冠心康对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察中药复方制剂冠心康对载脂蛋白E(Apo E)基因敲除动脉粥样硬化小鼠血管壁保护及斑块的稳定作用,探讨中药干预高脂血症、动脉粥样硬化,防治心血管疾病的可能机制。方法 30只Apo E-/-小鼠西方膳食饲料饲养至12周龄并随机分为3组,模型组、冠心康组以及辛伐他汀组,每组10只,另10只C57BL/6/J小鼠设为正常对照组。正常组及模型组每日给予0.9%NaCl溶液灌胃,辛伐他汀以及冠心康组每日分别予以相应药物灌胃,观察至19周龄取材。采用生化方法检测各组小鼠血脂变化,采用HE染色法观察小鼠主动脉壁损伤情况,并采用实时荧光定量PCR方法检测心脏内皮素1(ET-1)、组织因子(TF)及纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)mRNA水平。结果与正常组比较,模型组小鼠TC、TG、LDL-C水平升高,HDL-C水平下降,ET-1、TF及PAI-1 mRNA水平上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,冠心康组小鼠TC、TG、LDL-C下降,ET-1、TF及PAI-1 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),但HDL-C水平差异无统计学意义(P>0.05);辛伐他汀组小鼠TG及LDL-C水平下降,TF及PAI-1 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),而TC、HDL-C水平及ET-1 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。冠心康组与辛伐他汀组比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论冠心康对ApoE基因敲除动脉粥样硬化小鼠可调控其血脂及ET-1、TF、PAI-1基因表达水平,具有抗动脉粥样硬化作用。

伴有糖尿病的冠心病患者纤溶系统的变化及罗格列酮的干预研究

目的通过观察伴有糖尿病(DM)的冠心病(CHD)患者纤溶系统的变化,并以罗格列酮进行干预,由此对罗格列酮防止支架术后再狭窄机制作初步探讨。方法试验对象共分为3组:伴有2型DM的CHD患者48例;不伴有2型DM的CHD患者36例;正常对照组:同期我院体检健康成人20例;3组对象均在入院后清晨抽血、分离血浆。检测一氧化氮(NO)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量;培养上清中NO采用硝酸还原酶法测定;t-PA和PAI-1采用酶联免疫法(ELISA)测定;另外将合并DM的CHD组48例患者分为两组,一组针对CHD和DM常规治疗,另一组在此基础上加用罗格列酮,4 mg/d,口服。治疗3个月后复查上述指标。结果伴有或不伴有DM的CHD患者NO的浓度分别为(40.83±5.34)μmol/L、(50.31±5.34)μmol/L均低于正常对照组(73.37±6.46)μmol/L(P均<0.01);t-PA的浓度分别为(18.53±7.05)μg/L、(26.72±8.20)μg/L均低于正常对照组(40.17±8.30)μg/L(P均<0.01);PAI-1的浓度分别为(86.04±8.88)μg/L(、78.52±7.34)μg/L均高于正常对照组(48.86±5.41)μg/L(P<0.01);伴有DM的CHD患者NO和t-PA的浓度均低于不伴有DM的CHD患者组(P<0.05),PAI-1的浓度高于不伴有DM的CHD患者组(P<0.05)。伴有DM的CHD患者常规治疗和常规+罗格列酮治疗后NO,t-PA显著高于治疗前:NO治疗前后的变化值分别为(20.97±3.49)μmol/L、(30.32±3.36)μmol/L(P均<0.01);t-PA治疗前后的变化值分别为(11.97±2.07)μg/L、(21.32±2.21)μg/L(P均<0.01);伴有DM的CHD患者常规治疗和常规+罗格列酮治疗后PAI-1的浓度显著低于治疗前,PAI-1治疗前后的变化值分别为(-23.98±5.12)μg/L、(-34.02±5.64)μg/L(P<0.01);和常规组比较,常规+罗格列酮治疗组改善的幅度要高于常规组(P<0.01)。结论伴或不伴DM的CHD患者冠心病患者体内存在不同程度纤溶活性的降低,这种高凝状态会促进血栓形成和再狭窄的发生。对于冠心病患者,在常规冠心病治疗基础上,加用罗格列酮能促进纤溶系统的激活,防止血栓的形成,有效防止支架术后再狭窄,特别是对于伴有糖尿病的CHD患者。

