基于长链非编码RNA HOX转录反义RNA探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响实验研究

目的:基于长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响。方法:取对数期人肝癌SK-Hep-1细胞,将lncRNA HOTAIR抑制质粒lncRNA HOTAIR-shRNA转染至SK-Hep-1细胞,随机分为转染组和联合组,转染组常规培养,联合组加入次乌头原碱(终浓度200μmol/L)。另取SK-Hep-1细胞随机分为空白组和次乌头原碱组,空白组常规培养,次乌头原碱组加入次乌头原碱(终浓度200μmol/L)。48 h后收集细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组lncRNA HOTAIR表达量;流式细胞仪检测各组凋亡率;绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白1轻链3(LC3)转染检测各组自噬情况;免疫印迹法检测细胞Beclin1、P62、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)蛋白相对表达量。结果:与空白组比较,次乌头原碱组lncRNA HOTAIR表达量升高,转染组lncRNA HOTAIR表达量降低(均P<0.05)。与次乌头原碱组比较,联合组lncRNA HOTAIR表达量降低(P<0.05)。与转染组比较,联合组lncRNA HOTAIR表达量升高(P<0.05)。与空白组比较,次乌头原碱组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,GFP-LC3斑点数增加(均P<0.05);转染组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白表达量降低,GFP-LC3斑点数减少(均P<0.05)。与次乌头原碱组比较,联合组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量降低,GFP-LC3斑点数减少(均P<0.05)。与转染组比较,联合组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,GFP-LC3斑点数增加(均P<0.05)。结论:次乌头原碱可能通过诱导人肝癌SK-Hep-1细胞过度自噬而促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调LncRNA HOTAIR表达有关。

苯甲酰乌头原碱对HBV-ACLF阳黄证和阴黄证患者外周血树突细胞功能的影响

目的:研究苯甲酰乌头原碱(Benzoylaconine,BAC)对HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)阳黄证和阴黄证患者外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)功能的影响。方法:体外诱导培养HBV-ACLF阳黄证与阴黄证患者DCs,CCK-8法检测BAC安全用药范围,流式检测BAC干预HBV-ACLF阳黄证与阴黄证患者DCs表面CD80、CD86、CD83和HLA-DR表达率变化情况,ELISA法检测DCs分泌IL-12水平。结果:与健康对照组比较,阳黄证、阴黄证空白组DCs表面CD80、CD86、CD83、HLA-DR表达降低(P<0.01),IL-12分泌减少(P<0.01);与阳黄证、阴黄证空白组比较,阳黄证、阴黄证BAC干预组DCs表面CD80、CD86、CD83、HLA-DR表达升高,IL-12分泌增多(P<0.01)。结论:BAC可以促进HBV-ACLF阳黄证和阴黄证患者DCs功能恢复,间接促进T细胞活化。

SPE-HPLC测定复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量

目的:建立复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量测定方法。方法:采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对复方羊角颗粒进行净化,高效液相色谱法测定,色谱柱:SVEA^(TM)C_(18)Opal(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶12),流动相B为0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(含0.05%冰醋酸),梯度洗脱;检测波长:235 nm;柱温:25℃;流速:1.0mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的线性范围分别为2.27~98.61(r=1.0000)、0.61~26.53(r=1.0000)、1.00~43.50μg·m L^(-1)(r=0.999 9);平均回收率及RSD分别为93.9%及2.4%、95.0%及2.6%、91.0%及3.0%。结论:本方法可为复方羊角颗粒的质量控制提供依据。

基于代谢组学方法研究乌头碱和苯甲酰乌头原碱对BeWo细胞的毒性机制

以BeWo细胞建立体外胎盘模型,采用基于气相色谱与质谱联用技术(GC-MS/MS)的代谢组学方法,研究乌头碱及其代谢产物苯甲酰乌头原碱的生殖毒性机制。收集不同时间点(0,6,12,24和36 h)药物干预后的BeWo细胞裂解液,通过GC-MS/MS分析获得细胞代谢轮廓;正交偏最小二乘法-判别分析(OPLSDA)显示,BeWo细胞内代谢物在药物干预后呈动态变化。进一步通过变量重要性投影(VIP)值和单因素方差分析筛选差异性代谢物,最终鉴定出脯氨酸、甘氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、乙酰谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、葡萄糖、半乳糖、琥珀酸共11个差异性代谢物。经Metaboanalyst分析,主要涉及谷氨酰胺和谷氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,赖氨酸降解,精氨酸和脯氨酸代谢,组氨酸代谢等6条代谢通路。实验结果表明,乌头碱和苯甲酰乌头原碱主要通过影响氨基酸代谢对BeWo细胞产生生殖毒性作用。

