甲状旁腺激素化学发光免疫分析试剂盒的开发及临床应用

目的用双抗体夹心法建立人血清甲状旁腺激素的化学发光免疫测定方法。方法反应模式为生物素化的甲状旁腺激素抗体和吖啶酯标记的甲状旁腺抗体和样本中的抗原形成“三明治”复合物,通过加入发光底物读取信号值来计算待测物浓度,并且分析解决钩状效应的方法。结果建立了人血清甲状旁腺激素的双抗体夹心化学发光免疫测定方法,所建立的方法具有良好的分析性能和热稳定性。采用四参数方程建立测定甲状旁腺激素的标准曲线。空白限为0.2 pg/mL,批内精密度为4.07%~7.17%,批间精密度为3.30%~8.91%,回收率为91%~109%。加速稳定性试验显示,试剂在37℃表现出良好的稳定性。当甲状旁腺激素浓度为40000 pg/mL时,未观察到钩状效应。用所建立的方法与贝克曼库尔特UniCel DxI 800免疫分析系统同时测试207份血清样本,进行比对分析,线性回归方程为y=0.986x+0.5594,相关系数(r^(2))为0.9739,结果具有很好的一致性。结论本研究的试剂盒检测结果与临床结果符合较好,试剂盒可以应用于临床辅助诊断。

Synthesis of Acridinium Photocatalysts via Site-Selective C–H Alkylation

Acridinium dyes have been broadly used as photocatalysts,but it remains synthetically challenging to fine-tune their catalytic performance by functionalization of their structural cores.Acridinium photocatalysts are usually prepared through de novo synthesis,which involves difficult steps and requires sensitive organometallic reagents.

平足蛋白吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立及在乳腺癌检测中的临床应用

目的建立一种以活化吖啶酯标记抗人平足蛋白抗体为标记物检测人血清中平足蛋白(PDPN)的磁微粒化学发光免疫检测方法并进行在乳腺癌相关疾病方面的临床应用验证。方法以包被链酶亲和素磁微粒-活化生物素标记抗人平足蛋白抗体为固相分离载体,生物素标记一株鼠抗人平足蛋白单克隆抗体,吖啶酯标记另一株鼠抗人平足蛋白单克隆抗体,建立人血清样本中PDPN定量免疫分析方法。结果在线性范围1.00~800.00ng/mL内,相关系数r为0.9990,检出限为0.52ng/mL;批内重复性不超过5.0%,批间差不超过10.0%;正常参考区间为小于4.50ng/mL;测定乳腺癌临床样本,特异性为88%和灵敏度为87%。结论建立了定量检测人血清中PDPN水平的化学发光免疫分析法,对乳腺癌的发生发展起了辅助诊断作用。

t-PAIC单克隆抗体制备及磁微粒化学发光免疫检测

以组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂复合物(t-PAIC)为免疫原制备和筛选了一对特异性单克隆抗体,并建立了一种检测人体血浆t-PAIC的磁微粒化学发光免疫检测方法。通过与参比方法比对,选定了反应速度更快的一步法作为反应模式,然后对t-PAIC检测方法的检测性能进行了评估。结果显示:该方法的空白限为0.43 ng/mL,检出限为0.91 ng/mL;线性范围为0.91~100ng/mL;重复性CV小于4%,精密度CV小于3%;样本回收率在100%~110%之间;常见干扰物对检测结果无明显影响。构建了t-PAIC检测方法的参考区间,健康成年男性参考范围为1.85~15.91 ng/mL,健康成年女性参考范围为1.90~9.43 ng/mL。t-PAIC检测方法反应快速,在血栓疾病诊断中有重要的应用价值。

碘化10-乙羧基吖啶-9-羧酸苯酯的电致化学发光行为研究

研究了碘化 1 0 -乙羧基吖啶 -9-羧酸苯酯 ( CACPEI)的电致化学发光行为 .结果表明 ,在 KNO3 介质中 ,于 Pt电极上施加正矩形脉冲电压时 ,1 0 -乙羧基吖啶 -9-羧酸苯酯产生很强的电致化学发光 ( ECL)信号 ,信号强弱受电化学参数和发光反应条件的影响 ,探讨了可能的发光机理 .在最佳条件下发光信号与 CACPEI的浓度在 5 .0× 1 0 - 1 0 ～ 1 .2× 1 0 - 7g/ m L范围内呈良好的线性关系 .检出限可达 2 .4× 1 0 - 1 0 g/ m L.