催乳素延缓hCG诱发大鼠排卵和下调纤溶酶原激活系统在卵巢中的表达

给幼龄大鼠注射10IU PMSG,48h后注射7IU hCG,或者hCG加不同剂量的催乳素(PRL).在不同时间取出卵巢,检查输卵管中卵子数和卵巢不同细胞中组织型纤溶酶原激活因子(tPA)和抑制因子(PAI-1)mRNA含量和活性.结果表明:PRL减少hCG诱发的排卵数并有明显剂量和时间抑制曲线.当hCG注射24h后,在两组动物输卵管的卵子数无明显差异.PRL同时抑制hCG所诱发的颗粒细胞tPA表达;与少匕相反PRL还能显著刺激膜一间质细胞PAI-1mRNA表达.上述实验结果表明,PRL只暂时延缓而不是完全抑制hCG诱发的大鼠排卵.上述作用可能是通过抑制纤溶酶激活系统在卵巢中的表达引起的.

抵抗素对肥胖鼠深静脉血栓形成的影响

目的:饮食诱导建立肥胖小鼠模型,观察内外源性抵抗素(RE)对深静脉血栓形成的直接影响,并探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)在其过程中的作用。方法:用高脂饲料喂养诱导小鼠肥胖后,给予腹腔注射生理盐水或RE,亚组给予PAI-1抗体,下腔静脉结扎法诱导深静脉血栓模型,实验步骤:(1)测量各组小鼠体重、空腹血糖值及RE水平;(2)测量血栓重量及血栓长度;(3)检测PAI-1蛋白和mRNA浓度。结果:(1)高脂饮食组血浆RE水平升高,腹腔注射RE组升高更明显;(2)高脂饮食组静脉血栓重量及长度均升高,腹腔注射RE组升高更明显;(3)高脂饮食组PAI-1蛋白及mRNA水平均升高,腹腔注射RE组升高更明显;(4)PAI-1抗体预处理后,RE诱导的血栓重量及长度有所下降。结论:RE可能通过破坏纤溶系统平衡促进血栓形成,从而介导代谢综合征发生血栓性疾病并发症。

粉红胶霉菌对阿霉素肾病大鼠肾损伤的影响及机制

目的探讨粉红胶霉菌对慢性肾病的治疗作用及机制。方法将24只正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、模型组(M组)、粉红胶霉菌组(G组)各8只,M组和G组采用单侧肾切除+2次经尾静脉注射阿霉素(ADR)方法建立慢性肾病模型,其中G组首次注射ADR后即予粉红胶霉菌500mg/(kg·d)灌胃共8周,余两组予等量生理盐水灌胃。给药后第8周检测三组肾功能及血生化指标,同时经HE及PAS染色观察肾脏组织病理结构,采用荧光定量RT-PCR法测量肾组织分子生物学指标相对值。结果M组和G组24h尿蛋白、血脂、血肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)水平均显著高于N组,血浆白蛋白水平显著低于N组,G组和M组上述指标亦有显著差异(P<0.05、0.01);肾组织病理检查N组无异常,M组呈局灶节段性肾小球硬化、间质内有明显炎症细胞浸润,G组变化轻于M组,G、M、N组肾小球细胞外基质面积(M)/肾小球面积(G)M组>G组>N组,P均<0.01;G组TGF-β1、TIMP-1及PAI-1mRNA表达均显著低于M组(P<0.05、0.01)。结论粉红胶霉菌可明显减轻ADR肾病大鼠肾损伤,可能机制为下调TGF-β1、TIMP-1及PAI-1表达。

多发性骨髓瘤细胞对血管内皮细胞tPA及PAI-1表达的影响

目的:研究多发性骨髓瘤细胞(multiple myeloma cells,MMCs)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t PA)、纤维蛋白溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)蛋白表达水平及m RNA表达水平的影响,了解多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者纤溶活性,从而进一步了解MM患者血栓形成的原因及机制。方法:MM细胞株U266与HUVEC共培养24、48、72 h,以同期单独培养的HUVEC、MMCs作为对照,ELISA法检测共培养组和对照组细胞培养上清中t PA、PAI-1的蛋白表达水平,PCR检测HUVEC、MMCs t PA、PAI-1 m RNA的表达水平。结果:无论是ELISA法还是PCR,均未检测到MMCs培养上清中t PA、PAI-1蛋白和m RNA的表达。与同期单独培养的HUVEC相比,ELISA法检测共培养体系中的HUVEC t PA、PAI-1表达水平均升高(P<0.05);对照组中,PAI-1与t PA的表达水平呈正相关(rs=0.80,P=0.01);HUVEC与MMCs共培养体系中,PAI-1与t PA的表达水平呈正相关(rs=0.88,P=0.002);HUVEC单独培养组中,t-PA、PAI-1表达水平与时间呈正相关(rs=0.90,P=0.001;rs=0.90,P=0.001);共培养组中,t-PA、PAI-1表达水平与时间呈正相关(rs=0.95,P<0.001;rs=0.84,P=0.004);两组中t PA、PAI-1与GAPDH条带灰度值比值无明显差异(P>0.05)。结论:MMCs可促进HUVEC对t PA及PAI-1的分泌,在保证细胞活力的前提下,随共培养时间延长,两者分泌增加,且PAI-1与t PA的表达呈一定相关性,然而,MMCs对HUVEC t PA及PAI-1 m RNA的表达无明显影响。

