爱维治对急性放射性肠炎大鼠肠道修复作用的实验研究

目的:探讨爱维治对急性放射性肠炎大鼠肠道的修复作用。方法:随机将Wistar大鼠28只分为正常对照组、爱维治组、模型对照组。建立辐射损伤模型(一次性用直线加速器给予9.0 Gy的高能X射线照射)。造模后连续4 d腹腔注射给药,取相应部位的空肠、回肠、结肠,光学显微镜下观察及图像分析仪测定其相关的形态学指标,并测定肠粘膜NO水平及细菌移位率。结果:爱维治组空肠、回肠和结肠粘膜基本完整,而模型对照组出现粘膜坏死、脱落;爱维治组空肠、回肠绒毛高度、隐窝深度、粘膜厚度和全层厚度及结肠粘膜和全层厚度均显著大于模型对照组。爱维治组肠粘膜NO浓度和细菌移位率显著低于模型对照组。结论:爱维治能加速急性放射性肠炎受损肠道粘膜的修复,抑制NO产生,对维持肠道粘膜结构和功能的稳定性有良好的作用。

硫辛酸联合小牛血清去蛋白注射液治疗老年2型糖尿病周围神经病变疗效观察

目的观察硫辛酸联合小牛血清去蛋白注射液治疗老年2型糖尿病周围神经病变的疗效。方法收集2型糖尿病合并周围神经病变患者176例,其中男性108例,女性68例,随机分为2组,治疗组89例,对照组87例,2组均积极控制血糖、血脂、血压,对照组用0.9%氯化钠注射液250 ml+硫辛酸注射液600 mg静脉滴注,每日1次,共2周;治疗组用0.9%氯化钠注射液250 ml+硫辛酸注射液600 mg静脉滴注,每日1次,5%葡萄糖250 ml+生物合成人胰岛素注射液R 4 U+小牛血清去蛋白800 mg静脉滴注,每日1次,共2周。治疗前后分别记录症状、深浅感觉、腱反射、检测神经肌电图,分别测定双侧尺神经、正中神经、腓总神经、胫神经、腓肠神经传导速度及踝臂指数ABI,记录神经主觉症状问卷(TSS)评分。结果治疗组神经传导速度的提高明显优于对照组(P<0.05);踝臂指数ABI治疗组治疗后较治疗前异常率减少(P<0.05),而对照组治疗后较治疗前异常率无明显改变(P>0.05),治疗组TSS分值治疗后较治疗前明显改善,且较同期对照组减小(P<0.05);治疗组总有效率96%,明显高于对照组总有效率67%(P<0.05)。结论硫辛酸联合小牛血清去蛋白注射液治疗老年2型糖尿病周围神经病变疗效显著,同时可改善大血管病变,改善心脑及下肢血液循环。

小牛血清和胎牛血清对Sf9细胞生长和重组蛋白表达影响的比较

目的:比较小牛血清和胎牛血清对Sf9细胞生长的影响以及两种血清条件下重组蛋白表达的差异,探讨小牛血清用于Sf9细胞培养和重组蛋白工艺化生产的可行性。方法:①在细胞培养板中,分别以含10%小牛血清和10%胎牛血清的Grace培养液培养Sf9细胞,每天进行细胞计数和XTT比色分析,并绘制生长曲线。②重组杆状病毒感染两种血清培养下的Sf9细胞,培养72h后收集细胞,ELISA检测细胞内重组蛋白的表达量。结果:胎牛血清培养液中Sf9细胞生长曲线好于小牛血清培养液中生长的Sf9细胞,但两种血清培养液中Sf9细胞增殖活力、重组蛋白的表达并无显著差别(P>0·05)。结论:胎牛血清能更好的促进Sf9细胞生长,小牛血清也可用于Sf9细胞的培养以及重组蛋白生产。