促甲状腺激素化学发光免疫分析的研究

抗原、抗体间可发生特异性免疫反应 ,将发光物质标记在抗体上 ,经免疫反应和化学发光反应 ,测量光信号可对待测抗原进行定性、定量分析。本实验以吖啶酯DMAE·NHS标记TSH单克隆抗体 ,建立了TSH化学发光免疫分析方法。该方法分析灵敏度为 0 .0 1mIU/L ,批内相对标准偏差为 4 .2 9%～ 6 71% ,批间相对标准偏差为 4 .36 %～ 8.14 % ;平均回收率为 98%。与TSHIRMA法的相关方程为Y =0 .0 2 +0 .92X ,相关系数为 0 .993;与CibaCorningTSHCLIA测量值的相关方程为Y =- 0 .16 +0 .92X ,相关系数为 0 .986。

人表皮生长因子的化学发光免疫分析法及其临床应用

本文建立的人表皮生长因子（ｈＥＧＦ）发光免疫法采用吖啶酯标记抗体，灵敏度可达２ｎｇｈＥＧＦ／ｍｌ，能满足尿中ｈＥＧＦ的测定。测定了正常人、孕妇及膀胱癌病人尿中ｈＥＧＦ的含量，孕妇尿中ｈＥＧＦ含量明显高于正常女性，膀胱癌患者尿中ｈＥＧＦ含量明显低于正常人。

吖啶酯化学发光测量参数和睾酮抗体工作浓度的最佳化

１０－甲基吖啶－９－羧酸［４－（Ｎ－睾酮－３－羧甲氧基肟）－氯乙基］苯酯（Ｔｏ－３－ＡＥＰＭＡＣ）发光测量的时间参数在低浓度区域测量十分重要．本文报道在０．００～０．２１ｓ间有一占发光总面积４．１０±２．２１％（±ｓ）的溶剂峰；峰发光的起始和终点在０．３２～３．９１５间，峰时间参数位于０．４３～２．２２ｓ间，反应速率分析也证实时间参数的实验结果．选择０．３０ｓ延迟时间和１０ｓ积分时间的化学发光积分参数测量既可排除溶剂发光的干扰，又可较精密地采集到Ｔ０－３ＡＥＰＭＡＣ的全部发光信号。而单位时间的发光峰高测量因随剂量增加峰时间参数延长不能满足建立超微量化学发光免疫化学分析测量的要求．本文根据化学发光免疫化学高灵敏和高精密的分析要求，通过抗体稀释曲线极值的优选、最大反应变化的标定和最小反应标准误点分析使睾酮抗体的工作浓度最佳化，即稀释度为１：１８０００．

化学发光物质9-[2′，6′-二甲基-4′-(琥珀酰亚胺氧羰基)苯氧羰基]-10-甲基吖啶-单甲基-磺酸盐的合成

报道了一种化学发光物质吖啶酯衍生物9-[2′，6′-二甲基-4′-（琥珀酰亚胺氧羰基）苯氧羰基]-10-甲基吖啶-单甲基-磺酸盐（DMAE·NHS）的合成，合成共经历7个步骤，每步合成的产物经IR，^1H NMR，MS和元素分析表征，结果表明合成产物为所期望的化合物，该合成产物显示为一种非常理想的化学发光物质。

新吖啶酯发光剂测定过氧化氢的研究

本文报道了新发光剂氟磺酸-10-甲基-9-(对甲酰基苯基)羧酸吖啶酯测定饮用水和降水中H_2O_2的研究。该方法无需任何催化剂,选择性好,灵敏度高,检测限达1.2×10^(-9)mol/L,线性范围宽(3×10^(-9)～1×10^(-2)mol/L),测定5×10^(-9)mol/L和6.6×10^(-7)mol/L H_2O_2时,相对标准偏差分别为3.2％和1.6％。

