志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系

目的:研究志贺菌的耐药状况,检测临床分离志贺菌主动外排泵acrAB-tolC基因及调控基因marOR的突变情况,并探讨其与耐药性的关系。方法:对159株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明6种药物的药敏试验和有机溶剂耐受试验,对其acrAB-tolC基因和marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析。结果:159株临床分离的志贺菌属细菌筛选出4株敏感株、18株耐单药株和137株耐多药株,耐多药率为86.2%(137/159);159株中有122株对有机溶剂耐受,耐受率为76.7%(122/159);159株均扩增出acrAB-tolC基因和marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析,155株耐药菌株中,marOR基因的突变率为17.4%,acrA基因的突变率为5.8%,acrB基因的突变率为3.9%,tolC基因的突变率为2.6%;4株敏感株未发现marOR、acrA、acrB和tolC基因突变。结论:临床分离的志贺菌耐多药率和有机溶剂耐受率均较高,且存在较高的marOR基因突变率。

细菌外排泵系统acrAB-tolC的研究进展

研究表明,细菌产生多重耐药（MDR）主要是由主动外排系统引起的,在大肠埃希菌所有转运蛋白基因中,外排基因所占比例达到6%-18%,其中acrA B-tolC系统在MDR过程中起到举足轻重的作用。研究发现,acrA B-tolC外排系统在多种细菌中存在,如大肠埃希菌、产气肠杆菌、费氏柠檬酸杆菌、欧文氏菌属、沙门氏菌、阴沟肠杆菌和菠萝泛菌等革兰氏阴性菌。

细菌AcrAB-TolC型外排泵中AcrA蛋白的进化分析

研究不同耐药细菌AcrAB-Tolc型外排泵中关键蛋白AcrA的序列,针对其保守及非保守氨基酸残基进行该类蛋白的进化分析,构建蛋白进化树。收集来源于不同细菌的已知序列的AcrA蛋白,去除冗余并进行序列比对之后,根据其序列比对结果的相似性、氨基酸残基的保守性研究其进化特征。结果表明,不同细菌的AcrA蛋白部分氨基酸残基具有高度的保守性,这与其实现生物学功能有关,非保守区域是主要的进化区域。可为不同菌株的进化提供参考,同时为以AcrAB-Tolc型外排泵为靶标的新药研究提供相关数据。

AcrAB-TolC电泵系统介导的鼠伤寒沙门菌多重耐药机理研究

目的探讨AcrAB-TolC电泵系统在鼠伤寒沙门菌产生多重耐药中的作用。方法利用基因敲除技术,敲除多重耐药鼠伤寒沙门菌野生株X2的acrAB基因和tolC基因,获得两个突变株△tolCX2和△acrABX2。通过基因敲除前后细菌耐药水平的改变,验证AcrAB-TolC系统在鼠伤寒沙门菌产生多重耐药中的作用。结果△tolCX2和△acrABX2对万古霉素耐药,对丁胺卡那霉素、头孢曲松敏感,与野生株X2一致;但对11种抗生素由耐药变为敏感。结论AcrAB-TolC系统与鼠伤寒沙门菌多重耐药的产生有关。

阴沟肠杆菌AcrAB-TolC外排系统基因的相关性研究

目的了解阴沟肠杆菌AcrAB-TolC外排系统基因的携带情况,探讨其与阴沟肠杆菌对常用抗菌药物耐药之间的关系。方法采用法国梅里埃Vitek 2 compact仪对临床分离的136株阴沟肠杆菌进行鉴定和药敏;采用PCR法检测AcrABTolC外排系统acr A,acr B,acr R和tol C四种基因在阴沟肠杆菌中的分布情况,并根据检测结果进行耐药率分组比较。结果136株阴沟肠杆菌对头孢曲松的耐药率达52.2%,对亚胺培南的耐药率高达15.4%;AcrAB-TolC外排系统tol C基因的检出率最高(95.6%),其次为acr R基因(80.9%),acr A基因的检出稍低(70.6%),acr B基因的检出率最低(61.7%)。同时携带四种基因的菌株最多,占36.8%;各外排系统基因阳性组的耐药率均高于阴性组。结论阴沟肠杆菌耐药问题较严峻,AcrAB-TolC外排系统acr A,acr B,acr R和tol C四种基因在阴沟肠杆菌中普遍且存在差异性,并在多药耐药形成中发挥了重要作用。

大肠杆菌AcrAB-TolC外输泵的研究进展

大肠杆菌是主动外输泵最多的一种细菌,其中AcrAB-TolC是最主要的、占绝对优势的多药外输系统,在多药耐药过程中起重要作用。许多学者对AcrAB-TolC的结构、功能及表达调控机制做了深入研究,为解决多药耐药性问题奠定了基础。本文就大肠杆菌AcrAB-TolC的结构特征和表达调控机制等进行了综述。