3种乌头原碱的NMR

利用3种双酯型乌头碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)经水解得到3种乌头碱型生物原碱,即乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱.应用一维和二维核磁共振(NMR,包括1H-1HCOSY,HMQC和HMBC)对这3种化合物的结构进行了分析,并对其1H和13C化学位移进行了全归属.

苯甲酰乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱对照品的制备

目的建立苯甲酰中乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱对照品的制备方法。方法将乌头碱、中乌头碱和次乌头碱3种双酯型生物碱在高温下水解,再结合柱层析方法制备得到苯甲酰乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱3种单酯型生物碱,通过HPLC、MS、1H-NMR、13C-NMR等方法进行纯度、结构鉴定。结果制备得到的苯甲酰乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱质量分数分别为98.6%、98.5%、99.3%。结论该方法简单,制备所得的对照品可用于附子质量控制。

应用高速逆流色谱技术从附子中分离制备苯甲酰新乌头原碱

利用高速逆流色谱技术,一次进柱即可实现从附子粗提物中分离得到苯甲酰新乌头原碱。两相溶剂系统用氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸三元系统,上相为固定相,下相为流动相,转速为892rpm,流速为1.2ml/min。通过ESI-MS、13C-NMR、1H-NMR鉴定,确认了其化学结构。经HPLC分析,纯度达98%以上。

乌头原碱对非酒精性脂肪肝大鼠瘦素胰岛素抵抗的实验研究

目的:研究乌头原碱对大鼠非酒精性脂肪肝模型瘦素胰岛素抵抗的影响。方法:80只SD大鼠随机分为4组,每组20只。正常组喂普通饲料;模型组、治疗组和对照组喂高脂饲料。治疗组12周后给予乌头原碱2 mg/kg体质量灌胃治疗,对照组12周后给予二甲双胍150 mg/kg体质量灌胃治疗。16周处死大鼠。测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG),用放免法检测大鼠血清瘦素(leptin,LP)和胰岛素(in-sulin,Ins)水平,并观察肝组织脂肪变程度。结果:模型组血清TC、TG、LP、Ins水平升高,肝脏呈明显脂肪性变。治疗组较模型组及对照组血清TC、TG、LP、Ins水平均有显著性降低,脂肪性变程度明显降低(P<0.05)。结论:乌头原碱能通过调节TG、TC代谢,降低血清瘦素水平,改善胰岛素抵抗状态,降低肝脏脂肪性变,具有良好的防治脂肪肝作用。

基于苯甲酸HPLC定量分析的制草乌氨基醇型乌头原碱类水解产物的含量测定

目的建立推算乌头碱氨基醇型水解产物含量的方法。方法通过控制苯甲酰乌头原碱水解条件,分别获得不同阶段的水解产物,确定苯甲酰乌头原碱降解率与苯甲酸转化率之间的关系,建立通过苯甲酸HPLC定量分析推导氨基醇型乌头原碱类水解产物含量的方法,并利用该方法对药典法制草乌生物碱含量进行测定。结果苯甲酰乌头原碱降解率与苯甲酸转化率约为1∶1,通过测定苯甲酸含量计算氨基醇型乌头原碱类含量的公式为:氨基醇型乌头原碱类含量≈(苯甲酸的含量×529)/122。药典法制草乌的双酯型生物碱、单酯型生物碱和氨基醇型乌头原碱类含量分别为0.0025%、0.16%和0.005%。结论通过定量分析苯甲酸含量推导乌头碱氨基醇型水解产物含量的方法可行,操作简单。