适合人肌母细胞的无血清培养基

背景:肌母细胞体外培养大多使用添加胎牛血清培养基,存在很多不足,开发无血清培养基,更加稳定、安全、经济,有广泛的应用前景。目的:初步探索适合人肌母细胞培养的无血清培养基。方法:配制含胎牛血清培养基(DMEM/F12 1∶1添加胰岛素样生长因子1、碱性成纤维细胞生长因子和体积分数20%胎牛血清),间充质干细胞无血清培养基组(无血清培养基、2%血清替代物、2 mmol/L L-谷氨酰胺,人脐带间充质干细胞,细胞纯度大于99%,UltraC ULTURETM添加血清替代物,谷氨酰胺)。自制无血清培养基组(GibcoTM添加胰岛素样生长因子1,碱性成纤维细胞生长因子,谷氨酰胺)。3种培养基分别对人肌母细胞分别进行培养,观察肌母细胞的形态、免疫组织化学的鉴定,计算克隆的形成率,绘制细胞生长的曲线,MTT检测肌母细胞的活性,比较3种培养基培养肌母细胞增殖、分化的差异。结果与结论:各组细胞形态上无明显差异;各组免疫组织化学鉴定肌母细胞纯度均达99%;含胎牛血清培养基组和自制无血清培养基组克隆形成率显著高于间充质干细胞无血清培养基组(P<0.01),含胎牛血清培养基组克隆形成率显著高于自制无血清培养基组(P<0.01);含胎牛血清培养基组与自制无血清培养基组细胞数远高于间充质干细胞无血清培养基组;自制无血清培养基组细胞活性显著高于含胎牛血清培养基组和间充质干细胞无血清培养基组(P<0.01)。自制无血清培养基组可有效用于肌母细胞的培养,在促进肌母细胞早期贴壁、增殖上还需进一步优化。

人血小板裂解液替代胎牛血清大规模扩增人脐带间充质干细胞

背景:目前国内外大多数实验仍采用经典的培养基和胎牛血清进行脐带间充质干细胞培养,血清培养潜在的不安全因素限制了未来临床应用的可行性。目的:以人血小板裂解液替代胎牛血清培养、鉴定人间充质干细胞,以期进一步应用于临床低密度扩增人间充质干细胞。方法:人血小板裂解液通过反复冻融、离心、过滤、浓缩等方法制备。以IMDM为基础培养基,添加5%浓缩血小板裂解液作为实验组培养基;以添加体积分数10%胎牛血清为对照组培养基。采用酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,以3 000/cm2的浓度进行传代培养,待细胞扩增至P5代后,进行细胞形态与直径、免疫表型、成骨成脂分化、克隆形成率等细胞生物学特性检测,并比较两者之间的差别。结果与结论:人血小板裂解液扩增的脐带间充质干细胞形态细长,有更高的细胞累积群倍数;克隆形成检测结果显示两者形成的克隆效率差异无显著性意义,流式细胞术检测结果显示两者有相似的细胞表型,体外诱导分化显示两者都具有成骨、成脂分化能力,但人血小板裂解液扩增的间充质干细胞成骨分化能力更强。提示人血小板裂解液可以取代胎牛血清用于临床低密度扩增人间充质干细胞。

不同血清浓度及培养时间对成年大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞的影响

背景:课题组前期实验曾报道血清及神经生长因子对嗅鞘细胞体外增殖的影响,但对于嗅鞘细胞体外培养的血清浓度的选择及培养时间的掌握,这一方面的实验研究却报道较少目的:通过研究不同血清浓度及体外培养时间对来源于成年大鼠嗅黏膜的嗅鞘细胞生长曲线的影响,从而了解不同实验条件对嗅鞘细胞体外生存和生长情况的影响。方法:取成年大鼠嗅黏膜,进行体外分离培养,鉴定嗅鞘细胞,并用磺基罗丹明B酶标仪法测量各孔的吸光值(A值),转化为嗅黏膜嗅鞘细胞的生长曲线。结果与结论:血清浓度0%组的A值明显低于其他浓度组。血清浓度10%-90%组细胞均可以正常生长。特别是血清浓度在10%-40%,对细胞生长起到明显的促进作用。随着细胞生长时间的延长,血清浓度0%组A值呈微弱的降低,其余各浓度组A值呈现增加状态。开始几天的A值增加趋势较弱,第9天之后增加趋势明显增强。血清浓度10%-40%组,在第13天,细胞生长迅速增快,第19天左右进入平台期,第23天A值有减弱的趋势。而血清浓度在50%-90%组,在第13天细胞生长达到峰值,随着时间的延长,A值逐渐变小。说明不同血清浓度及不同培养时间等体外培养环境对大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞生长和生存有明显影响,因而利用血清进行体外细胞培养时应充分考虑所添加血清的浓度以及细胞培养的时间。

小牛血清培养基用于人群脑膜炎奈瑟菌带菌调查研究

目的建立一种新型的正常人群脑膜炎奈瑟菌检验方法。方法配制一种小牛血清"双抗"培养基作为脑膜炎奈瑟菌的保菌增菌培养基,用于现场咽拭子采样,带回实验室增菌后再接种平板培养基,分离脑膜炎奈瑟菌,并以常规检测方法作配对比较。结果两次试验新方法检出脑膜炎奈瑟菌14株,常规方法仅在第2次试验时检出脑膜炎奈瑟菌1株。结论应用小牛血清"双抗"培养基建立的新方法适用于A、B、C群脑膜炎奈瑟菌检测,且检测效果明显优于常规的咽拭子直接接种法。

兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的不同培养方法

背景:目前传统骨髓间充质干细胞的培养方法是应用异种血清为培养基,但其存在种间疾病传播、潜在免疫排斥反应甚至是伦理学争议等问题;且与卫生部公布的《组织工程化组织移植治疗技术管理规范》的要求相违背。自体富血小板血浆是生物自体的全血提取物,内含多种且含量丰富的生长因子。目的:使用自体富血小板血浆替代传统异种血清,探讨其对兔骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞的影响,方法:从兔髂后上棘穿刺抽出8 mL骨髓并加肝素抗凝,密度梯度离心富集骨髓间充质干细胞,分为自体富血小板血浆组、胎牛血清组,分别加入含10%自体富血小板血浆、体积分数10%胎牛血清。在传至4代时将自体富血小板血浆组和胎牛血清组细胞各自分为实验组和对照组,实验组对培养及成分进行改变;对照组培养基不变。通过生长曲线测定各代细胞的增殖情况;通过对各组细胞进行碱性磷酸酶活性测定,判断其成骨分化状况。结果与结论:骨髓间充质干细胞生长曲线可见各代细胞增殖良好。对第4代各组细胞进行碱性磷酸酶活性检测,培养第12天,第4代自体富血小板血浆实验组及胎牛血清实验组的碱性磷酸酶活性均显著高于其相应对照组;自体富血小板血浆组对照组、实验组碱性磷酸酶活性显著高于胎牛血清组的对照组、实验组,差异有显著性意义(P<0.01)。提示使用自体富血小板血浆替代异种血清培养骨髓间充质干细胞是一种安全可靠、操作简单、纯度活性高的诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化方法。

小牛血清去蛋白肠溶胶囊对脑部缺血性损害所引起的神经功能缺损的疗效和安全性

目的考察小牛血清去蛋白肠溶胶囊对改善由脑部血液循环障碍(缺血性损害)所引起的神经功能缺损的临床有效性和安全性。方法采用随机双盲多中心试验设计,将入选病例随机分成试验组与对照组,试验组给予小牛血清去蛋白肠溶胶囊,对照组给小牛血清去蛋白肠溶胶囊安慰剂,在治疗前和治疗后7、14、28 d 采用 NIHSS、BT、mRS 量表评价,90 d 使用 BI、mRS 量表评价,考察治疗前后的分值改变,并进行安全性分析。结果治疗前治疗组与试验组的 NIHSS、BI、mRS 量表评分经统计学分析差异无统计学意义;对照组与试验组 NIHSS 评分治疗后14、28 d 分别为7.70±3.36,6.17±3.02;5.89±3.76,3.63±2.49,治疗组与试验组相比差异有统计学意义(P<0.01);治疗90d,BI 和 mRS 量表评价,治疗组与试验组相比差异有统计学意义(P<0.01),不良反应事件发生较少。结论小牛血清去蛋白肠溶胶囊可以有效地改善急性缺血性脑损害患者的神经功能缺损,提高生活能力,改善生活质量,安全性较好。

前部缺血性视神经病变水肿期几种治疗方案的疗效评估

目的评价几种治疗方案对非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)水肿期的疗效,为NAION水肿期综合治疗选择最佳方案。方法对确诊NAION,病程2周内,眼底检查,荧光素眼底血管造影(FFA)及视盘光学相干断层扫描(OCT)确诊为水肿期患者352例361眼,除D组(门诊口服泼尼松激素治疗组)33例33眼,E组(内科对因治疗组)31例32眼外,288例296眼NAION患者住院治疗期间随机分为A组(甲泼尼龙静脉冲击联合血管扩张剂)93例97眼,B组(甲泼尼龙冲击联合脱水剂)114例116眼,C组(甲泼尼龙冲击联合小牛血去蛋白提取物)81例83眼,A、B、C组均配合复方樟柳碱颞浅皮下注射10d,治疗14～16d,再次进行以视力、视野、眼底照相以及OCT为指标的统计分析。结果各治疗组间,C组疗效优于A组、B组、D组;A、B组与D组相比差异不明显;A、B、C、D四组与E组相比差异均有统计学意义。结论甲泼尼龙静脉冲击联合小牛血去蛋白提取物的治疗方案在NAION水肿期的应用对改善水肿,恢复视功能有积极意义。

