酸性核酸蛋白32A(acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein,ANP32A)在结直肠癌肝转移中的临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测156例结直肠癌组织(其中59例患者存在肝转移)中癌与癌旁组织的表达水平,并探讨其表达水平与结直肠癌肝转移的相关性。结果:ANP32A蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为59.6%(93/156),癌旁组织的阳性表达率为19.9%(31/156),差异具有统计学意义(P<0.05)。ANP32A在肝转移患者中的阳性表达率7 9.7%(47/59),明显高于无肝转移患者中的阳性表达率4 7.4%(46/97),差异具有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示肿瘤的分化程度、淋巴结转移以及ANP32A的表达与肝转移相关(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果提示肿瘤分化程度及ANP32A蛋白阳性表达是结直肠癌肝转移的独立危险因素(均P<0.05)。结论:ANP32A在结直肠癌中的高表达与结直肠癌肝转移相关,可望成为结直肠癌肝转移治疗的潜在靶点。

酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B促肿瘤机制的体外研究

目的:探讨酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B(acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32B,ANP32B)促进肿瘤发生、发展的分子机制,为其可能作为治疗靶点提供理论依据。方法:利用免疫沉淀联合质谱技术寻找和验证ANP32B相互作用蛋白;免疫荧光技术检测ANP32B和核浆转运蛋白α6(karyopherinα6,KPNA6)在细胞内的定位;采用短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)沉默KPNA6的表达;行GST-pulldown实验明确ANP32B与KPNA6直接结合及相互作用的区域。结果:通过免疫沉淀和质谱鉴定发现,ANP32B与KPNA6间存在相互作用,两者的结合不依赖ANP32B N端1~161氨基酸序列。体外GST-pulldown实验证实,KPNA6与ANP32B间存在直接的相互作用,且两者结合依赖ANP32B的核定位信号。利用sh RNA抑制KPNA6的表达后,并不影响ANP32B的核内定位。结论:ANP32B通过核定位信号序列与KPNA6结合,两者在细胞核中有明显的共定位,而敲除KPNA6并不影响ANP32B的核内定位。

酸性核磷蛋白32A表达在结直肠癌肝转移中的临床意义

为探讨酸性核磷蛋白32A(ANP32A)的表达与结直肠癌肝转移的相关性,选取本院收治的结直肠癌162例。其中肝转移35例设为转移组,无肝转移127例设为无转移组。采用免疫组织化学SP法检测ANP32A在结直肠癌与癌旁组织中的表达水平,分析ANP32A表达与结直肠癌肝转移的相关性。结果显示,癌组织中ANP32A阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),肝转移组ANP32A阳性表达率高于无肝转移组(P<0.05)。单因素分析显示肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、淋巴结转移、CEA、CA199和ANP32A高表达与结直肠癌肝转移密切相关(P<0.05),多因素Logistic回归分析显示区域淋巴结转移、CEA、CA199和ANP32A表达为结直肠癌肝转移的独立危险因素(P<0.05)。结果表明,ANP32A在结直肠癌组织中呈高表达,与结直肠癌肝转移密切相关。

酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32家族成员A对心肌细胞肥大的影响及机制研究

目的探讨酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32家族成员A(Anp32a)对心肌细胞肥大的作用及机制。方法通过挖掘数据库小鼠心脏假手术组及主动脉缩窄手术组芯片数据,进行差异基因分析。选取8~10周龄小鼠,随机分为模型组和假手术组(n=7或8),终末取材提取心脏组织RNA检测Anp32amRNA表达水平。构建Anp32a敲低(AdshAnp32a),Anp32a过表达(AdAnp32a)及其相应的对照组AdshRNA,AdGFP腺病毒并转染H9C2心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激H9C2心肌细胞诱导心肌细胞肥大,提取细胞RNA通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测心肌肥厚指标[心房利钠肽(AnP),脑利钠肽(Bnp),β-肌球蛋白重链(β-Mhc)]表达变化,并通过心肌细胞骨架蛋白(α-actinin)的免疫荧光染色观察Anp32a对心肌细胞大小的影响。机制研究方面,通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测Anp32a在调节心肌肥厚过程中涉及的信号通路的变化。结果 Anp32a在心肌肥厚模型中表达下调。AngⅡ刺激细胞,免疫荧光染色检测AdAnp32a组细胞明显较其对照组(AdGFP)减小,而AdshAnp32a组心肌细胞与其对照组(AdshRNA)相比显著增大。qPCR检测显示AdAnp32a组心肌肥厚基因(Anp、Bnp、β-Mhc)的mRNA表达降低,而AdshAnp32a组表达则相反。Western blot检测发现Anp32a能够抑制AngII诱导的Akt蛋白磷酸化水平的升高。结论 Anp32a通过AKT信号通路抑制心肌细胞肥大,可作为防治心肌肥厚及心力衰竭的潜在治疗靶点。

酸性核磷酸蛋白32E研究进展

酸性核磷酸蛋白（ANP）32E是含有亮氨酸重复结构的蛋白质,参与广泛的生物学过程,其结构与ANP32A高度相似,通过磷酸化调节胞质运输,并可以抑制蛋白磷酸酶2A（PP2A）的活性.近期临床研究发现ANP32E在鼠纤维肉瘤中起抑癌基因的作用,而在乳腺癌发生中可能与肺转移相关,具体的机制尚未明确.