苯甲酰乌头原碱对人肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响

目的:研究苯甲酰乌头原碱(BAC)对人肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响,探讨其用于非小细胞肺癌治疗的作用机制。方法:采用不同剂量的BAC(10、50、100、200、400μmol/L)分别对A549细胞进行处理后,观察细胞的形态变化,并采用CCK-8法测定细胞的增殖抑制率。将细胞分为对照组(不加药物)和BAC低、高剂量组(200、400μmol/L),分别加入相应药物处理后,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用聚合酶链式反应法和Western blotting测定细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2凋亡相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和自噬相关因子Beclin1、LC3、P62的基因及蛋白表达水平。结果:采用不同剂量的BAC处理后,细胞出现皱缩、排列稀疏、溶解等现象,BAC100、200、400μmol/L剂量组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,BAC低、高剂量组细胞凋亡率分别在药物作用24、48h时有不同程度的上升,且该促凋亡作用具有剂量、时间依赖趋势。与对照组比较,BAC各剂量组细胞中Bcl-2、P62的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的降低,Bax、Caspase-3、Beclin1、LC3的mRNA和Bax、Active Caspase-3、P62、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平均有不同程度的升高,其中BAC低剂量组Caspase-3的mRNA和Bcl-2、Active Caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达水平,以及BAC高剂量组各目标基因的mRNA和蛋白的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且上述影响均呈剂量依赖趋势。结论:BAC可抑制A549细胞的增殖、促进其凋亡,并且能促进Beclin1、LC3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、Bax、Caspase-3(Active Caspase-3)表达和抑制P62、Bcl-2等自噬/凋亡相关基因及蛋白的表达;其机制可能与BAC通过促进细胞发生过度自噬从而导致细胞凋亡有关。

反相高效液相色谱法检测风湿骨痛胶囊中盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸的含量

目的:建立反相高效液相色谱法检测风湿骨痛胶囊中盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸含量的方法。方法:风湿骨痛胶囊样品经乙腈-甲醇(V∶V=60∶40)溶液提取后进样测定,Shim-pack CLC ODS-C 18色谱柱分离;流动相A为乙腈-甲醇(V∶V=60∶40),流动相B为0.1 mol/L乙酸铵溶液(每1000 ml加0.5 ml冰乙酸),梯度洗脱;检测波长为221 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为25℃;进样量为25μl;外标法测定。结果:盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸在该色谱条件下分离良好,阴性样品溶液无干扰峰;盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸分别在0.4~40.0、0.496~49.6和0.991~99.1μg/ml范围内具有良好的线性关系,r均>0.995,平均加标回收率分别为98.50%、96.94%和98.28%,重复性RSD分别为4.21%、3.08%和3.17%,仪器精密度良好。结论:本方法具有样品处理简单、检测效率高和结果准确等特点,适用于风湿骨痛胶囊的质量控制。

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响.方法:将对数期生长RPMI8226细胞随机分为空白对照组、BMA(0. 1、0. 5、1、10、100μmo L)组,24 h后用CCK8测定各组光密度(A),根据A值计算出半数抑制质量浓度(IC50);根据所测IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组、阴性对照组、BMA(4、6、8μmo L)各组,作用12～48 h,用CCK8测定不同作用时间下各组RPMI8226细胞A值,计算出各组增殖抑制率;根据BMA对RMPI8226增殖抑制率的影响规律再设空白对照组、BMA(4、8μmo L)组,作用24、48 h,用Annexin V/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:作用24 h后,各组BMA换算成质量浓度,在13～13 000 ng/m L(即1～10μmo L)质量浓度,各组A值随药物质量浓度的增加而减少,P <0. 05,其IC50质量浓度为1 040 ng/m L;作用12～48 h,各组细胞增殖抑制率随加入的BMA的增加、作用时间的增加而增加,各组P <0. 05;作用24、48 h后各组细胞凋亡率随加入BMA的增加、作用的增加而增大,各组P <0. 05.结论:BMA能抑制RPMI8226增殖并使其凋亡.