磁微粒吖啶酯化学发光法检测AMH的性能评估及成年女性AMH参考区间的建立

目的评价磁微粒吖啶酯化学发光法检测抗苗勒管激素(AMH)的性能,建立成年女性AMH的参考区间。方法依据美国临床试验室标准化协会(CLSI)相关文件对磁微粒吖啶酯化学发光法检测AMH的性能(空白限、检测限、定量限、精密度,线性范围)进行评价。采用线性回归分析和相对偏移评估电化学发光法与磁微粒吖啶酯化学发光法检测AMH的一致性。评估血清样本在不同保存条件下的稳定性及不同样本类型之间的差异。采用百分位数法建立成年女性AMH的参考区间。结果磁微粒吖啶酯化学发光法检测AMH的空白限为0.001 ng/mL、检出限为0.02 ng/mL、定量限为0.08 ng/mL,高、低值样本的重复性分别为1.6%、1.3%,批间精密度分别为2.1%、2.2%,总不精密度分别为3.1%、3.2%,线性范围为0.02~27.22 ng/mL。电化学发光法与磁微粒吖啶酯化学发光法检测AMH的相关性良好(r=0.9753)。血清和血浆的检测结果呈线性关系。血清样本在室温(20~25℃)条件下可稳定3 d,在4、-20、-80℃条件下可稳定7 d。20~24、25~29、30~34、35~39、40~44、45~49和≥50岁女性的AMH参考区间分别为1.20~10.21、1.14~9.17、0.55~8.18、0.25~7.02、0.07~4.59、0.01~2.11、<0.39 ng/mL。结论磁微粒吖啶酯化学发光法检测AMH具有良好的分析性能,建立的AMH参考区间可为临床诊治相关疾病提供依据。

新试剂氟磺酸9,10-二甲基吖啶发光性能及其测定金的研究

本文首次研究了新试剂氟磺酸9,10-二甲基吖啶(DMAF)的发光性能和新化学发光体系DMAF-KOH-H_2O_2-AuCl_4^-的反应机理,建立了一种测定痕量金的新化学发光分析方法。该方法体系简单,选择性良好,灵敏度高,检测限为0.3ng/mL,工作曲线的线性范围0.5～800ng/mL,测定200ng/mL和10ng/mL金标准溶液的相对标准偏差分别为5.0%和6.2%。该方法特别稳定,金试液放置8h,对化学发光反应基本无影响。

测定钴的化学发光新体系

研究了新吖啶衍生物９，１０－二甲基吖啶氟磺酸盐的化学发光特性。建立了测定ＣＯ２＋的化学发光新体系。方法线性范围为１．０ × １０－１０～１．０× １０－７ｇ／ｍＬ；检测限为５．０ × １０－１１ｇ／ｍＬ Ｃｏ２＋。测定５．０ × １０－９ｇ／ｍＬ ＣＯ２＋的相对标准偏差为６．０％。方法选择性好，用于自来水、江水、池塘水中痕量钻的测定，结果令人满意。

睾酮—吖啶酯化学发光示踪剂的制备及评价

本文报道了10-甲基-吖淀-9-核酸[4-(N一睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)的合成、理化鉴定和免疫学评价.制备方法类似于以往甾体激素全抗原的合成,产品的化学发光信号与噪声比高,可测限为0.18fmol,线性可测范围可达6个数量级以上,与抗睾酮血清结合不改变吖啶酯的化学发光动力学和发光效率;免疫化学最高结合率和非特异结合稳定,抗血清稀释曲线比较证明产品的免疫反应性基本无损失,优于鲁米诺及其衍生物制备的示踪剂,符合建立超微量免疫化学分析中标记化合物的要求.

新化学发光试剂氟磺酸9.10—二甲基吖啶测定钴的研究

研究了钴催化氟磺酸9.10-二甲基吖啶的化学发光特性。建立了测定Co^(2)的化学发光新方法。方法线性范围为1×10^(-10)～1×10^(-7)g/ml;检测限为5.0×10^(-11)g/mlCo^(2+)。测定5×10^(-9)g/ml Co^(2+)的相对标准偏差为6.0％。方法可应用于自来水、江水、池塘水中痕量钴的测定。

化学发光法用于芳香酯酶抑制剂体外筛选(英文)

在前期的研究中,我们将9-(4-氯苯氧羰基)-10-甲基吖啶酯三氟甲基磺酸盐(CPOCMA)用于测定血清芳香酯酶活性,取得满意结果.在此基础上,本文以CPOCMA为底物,建立化学发光法评估药物对芳香酯活性影响的新方法.以硝酸甘油为模型药物,比较了化学发光法与UV方法的一致性.并将此法应用于评价三种抗炎药吲哚美辛、阿司匹林和乙酰氨基酚对芳香酯酶活性的影响.药物的加入使血清催化CPOCMA水解的动力学减缓,这表明这些药物均为抑制剂.吲哚美辛、阿司匹林和乙酰氨基酚表现出的IC50值分别为0.254、0.564和0.656 mmol/L,抑制常数ki分别为0.154、1.38和2.98 mmol/L.加入药物后的Lineweaver-Burk曲线表明这三种药物对PON的抑制均为竞争性抑制.根据加入药物后的动力学曲线,其IC50值、抑制常数和米氏常数的变化均表明这三种药物的抑制能力大小顺序:吲哚美辛>阿司匹林>乙酰氨基酚.CPOCMA可以作为PON底物体外评价药物对PON的抑制能力和抑制机理.UV法不适合评价紫外吸收峰与UV法的检测波长重叠的药物,而新建立的化学发光法对这类药物的筛选有独特优势.