2型糖尿病患者纤溶系统的变化与大血管病变的相关性研究

目的探讨2型糖尿病患者的纤溶功能,以及它们在大血管病变中的作用,分析其纤溶功能紊乱的可能原因。方法选取2型糖尿病患者66例,根据是否合并大血管病变分为两个亚组(Non-MVC,非大血管病变组40例;MVC组,大血管病变组26例);另设正常对照组32例,采用酶联免疫吸附法(FLISA)测定血浆纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(PAP)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)水平,同时测定其它一些临床生化指标。结果与正常对照组相比,2型糖尿病患者各组血浆t-PA、PAI-1和PAP水平显著升高;MVC组PAI-1水平较非大血管病变组显著升高;相关分析显示,血浆t-PA、PAI-1和PAP水平与体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等指标显著相关。结论2型糖尿病患者在存在纤溶活性的降低,并可能由此影响了糖尿病血管病变的发展。

环加氧酶在梗阻性肾病大鼠肾脏的表达及莫比可的作用机制研究

目的 观察环加氧酶(COX)在梗阻性肾病大鼠肾脏的表达,比较选择性(COX-2抑制剂莫比可与消炎痛对COX、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)和基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)基因转录的影响。方法 将输尿管梗阻大鼠随机分成不用药组(U)、消炎痛组(I)和莫比可组(M),设假手术组(C)为对照。4周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-1、COX-2、PAI-1及TIMP-1的mRNA表达,免疫组织化学检测COX-1和COX-2的蛋白水平,并采用放射免疫法测定术侧肾脏残余尿液的血栓烷素B2(TXB2)浓度。结果 COX-1的mRNA和蛋白水平在4组间差异无显著性意义。U组大鼠尿TXB2浓度急剧上升,术肾PAI-1和TIMP-1的mRNA表达明显上调,COX-2的基因表达和蛋白质合成大幅增加。莫比可能够显著抑制上述基因的转录(P<0.05),而I组的数值则与U组相仿。M组和I组的尿TXB2浓度明显下降,尤以M组为著。结论 COX-2参与了UUO发生、发展的病理过程。选择性COX-2抑制剂能够从抑制COX-2活性、下调COX-2、PAI-1及TIMP-1的基因转录等多方面发挥其积极的治疗作用。

粉红胶霉菌对糖尿病大鼠肾组织TGF-β_1、TIMP-1及PAI-1表达的影响

目的探讨粉红胶霉菌对糖尿病大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平的调节及其与糖尿病肾脏病变的关系。方法将24只正常雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(N组)8只,糖尿病模型组(M组)8只,粉红胶霉菌治疗组(G组)8只,其中M组、G组应用链尿佐菌素(STZ)6.5mg/100g腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。G组成模后给予粉红胶霉菌0.05g/100g.d灌胃,M组与N组给予等量生理盐水灌胃,每4周末监测血糖,8周后观察24h尿蛋白定量及血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)在血清中的浓度水平,同时行HE、PAS和MASSON染色观察肾脏病理变化,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肾脏TGF-β1、TIMP-1及PAI-1mRNA的表达。结果 M组和G组SCr、BUN水平及24h尿蛋白定量明显高于N组(P<0.01),M组上述指标显著升高,与G组比较亦有统计学意义(P<0.01)。肾组织病理学观察N组无明显异常,M组出现肾小球肥大,肾小球内细胞外基质蓄积,基底膜增厚,系膜细胞增生指标明显高于N组(P<0.01),G组病变轻于M组。G组TGF-β1、TIMP-1及PAI-1mRNA的表达均明显低于M组,但高于N组(P<0.01)。结论粉红胶霉菌对STZ诱导的糖尿病大鼠早期肾损伤有一定保护作用及抗肾小球纤维化作用,其机制可能是通过下调TGF-β1、TIMP-1和PAI-1mRNA的表达、减少细胞外基质、减少尿蛋白来实现的。