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶治疗弥漫性角膜上皮点状脱落的疗效观察

目的探讨小牛血去蛋白提取物眼用凝胶治疗弥漫性角膜上皮点状脱落的临床疗效。方法收集36例（36只眼）弥漫性角膜上皮点状脱落患者，随机分为2组，其中小牛血去蛋白提取物组（试验组）19例，重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶组（对照组）17例。两组均每天4次，每次1滴，疗程14d。用药前和用药后14d分别进行角膜染色评分、泪膜破裂时间（BUT）、Schirmer泪液分泌试验（SIt）和视力的评估。根据数据的正态分布和方差齐性选择合适的统计方法。计量资料采用t检验，不符合正态性及方差不齐时，采用Wilcoxon非参数法，同组前后比较采用配对t检验。计数资料采用卡方、校正卡方、Fisher精确检验等。结果用药后14d，试验组与对照组角膜染色评分较基线期分别下降（3．895±2．307）和（2．235±2．047），差异有统计学意义（t=5．7083，4．5019；P〈0．01）。且两组间下降幅度差异有统计学意义（t=2．2712，P=0．0296）。两组治疗14d后的BUT均较基线期明显增加（Z=2．226，2．527；P〈0．05），但组间差异无统计学意义（Z=1．336，P=0．1815）。治疗14d后，试验组与对照组的SⅠt结果较基线期变化无统计学意义（t=0．4207，1．1255；P〉0．05），组间差异无统计学意义（t=0．9830，P=0．3325）。两组视力变化较基线期无统计学意义（Z=1．897，1．786；P〉0．05）。结论小牛血去蛋白提取物眼用凝胶治疗弥漫性角膜上皮脱落疗效确切，且优于重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶。

抗血管生成药物增加血清饥饿环境中MDA—MB-231乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力

目的观察在缺氧和（或）血清饥饿环境中，重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗对人乳腺癌MDA—MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响，探讨抗血管生成药物治疗的潜在风险。方法将MDA—MB-231细胞分别置于4种环境培养，分别为营养环境（10％胎牛血清）、缺氧（1％氧气）＋营养环境、饥饿环境（无胎牛血清）和缺氧＋饥饿环境。在每种培养环境中，分别设空白组（未给予抗血管生成药物）、抑素组（给予重组人血管内皮抑素）和单抗组（给予贝伐珠单抗）。以CCK-8法计算重组人血管内皮抑素及贝伐珠单抗的细胞生长抑制率，确定其最适工作浓度与时间，并对各组细胞行Transwell细胞侵袭实验和细胞迁移实验，以Western blot检测细胞中c—Met和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达。对饥饿环境中的处理组细胞行ExiqonmiRBase18．0microRNA芯片杂交，以实时荧光定量PCR法验证杂交芯片实验中检测到的微小RNA。结果800mg／L重组人血管内皮抑素作用48h和24h后，细胞抑制率分别为（32．2±2．5）％和（27．0±1．3）％（P=0．023）；80mg／L贝伐珠单抗作用48h和24h后，细胞抑制率分别为（30．5±1．4）％和（26．1±2．4）％（P=0．015）。在饥饿环境中，空白组侵袭、迁移穿膜细胞数分别为（28．8±2．2）个和（31．4±1．5）个，与单抗组和抑素组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。空白组中c-Met和MMP-9蛋白的相对表达量分别为0．213±0．017和0．542±0．048，与单抗组和抑素组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。在缺氧环境中，抑素组侵袭、迁移穿膜细胞数分别为（17．5±2．1）个和（16．5±2．8）个，单抗组分别为（16．3±3．5）个和（17．5±2．4）个，与空白组比较，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。缺氧对细胞侵袭迁移能力、c—Met和MMP-9的表达亦无影响，差异无统计学意义（均P〉0．05）。经实时荧光定量PCR验证，微小RNA中仅miR2355和miR375变化稳定。在饥饿环境中，空白组细胞中miR375和miR2355的相对表达量分别为0．550±0．036和0．852±0．121，与单抗组和抑素组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；抑素组细胞中miR375和miR2355的相对表达量分别为0．295±0．012和0．253±0．011，单抗组分别为0．234±0．020和0．309±0．022，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。而在缺氧环境中，药物干预并未影响miR2355和miR375的表达水平（均P〉0．05）。结论血清饥饿环境增加了MDA—MB-231细胞的侵袭、迁移能力；重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗均可能增加侵袭、迁移能力。