牙鲆补体C3 mRNA杂交保护检测技术

应用杂交保护检测(Hybridization Protection Assay,HPA)技术研究建立检测补体C3 mRNA方法。选择牙鲆Paralichthys olivaceus补体C3 mRNA(Genebank accession no.AB021653)设计为长度24个碱基寡核苷酸片断的AE标记寡核苷酸探针(位置=2327-2350,5 CGG GAG TTG TTTG#TG GGTTGA CAC 3),寡核苷酸探针合成过程中在#位加入烷基胺连接臂连接AE。人工合成与探针互补的标准靶寡核苷酸(5 GTGTCA ACC CAC AAA CAA CTC CCG 3)。AE标记寡核苷酸探针活性为6×104RLU/pmol。杂交时间为50 min时,在1×10-3~4×102pmol/mL探针浓度范围内,AE标记探针浓度与发光值之间具有良好的线性关系(R2=0.9996);标准靶寡核苷酸标准曲线说明,在标准靶寡核苷酸浓度为0~320 pmol/mL(含量为0~3200 fmol)时,具有良好的线性关系(R2=0.9922)。

黄嘌呤氧化酶－乙醛－吖啶酯化学发光分析新体系

乙醛在黄嘌呤氧化酶催化作用下，被空气氧化生成乙酸和过氧化氢，酶反应生成的过氧化氢氧化新吖啶酯试剂［１０－甲基－９－（对甲酰苯基）吖啶羧酸酯氟磺酸盐］产生化学发光，化学发光强度与己醛浓度在一定范围内成线性关系．由此建立了一种化学发光分析新体系，用于测定乙醇含量．线性范围２．０×１０－７～１．２×１０－３ｍｏｌ／Ｌ，测定５．０×１０－７ｍｏｌ／Ｌ乙醛，相对标准偏差为６．８％，检测限为１．２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ，测定环境水样中乙醇含量，取得满意结果，回收率为９５～１０６％．

神经生长因子的发光免疫分析法

介绍了一种灵敏的神经生长因子化学发光免疫测定方法。小鼠神经生长因子（ｍＮＧＦ）的抗体ＩｇＧ用亲和层析纯化并用吖啶酯标记。该法可用于大鼠组织中ＮＧＦ含量的测定。方法的灵敏度为１０ｐｇ／ｍＬＮＧＦ；批内批间变异系数分别为８．７％及１３．２％；回收率平均为１０３％。ｍＮＧＦ抗体对人的ＮＧＦ也有极强的交叉反应，故本方法也可能用于病人血清或脑脊液中ＮＧＦ含量的测定。

抗-dsDNA抗体吖啶酯化学发光定量检测方法的性能验证

目的建立抗-dsDNA抗体吖啶酯化学发光定量检测方法并评价其性能。方法以链酶亲和素通用型磁珠为固相,通过生物素-链酶亲和素系统捕获免疫复合物,采用间接法原理建立抗-dsDNA抗体吖啶酯化学发光定量检测方法。对该方法的线性范围、灵敏度、精密度、抗干扰能力进行评价,确定该方法的正常参考值,并进行系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)临床样本检测。结果该方法抗体浓度为50~3000IU/ml时线性良好,最低检测限为1.878~2.535IU/ml(<10IU/ml),3次实验回收率均为95%~100%,准确性好;试剂检测精密度高,批内变异<5%且总变异<10%;干扰实验结果表明样本中含有1200mg/dl、150mg/dl、30mg/dl、30ng/ml、150IU/ml的三酰甘油、血红蛋白、胆红素、生物素、类风湿因子时不影响检测结果。通过检测185例正常人血清,确定正常参考值为100IU/ml,特异性达99%;检测54例SLE患者样本,其阳性率为42.6%,与ELISA参比试剂阳性率(46.3%)相似。结论此吖啶酯化学发光方法检测抗-dsDNA抗体的灵敏度高、精密性好,性能稳定,线性范围可达3000IU/ml,其检测SLE疾病的敏感性与ELISA相当,特异性为99%。检测过程仪器自动化操作,简便、快速、无污染,适用于临床。