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Inhibition of mouse acrosome reaction and sperm-zona pellucida binding by anti-human sperm membrane protein 1 antibody 被引量:2
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作者 Guo-Yan Cheng Jian-Li Shi +4 位作者 Min Wang Yan-Qin Hu Chun-Meng Liu Yi-Fei Wang Chen Xu 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2007年第1期23-29,共7页
Aim: To investigate the possible functions of human sperm membrane protein (hSMP-1) in the process of fertilization. Methods: A 576-bp cDNA fragment of HSD-1 gene coding for the extracellular domain of hSMP-1 was ... Aim: To investigate the possible functions of human sperm membrane protein (hSMP-1) in the process of fertilization. Methods: A 576-bp cDNA fragment of HSD-1 gene coding for the extracellular domain of hSMP-1 was cloned and expressed. The localization of this protein on human and mouse sperm was determined by indirect immunofluorescent staining by using anti-recombinant hSMP-1 (anti-rhSMP-1) antibodies. Sperm acrosome reaction and spermzona pellucida (ZP) binding assay were carried out in 10-week-old BALB/c mice. Results: Recombinant hSMP-1 was successfully cloned and expressed. The expression of the native protein was limited on the acrosome of human and mouse sperm. Treatment of anti-rhSMP-1 antibodies significantly decreased the average number of sperms bound to each egg. Meanwhile, the percentage of acrosome reaction was decreased in comparison to pre-immune control after treatment with anti-rhSMP-1 (P 〈 0.05). Conclusion: The results suggest that anti-rhSMP-1 antibody inhibited mouse acrosome reaction and sperm-ZP binding. 展开更多
关键词 human sperm membrane protein-1 SPAG8 protein gene expression acrosome reaction sperm-oocyte interactions zona pellucida FERTILIZATION
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猪睾丸Dickkopf样顶体蛋白1基因的转录调控分析
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作者 许静 代红梅 +6 位作者 张霞 刘志朋 杨忠 李卫真 付仕颖 克比努尔·库尔班 霍金龙 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期79-88,共10页
【目的】Dickkopf样顶体蛋白1(DKKL1)是一种重要的顶体蛋白,为发掘其重要功能及潜在的临床价值,以版纳微型猪近交系(BMI)为对象,研究其睾丸组织中DKKL1的分子结构、转录调控特征和蛋白质功能。【方法】通过全转录组测序获得BMI DKKL1的... 【目的】Dickkopf样顶体蛋白1(DKKL1)是一种重要的顶体蛋白,为发掘其重要功能及潜在的临床价值,以版纳微型猪近交系(BMI)为对象,研究其睾丸组织中DKKL1的分子结构、转录调控特征和蛋白质功能。【方法】通过全转录组测序获得BMI DKKL1的表达量,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得DKKL1编码区序列并分析其基因结构和蛋白质特征,使用UniProt数据库对DKKL1进行功能注释并分析DKKL1与微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)间的竞争性内源RNA(ceRNA)转录调控。【结果】获得的BMI DKKL1编码区全长为702 bp,位于基因第6号染色体上,有5个外显子和4个内含子;蛋白质功能分析表明,DKKL1包含233个氨基酸,具有疏水性,含磷酸化位点、信号肽和较多的无规则卷曲亚结构;系统进化和同源性分析表明,DKKL1氨基酸序列在哺乳动物间高度保守;蛋白互作分析显示,DKKL1与含螺旋结构域的蛋白155(CCDC155)、转录增强缔合域蛋白2(TEAD2)、RAS癌基因家族成员11B(RAB11B)等多种蛋白互作;基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析表明,这些蛋白富集在典型Wnt信号等通路上;GO功能注释表明,DKKL1在睾酮生物合成过程的负向调控、透明带穿透、顶体泡生成等方面具有重要功能;ceRNA转录调控网络分析表明,DKKL1被miR-15a和miR-15b靶向调控。【结论】本研究获得了BMI睾丸全转录数据,阐明了DKKL1的分子特征、蛋白质功能并构建了转录调控网络。 展开更多