苯甲酰乌头原碱对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞凋亡、炎症因子的影响

目的:探究苯甲酰乌头原碱(BAC)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡、炎症因子的影响及具体凋亡机制,为RA的临床治疗提供参考。方法:募集24例高度活动期RA患者(DAS28评分>5.1分),同期纳入性别、年龄匹配的16例健康体检者为正常对照组(HC组)。采用梯度离心法分离PBMC;分别检测加药前及最终质量浓度为0,150,300μmol·L^(-1) BAC干预RA组、HC组PBMC细胞24 h后,实时荧光定量PCR与Western blot法检测细胞中凋亡相关基因及蛋白的表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中炎症因子白细胞介素(IL)^(-1)、IL-6、IL^(-1)7、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:RA组PBMC细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量增加,Bax、Caspase-3/Cleaved Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量减少,与HC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。加入BAC干预后,150,300μmol·L^(-1) BAC加药组PBMC凋亡率增加,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。150,300μmol·L^(-1) BAC加药组PBMC中Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量明显降低,Bax、Caspase-3/Cleaved Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量明显增加,与0μmol·L^(-1) BAC组比较,除150μmol·L^(-1) BAC组Bax mRNA和蛋白表达外,其余差异均有统计学意义(P<0.05)。同时BAC可以降低PBMC培养液中的炎症因子IL^(-1)、IL-6、IL^(-1)7、TNF-α水平,300μmol·L^(-1) BAC组最为显著,与0μmol·L^(-1) BAC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RA患者血清中炎症因子IL^(-1)、IL-6、IL^(-1)7、TNF-α水平升高,PBMC凋亡减少,BAC可能通过Bcl-2/Bax、Caspase-3途径诱导PBMC细胞凋亡,并能降低PBMC中炎症因子水平。

HPLC同时测定人血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量

目的：采用HPLC建立附子中4种生物碱类成分在人血浆中含量测定方法。方法：色谱条件为迪马钻石C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：A为乙腈-四氢呋喃（62∶38）,B为10 mmol/L醋酸铵水溶液,梯度洗脱;流速：1.0 mL/min;检测波长：240 nm;柱温：30℃。结果：新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的线性范围分别为1.69~1 690μg/mL、1.58~1 582μg/mL、2.56~2 563μg/mL和3.60~3 597μg/mL（r〉0.9985）,加样回收率RSD〈4.5%。结论：该方法灵敏度高、精密度好,可用于附子中4种生物碱成分的药物动力学研究。

HPLC法测定强筋健骨丸中3种乌头原碱的含量

目的建立强筋健骨丸的含量测定方法。方法以君药制川乌、制草乌中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及苯甲酰新乌头原碱为目标成分,采用HPLC法,色谱柱Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1mol·L^-1醋酸铵溶液(B);流速:1.0mL·min^-1;检测波长:235nm。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱质量浓度分别在7.580~121.280(r1=0.9999),1.576~25.216(r2=0.9998)和7.732~123.712(r3=0.9999)mg·L^-1范围内线性关系均良好,回收率分别为100.1%,100.0%和99.8%,RSD值分别为0.8%,1.5%和0.6%。结论该方法结果准确、稳定、可靠,能用于强筋健骨丸中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱及苯甲酰次乌头原碱的含量测定,可有效控制产品质量。

小活络丸中乌头类生物碱成分含量测定方法的建立

目的:建立小活络丸中生物碱成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱与苯甲酰新乌头原碱的含量测定方法,以完善其质量标准。方法:采用高效液相色谱法,选择PICKERING C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇、乙腈和0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-)1,柱温25℃,检测波长232 nm,进样量15μL。结果:乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及苯甲酰新乌头原碱分别在各自范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.8%(RSD=0.8%)、99.9%(RSD=1.0%)、100.6%(RSD=1.4%)、100.8%(RSD=1.5%)、100.9%(RSD=1.5%)、100.6%(RSD=0.8%)。5批样品中上述6个成分含量范围分别为0.5~2.9、5.4~27.4、0.5~10.5、18.8~24.6、18.8~30.2及142.4~181.6μg·g^(-1)。结论:所建立的同时测定6个生物碱含量的测定方法可准确测定小活络丸中生物碱成分的含量,有助于提高小活络丸的质量标准。