C-型钠尿肽对大鼠心肌成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1及纤溶酶原激活物抑制剂-1的抑制作用

目的探讨C-型钠尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)对心肌成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)以及纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的作用,并检验CNP对心肌成纤维细胞的下游信号通路的影响。方法将大鼠心肌成纤维细胞分别置于不含CNP的培养基(对照组)和含10-9 mol/L CNP(CNP1组)、10-8 mol/L CNP(CNP2组)、10-7 mol/L CNP(CNP3组)培养基中培养24h;采用反转录定量PCR检测各组心肌成纤维细胞中MCP-1和PAI-1 mRNA的表达;ELISA法测定各组心肌成纤维细胞MCP-1和PAI-1蛋白水平。将心肌成纤维细胞分别应用10-9 mol/L的CNP(实验1组)、ERK1/2抑制剂U0126(10-4 mol/L,实验2组)、联合应用CNP及U0126(联合实验组)预处理30 min,空白对照组不进行预处理,实验分析CNP对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2的激活作用。结果 CNP1组、CNP2组及CNP3组细胞中MCP-1 mRNA(0.716±0.016、0.671±0.104、0.635±0.108)、PAI-1 mRNA表达(0.802±0.072、0.780±0.021、0.654±0.017)及MCP-1蛋白[(0.814±0.211)、(0.781±0.280)、(0.752±0.171)g/L]、PAI-1蛋白水平[(0.728±0.217)、(0.696±0.274)、(0.643±0.301)g/L)]均低于对照组[1.192±0.037、1.107±0.156,(1.021±0.263)、(1.047±0.207)g/L](P<0.05),CNP1组、CNP2组和CNP3组组间MCP-1、PAI-1 mRNA表达及MCP-1、PAI-1蛋白水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);实验1组、实验2组和联合实验组P-ERK1/2蛋白[(0.672±0.301)、(0.569±0.298)、(0.536±0.197)g/L]及MCP-1蛋白[(0.814±0.211)、(0.801±0.188)、(0.764±0.261)g/L)]、PAI-1蛋白[(0.728±0.217)、(0.682±0.287)、(0.543±0.301)g/L)]均低于空白对照组[(1.028±0.129)g/L、(1.021±0.263)g/L、(1.047±0.207)g/L](P<0.05),实验1组、实验2组及联合实验组组间以上指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CNP可抑制心肌成纤维细胞分泌MCP-1、PAI-1,可能是CNP抗纤维化的新机制。

尿毒清对阿霉素肾病大鼠致纤维化因子表达的影响

目的观察尿毒清对阿霉素(ADR)肾病大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)和骨调素(OPN)mRNA表达的影响,探讨尿毒清治疗慢性肾脏疾病的机制。方法成年雄性SD大鼠24只,采用单侧肾切除加重复尾静脉注射ADR的方法制作ADR肾病模型,随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、尿毒清组(Ni组)、贝那普利组(B组)4组,每组6只。用药第4、8周后观察各组大鼠24h尿蛋白定量、血脂、血浆总蛋白(TP)、血浆白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)的水平,实时荧光定量PCR测定第8周肾组织中TGF-β1、TIMP-1、PAI-1及OPN mRNA的表达。结果尿毒清和贝那普利均能减少ADR肾病大鼠尿蛋白,降低BUN、Scr,升高血浆蛋白,纠正脂代谢紊乱,减少TGF-β1、TIMP-1、PAI-1及OPNmRNA的表达,与M组相比有显著差异(P<0.01);而Ni组PAI-1 mRNA水平较B组显著降低(P<0.01)。结论尿毒清可下调ADR肾病大鼠肾脏组织TGF-β1、TIMP-1、PAI-1及OPN mRNA的合成,可能是其治疗慢性肾脏疾病的重要机制之一。

LONGTIME BEHAVIOR FOR THE ACTIVATOR-INHIBITOR MODEL

The paper first discusses the longtime behavior of the activator-inhibitor model, the existence of the maximal attractor is given. Then using the mathematical induction and the properties of linear semigroup, the regularity result for the maximal attractor is obtained. Next, it is proved that its Hausdorff or fractal dimension is finite.Finally, further estimates are verilied by Rothe’s inequality and fractional operators, and the existence of inertial manifold is then proved.