关键词 版纳微型猪近交系 Dickkopf样顶体蛋白1 分子特征 蛋白互作 调控网络
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基于转录组测序分析SPACA1在版纳微型猪近交系睾丸中的表达及转录调控特征
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作者 刘志朋 张霞 +4 位作者 代红梅 杨福华 廖隽锐 许静 霍金龙 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期88-96,共9页
旨在分析版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)SPACA1基因的序列特征、生物学功能及在睾丸中的表达调控模式。选取4头成年BMI公猪的睾丸进行全转录组测序,获得SPACA1基因在睾丸中的表达丰度。采用RT-PCR技术克隆SPACA1的... 旨在分析版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)SPACA1基因的序列特征、生物学功能及在睾丸中的表达调控模式。选取4头成年BMI公猪的睾丸进行全转录组测序,获得SPACA1基因在睾丸中的表达丰度。采用RT-PCR技术克隆SPACA1的完整编码序列,分析SPACA1的序列、染色体定位、分子特征及相应蛋白的结构和功能。对SPACA1的相互作用蛋白进行GO、KEGG功能富集,并将获得的蛋白与转录组测序所获得的基因表达量进行关联分析。利用转录组测序数据构建SPACA1 mRNA与miRNA和lncRNA的ceRNA调控网络。SPACA1基因CDS区全长为888 bp(Genbank登录号:OK042308),具有2个跨膜螺旋结构,与SPACA3、SPACA4、HIPK4和CCDC62显著相关;SPACA1及其互作蛋白主要参与精子细胞发育、分化,精子活力、顶体反应和精子鞭毛形成等通路;SPACA1基因受6个miRNAs靶向调控。本研究报道了SPACA1的表达、分子结构、蛋白质功能、在睾丸中的和转录调控作用,为深入研究SPACA1基因在BMI受精以及顶体反应等重要生物学过程中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 精子顶体膜相关蛋白1 蛋白互作 功能分析 ceRNA转录调控
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兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:3
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作者 杨宏新 杨勇 曹贵方 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期362-367,共6页
目的制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体。方法构建pET-22b-SAS1B-His质粒,转化E.coli.BL21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达。用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SA... 目的制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体。方法构建pET-22b-SAS1B-His质粒,转化E.coli.BL21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达。用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SAS1B多克隆抗体。ELISA检测SAS1B抗体效价,Western blot和免疫组织化学法鉴定SAS1B抗体特异性。结果在构建pET-22b-SAS1B-His原核表达载体的基础上,在BL21(DE3)细胞成功诱导表达SAS1B重组蛋白。制备的兔抗人SAS1B多克隆抗体效价为1∶51200。SAS1B多克隆抗体能与SAS1B重组蛋白特异结合且能识别乳腺癌组织中的SAS1B蛋白。结论成功制备具有较好特异性的兔抗人SAS1B多克隆抗体。 展开更多
关键词 精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B) 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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TDP-43在男性不育中的研究进展 被引量:4
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作者 程鹏 张贤生 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期942-945,共4页
全世界大约有10%~15%的育龄夫妇婚后1年不孕不育。在不育的原因中,男性因素大约占50%。男性不育病因复杂多样,很多目前尚不能明确。近年来,RNA结合蛋白在男性不育中的作用引起人们的关注。反式激活应答DNA/RNA结合蛋白(TDP-43)是一种DNA... 全世界大约有10%~15%的育龄夫妇婚后1年不孕不育。在不育的原因中,男性因素大约占50%。男性不育病因复杂多样,很多目前尚不能明确。近年来,RNA结合蛋白在男性不育中的作用引起人们的关注。反式激活应答DNA/RNA结合蛋白(TDP-43)是一种DNA/RNA结合蛋白,参与睾丸组织中的基因调控,其异常表达可影响男性生育能力,导致男性不育。TDP-43在正常精子与异常精子中的分布与表达量也是不同的,可能是一种男性不育的标志物。本文主要就TDP-43的结构及其在男性不育中的作用进行综述。 展开更多
关键词 反式激活应答DNA/RNA结合蛋白 男性不育 DNA/RNA结合蛋白 精子顶体小泡蛋白-1 转录抑制因子
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