三七伤药片中6种乌头类生物碱含量测定及化学计量学分析

目的:采用高效液相色谱法,建立三七伤药片中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱6种生物碱类成分的含量测定方法,并根据测定结果进行化学计量学分析。方法:采用混合型阳离子交换反相吸附树脂(MCX)固相萃取小柱对供试品进行纯化,高效液相色谱法测定,使用COSMOSIL C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为25℃,检测波长为232 nm。采用SIMCA软件对结果进行处理,运用主成分分析法分析影响产品差异的关键因素。结果:乌头碱、次乌头碱、新乌头碱与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱分别在各自范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率(RSD)分别为101.8%(1.6%)、100.6%(1.4%)、97.8%(1.1%)、100.8%(1.5%)、101.0%(1.6%)、100.7%(0.8%)。17批次样品测定结果显示不同批次之间6种生物碱含量存在较大差异;单酯型生物碱的含量是影响产品之间差异的关键因素。结论:所建立的方法准确可靠、灵敏度高,可用于三七伤药片中生物碱类成分的含量测定,为三七伤药片质量控制方法的建立提供依据。

高效液相色谱法测定复方夏天无片中原阿片碱和苯甲酰乌头原碱含量

目的建立同时测定复方夏天无片中原阿片碱和苯甲酰乌头原碱含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为1%冰乙酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~5 min时94%A,5~27 min时94%A→58%A,27~30 min时58%A→94%A,30~35 min时94%A),柱温为30℃,测定波长为265 nm,流速为1.0 m L/min,进样量为25μL,外标法定量。结果原阿片碱和苯甲酰乌头原碱质量浓度在0.25~10.0μg/m L范围内与峰面积线性关系良好(r>0.995,n=6);平均加样回收率分别为97.47%和100.50%,RSD分别为4.37%和4.31%(n=6)。结论该方法操作简便、快速、准确、重复性好,可用于同时测定复方夏天无片中原阿片碱和苯甲酰乌头原碱的含量。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆苯甲酰新乌头原碱浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS法)测定大鼠血浆苯甲酰新乌头原碱浓度的方法,并初步研究其在大鼠体内的药代动力学(药动学)行为。方法以甲基叔丁基醚液-液萃取大鼠血浆样品,采用UltimateAQ-C18column(3.0μm,2.1mm×100.0mm)色谱柱进行色谱分离,柱温40℃,以流动相乙腈(A,含体积分数0.001甲酸)-体积分数0.001的甲酸溶液(B)梯度洗脱(0~0.5min,体积分数0.25A;0.5~3.5min,体积分数0.25~0.70A;3.5~4.0min,体积分数0.70A),流量0.4mL/min,进样量10μL,分别以质子数/电荷数的比值(m/z)590.5→540.4和m/z646.7→587.0为待测成分及内标的质谱检测条件。大鼠灌服5、10、20mg/kg苯甲酰新乌头原碱后,分别在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、9.0、12.0和24.0h取样,测定其血浆中苯甲酰新乌头原碱的浓度,应用药动学数据处理软件DAS2.0计算药动学参数。结果苯甲酰新乌头原碱质量浓度为0.1~1000.0μg/L范围内线性关系良好,定量下限为0.1μg/L;苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均高于93%,日内和日间相对标准差(RSD)均<10.7%;苯甲酰新乌头原碱样品在室温和低温长期放置稳定性、冻融稳定性、预处理后供试液稳定性RSD分别小于10.2%、4.6%、10.9%、3.4%;苯甲酰新乌头原碱在大鼠体内吸收较快,达峰时间约2h,但是吸收较差,绝对生物利用度仅有0.76%。结论本文建立的LC-MS/MS法操作简便,稳定可靠,适用于苯甲酰新乌头原碱的药动学研究。

高效液相色谱法测定附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱和新乌头碱的含量

目的对附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱进行含量测定。方法运用高效液相色谱法(HPLC),Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.015%二乙胺-乙腈溶液,线性梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长240 nm。结果苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱分别在0.088 8-0.888 0μg(r=0.999 8)、0.199 0-1.990 0μg(r=0.999 8)范围内,具有良好的线性关系;平均加样回收率依次为99.11%、99.13%,相对标准偏差(RSD)分别为0.76%、1.61%。结论该方法快速、简便,重现性好,可作为该制剂的定量分析方法。