AcrAB-TolC外排泵在多重耐药肠杆菌中的作用研究进展

耐多药肠杆菌的出现严重威胁着人类健康。AcrAB-TolC外排泵的过量表达是引起肠杆菌多重耐药的主要机制之一,其主要由周质融合蛋白AcrA、外膜通道蛋白TolC和药物质子转运子AcrB构成,受整体调控因子、局部调控因子以及环境中的化学物质等调节。对AcrAB-TolC外排泵的研究,不仅有助于阐明相关耐药本质,还有助于研制有临床意义的外排泵抑制剂(EPIs),为解决肠杆菌多重耐药问题提供新思路。本文对AcrAB-TolC外排泵的结构、调控等方面的研究进展作一综述。

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。

大肠埃希菌AcrAB-TolC外排泵表达水平调控机制的研究进展

AcrAB-TolC外排泵的过量表达是引起大肠埃希菌多重耐药的主要原因。AcrAB-TolC外排泵的表达水平主要受其正向调节因子、负向调节因子以及环境中的化学物质等调节。本文综述了近年来AcrAB-TolC外排泵调控因子方面的研究进展。

大肠杆菌的AcrAB-TolC多药外排泵及其调控研究进展

多药外排泵造成了细菌的多种药物的耐药现象,这对感染性疾病的防治提出了挑战。对于多药外排泵的研究不仅使人们认识细菌耐药性机制,而且为细菌耐药性的防治提供思路。大肠杆菌AcrAB-TolC外排泵系统的结构和调控机制研究取得了一些新进展,这为病原菌的相关研究提供了参考,本文对其进行了综述。

主动外排系统AcrAB-TolC与肺炎克雷伯菌耐药性关系研究

目的探讨主动外排系统AcrAB-TolC与肺炎克雷伯菌耐药性的关系。方法运用琼脂稀释法检测抗生素和消毒剂对肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度;PCR扩增肺炎克雷伯菌acrA、acrB和toiC基因,分析AcrAB-TolC与肺炎克雷伯菌耐药的关系。结果肺炎克雷伯菌82.55%检出acrA基因,85.37%检出acrB基因,81.60%检出toiC基因,三基因均阳性,三基因均阴性、部分基因阳性分别占71.22%、9.91%和18.87%;AcrAB-TolC阳性组对阿奇霉素、四环素、氯霉素、苯扎溴胺(1︰49)、碘伏(1︰4)、消佳净(1︰49)的耐药率与AcrAB-TolC缺陷组、AcrAB-TolC阴性组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎克雷伯菌对阿奇霉素、四环素、氯霉素及中间工作浓度的消毒剂产生耐药性与携带主动外排系统AcrAB-TolC关系密切。

细菌外排泵AcrAB-TolC研究进展

细菌的耐药性系全球性问题。抗生素的长期或不合理使用造成严重耐药、多重耐药逐年增加,给抗感染的临床治疗带来了严峻挑战。近年来抗菌药物耐药机制特别是主动外排泵机制的研究为揭示细菌严重耐药、多重耐药性提供了重要信息。现已证实外排泵AcrAB-TolC（efflux pump AcrAB-TolC）广泛存于各种细菌,如大肠埃希菌、沙门菌、产气肠杆菌、志贺菌等。本研究综合近年来的研究成果,对外排泵AcrAB-TolC的结构、外排机制及其调控机制的研究进展作一综述。

苦豆子碱对耐多药大肠杆菌AcrAB-ToLC蛋白表达量影响

本文通过微量肉汤稀释法筛选出了2株耐环丙沙星(CIP)、头孢噻肟(CTX)、阿米卡星(AN)、氨苄西林(AM)药物的多重耐药性大肠杆菌,测定了苦豆子碱对大肠埃希菌多重耐药菌株的MIC值为12.5mg/mL,MH肉汤稀释棋盘式法测定环丙沙星联合苦豆子碱、CCCP MIC值,通过计算部分抑菌浓度指数判断环丙沙星联合苦豆子碱呈协同作用,优化试验确定最适宜的逆转条件对耐药性大肠埃希菌进行逆转,对编码外排泵系统中AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白基因进行克隆、测序,同时应用实时定量PCR检测苦豆子碱对多重耐药菌株作用前后AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白的mRNA表达量影响。数据分析发现作用前后编码大肠杆菌外排泵系统AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白基因碱基序列未发生变化,但苦豆子碱作用后外排泵系统中AcrA、AcrB蛋白mRNA表达量下降,负调控蛋白AcrR mRNA表达量上升。苦豆子碱从整体上可以抑制耐多药大肠埃希氏菌AcrAB-ToLC的蛋白mRNA表达量,使大肠杆菌多药外排泵AcrAB-ToLC的蛋白mRNA表达量下降,从而恢复大肠杆菌对抗生素的相对敏感性。实验结果为深入研究苦豆子碱逆转耐药性大肠杆菌其它机制提供了依据和参考.

AcrAB-TolC主动外排系统与猪源耐药大肠杆菌多重耐药的相关性

以前期获得的25株猪源耐药大肠杆菌为试验菌株,采用药敏纸片法测定以上分离菌株对氟苯尼考、多西环素、庆大霉素等11种药物的敏感性,并分析其多重耐药表型;采用PCR方法和实时荧光定量PCR方法分别检测25株猪源大肠杆菌中AcrAB-TolC主动外排基因的携带率以及不同耐药数量的多重耐药菌株的外排泵基因arA和acrB的表达量,同时分析其主动外排调控基因marA、soxS、robA和acrR相对表达量的差异,从mRNA水平上探讨外排泵基因表达量和调控因子与大肠杆菌多重耐药性的相关性。结果显示,25株耐药大肠杆菌中acrA、acrB和tolC等3种主动外排基因的携带率分别为68.00%、72.00%和76.00%;acrA、acrB这2种主动外排基因以及调控基因marA和soxS的相对表达量和多重耐药的耐药谱数呈正相关,调控基因acrR的相对表达量和多重耐药的耐药谱数呈负相关;robA调控基因的表达量均低于标准菌株,且与耐药谱数无明显相关性。结果表明,猪源耐药大肠杆菌携带acrA、acrB、tolC等3种基因主动外排基因的携带率较高,且与多重耐药菌株的耐药谱具有相关性;调控因子的表达量亦与多重耐药的耐药谱具有相关性。

细菌AcrAB-TolC外排泵在幽门螺杆菌耐药中的作用

全世界50％以上的人都存在H.pylori感染,一旦感染,除非应用抗菌药物进行根除治疗,否则感染将持续终身.由于抗菌药物的广泛应用,H.pylori的耐药率不断上升,近年来发现同时对3种以上抗菌药物耐药的多重耐药菌株也非常多.Wueppenhorst等[1]的研究显示,在临床分离的H.pylori菌株中,有15％的菌株对3种或3种以上的抗菌药物多重耐药.新近在我国东南沿海地区开展的一项涉及17731株临床分离的H.pylori的耐药筛查中发现,3重或3重以上的耐药率为7.86％,其中97.8％为甲硝唑、克拉霉素和左氧氟沙星同时耐药[2].细菌AcrAB-TolC外排泵在H.pylori耐药中起重要作用.

革兰氏阴性菌AcrAB-TolC多药外排泵结构数据对抑制剂研发的启示

革兰氏阴性菌的多重耐药性已成为全球广泛聚焦的问题。近年研究发现,耐药结节细胞分化(resistance-nodulation-cell division,RND)家族外排泵的过表达,与革兰氏阴性菌的多重耐药性密切相关。在RND家族中,广泛存在于革兰氏阴性菌中的AcrAB-TolC外排泵被认为是导致多重耐药性的主要原因之一。为了开发有效的抑制剂,需要对AcrAB-TolC外排泵的结构有一个清晰的认识。以往对该外排泵结构的研究主要局限于体外采用X射线晶体学技术或冷冻电镜单颗粒分析技术来解析其单个组分或全泵的结构。细胞冷冻电子断层扫描技术为揭示AcrAB-TolC外排泵在天然细胞膜环境中的组装和运行机制提供了新的见解,本文综述了AcrAB-TolC不同层级的结构数据在研发外排泵抑制剂方面的贡献。

苦参碱逆转外排泵系统AcrAB-ToIC介导的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药性

目的评估苦参碱对由外排泵AcrAB-TolC介导的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素耐药的影响并探究其逆转耐药性的相关调控机制。方法使用棋盘稀释法,分别设置阴性对照组、阳性对照组、替加环素组、苦参碱组、联合用药组;培养24 h后,酶标仪测定吸光度,记录各药物组的最低抑菌浓度(MIC)、计算抑菌率和部分抑菌浓度指数(FIC);取各药物组MIC对应孔和阳性对照孔,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测AcrAB-TolC外排泵系统调控基因AcrB、MarA、RamA、AcrR的表达情况。结果与单用替加环素或苦参碱相比较,替加环素与苦参碱联合应用能更明显的抑制外排泵系统AcrAB-TolC介导的替加环素耐药的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的生长(P<0.05),替加环素与苦参碱的药理主要表现为协同或相加作用;联合用药下,替加环素与苦参碱的MIC值均明显降低,替加环素的MIC均能恢复至替加环素敏感MIC值;苦参碱单独或联合作用后,AcrAB-TolC外排泵RamA、AcrB表达明显降低(P<0.05),AcrR基因表达明显升高(P<0.05)。结论苦参碱能下调耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的AcrAB-Tolc外排泵调控蛋白RamA和AcrB基因的表达、及上调AcrR基因的表达,起到逆转替加环素耐药的作用。

重组细菌多药外排泵AcrAB-TolC的转运功能和动态组装

【背景】多药外排泵多以膜蛋白复合体形式存在,是导致细菌耐药性的重要原因。外排泵的转运功能和组装过程对于细菌耐药性和药物研发具有重要意义。【目的】以多药外排泵耐药结节细胞分化家族(resistance-nodulation-division family,RND)的重要成员AcrAB-TolC复合体为对象,研究其转运活性和体外组装特性。【方法】基于大肠杆菌AcrAB-TolC复合体基因序列,分别构建含有acrA、acrB、tolC基因的重组质粒,表达和纯化复合体各亚基,利用荧光光谱、等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)等技术分析复合体及亚基的转运功能、亚基与底物的相互作用,以及亚基间的相互作用和动态装配。【结果】实现了AcrAB-TolC复合体各组分的表达和纯化(纯度>98%),证实表达有各组分的活细胞提高了对于溴化乙锭(ethidium bromide,EB)的转运活性,并发现群体感应效应信号分子N-hexanoyl-L-homoserine lactone(C6-HSL)能够抑制AcrB、TolC对于EB的转运活性。ITC结果进一步证实了C6-HSL与AcrB、TolC的相互作用。ITC结果还显示AcrA分别与AcrB、TolC之间存在明显的相互作用,而AcrB与TolC之间无明显的相互作用。在体外装配实验中观测到AcrAB-TolC亚基的单分子荧光强度随时间增加,证实了复合体亚基在膜上的动态组装过程。【结论】实现了AcrAB-TolC外排泵及亚基的表达和纯化,证实了AcrAB-TolC对底物的转运活性及与底物的相互作用,观察到AcrAB-TolC的动态组装过程。以上结果为研究多药外排泵导致的细菌耐药性及抗菌策略具有重要意义。

志贺菌临床分离株AcrAB-TolC外排泵mRNA转录水平与氟喹诺酮耐药的相关性

目的探讨志贺菌临床分离菌株Acr AB-Tol C外排泵的3个组成基因(acr A、acr B、tol C)m RNA转录水平与其氟喹诺酮耐药水平。方法收集2009至2015年于天津医科大学总医院、天津医科大学第二医院和天津市儿童医院3家三甲医院就诊腹泻患者的非重复粪便样本,分离培养获得192株志贺菌临床分离菌株,采用K-B纸片法对所有菌株进行体外药敏试验;根据药敏试验结果,将志贺菌株分为氟喹诺酮耐药组和氟喹诺酮全敏感组;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,检测上述两组志贺菌临床分离株Acr AB-Tol C外排泵基因在m RNA转录水平的相对表达量,使用SPSS 17.0软件对结果进行统计学分析。结果氟喹诺酮耐药组志贺菌株共计9株(对3种及3种以上氟喹诺酮耐药的菌株),依次编码为F2、N8、F44、157、187、368、1113、3171和3327,氟喹诺酮全敏感组志贺菌株共计9株,依次编码为F13、1、22、174、186、377、1506、3283和3326;耐药组外排泵acr A基因的m RNA转录水平高于全敏感组菌株,差异具有统计学意义(t=2.97、P=0.02);耐药组外排泵acr B和tol C基因的m RNA转录水平均值虽然高于全敏感组相应基因m RNA转录水平,但差异均无统计学意义(t=2.84、P=0.30,t=1.17、P=0.29)。结论受试菌株外排泵acr A基因m RNA转录水平增高与氟喹诺酮耐药存在一定的关联。

耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌的耐药机制及临床感染分析

目的了解碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌的常见碳青霉烯酶基因型和主动外排系统的AcrAB-TolC基因型,分析其临床感染资料,为医院感控的精准实施提供依据。方法收集经法国梅里埃Vitek 2 compact仪器鉴定药敏的碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌76株,采用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型确证,利用PCR扩增技术检测碳青霉烯酶基因(IMP和KPC)及主动外排系统中AcrAB-TolC外排泵基因(acrA,acrB和tolC),回顾性分析相关的临床感染资料。结果 76株碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌仅替加环素保持较高的敏感性,其余常用抗菌药物均高度耐药;改良Hodge试验66株阳性;经PCR扩增IMP型碳青霉烯酶检出率为63.2%,KPC型为7.9%;AcrAB-TolC基因型中acrA基因的检出率为78.9%,acrB基因为50.0%,tolC基因高达100%;基础疾病的老年人、留置导尿管、气管插管及使用过抗菌药物的感染病例占60%以上,是碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌感染的高风险因素。结论以IMP基因型为主的碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌同时存在AcrAB-TolC外排基因型;加强抗菌药物的优化管理,能有效控制耐药株的传播。