拟黑多刺蚁活性成分对LPS诱导小鼠炎性骨丢失的作用

目的:研究拟黑多刺蚁活性成分(AFPR)对脂多糖(LPS)诱导小鼠炎性骨丢失的作用。方法:取24只雄性C57BL/6J小鼠,每组6只,随机分为假手术组、模型组(AFPR 0 g/kg)、AFPR给药组(4 g/kg、8 g/kg);第1天和第4天分别给予腹腔注射LPS溶液(5 mg/kg),饲养7 d后建立小鼠炎性骨丢失模型;利用Micro-CT扫描及苏木精—伊红(HE)染色分析法分析胫骨骨组织形态学及相关参数变化情况,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAcP)染色分析小鼠胫骨骨组织破骨细胞数量的变化情况,活化T细胞核因子(NFATc1)与组织蛋白酶K(CTSK)染色分析破骨细胞活性的变化情况,并进一步采用HE染色观察小鼠体内肝肾组织的变化情况;此外,体外实验通过TRAcP染色实验探究AFPR对破骨细胞分化的作用,利用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红(ARD)染色探究AFPR对成骨细胞活性的影响。结果:与sham组相比,AFPR 0 g/kg组胫骨骨小梁明显受到破坏,破骨细胞数目明显增多(P<0.001),且破骨特异性因子NFATc1与CTSK的表达上调。与AFPR 0 g/kg组相比,不同剂量AFPR可有效增加小鼠骨组织中骨小梁厚度与数量,并且还能够抑制破骨细胞活性及其特异性因子的表达水平(P<0.001),并呈剂量依赖性;在体外实验中,与AFPR 0μg/mL组相比,AFPR能够有效抑制破骨细胞分化;但AFPR对成骨细胞的活性没有影响。结论:AFPR对LPS诱导小鼠全身炎性骨丢失具有一定的保护作用,并且可能与抑制破骨细胞活性有关。

拟黑多刺蚁乙醇浸提液的理化性质及抗氧化活性研究

采用Alcalase2．4L水解拟黑多刺蚁，以抗氧化活性为指标，并结合蛋白质利用率、多肽含量等指标比较拟黑多刺蚁及其酶解物的醇提物的理化性质及抗氧化性的区别。结果表明，在乙醇浓度介于35~75％，酶解拟黑多刺蚁醇提物的氨基酸和多肽含量分别介于4．20~3．19mg／g和5．19~4．07mg／mL，是没有经酶解的拟黑多刺蚁醇提物的2倍左右。酶解提高了拟黑多刺蚁醇提物的抗氧化性，在乙醇浓度为55％时，其超氧自由基、DPPH自由基、羟基自由基清除能力和还原力的IC50分别为0．276，0．106，0．279和0．227mg／mL。同时，酶解拟黑多刺蚁醇提物的重要微量元素Zn、Mn和Ca也有显著提高。

黑蚂蚁蛋白的酶解优化及抗氧化肽的超滤膜分离

本文研究了酶量、温度、pH和时间四个因素对黑蚂蚁蛋白的碱性酶法水解的影响。通过响应面设计,以各个抗氧化活性为指标,优化了超氧自由基清除率,DPPH自由基清除率,羟基自由基清除率,还原力和亚油酸自氧化抑制作用最强的酶解工艺条件。验证实验证实方程的准确率达95%以上。采用超滤膜及离子交换色谱对酶解产物进行了分离,发现5-10 kDa和1-3 kDa组分的抗氧化能力最强,碱性肽对超氧自由基清除能力、羟基自由基清除能力、亚油酸自氧化抑制作用贡献较大,酸性肽对DPPH自由基清除能力及还原力的贡献较大。

酶解拟黑多刺蚁制备抗氧化活性肽

分别采用Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰酶水解拟黑多刺蚁,利用超氧自由基、DPPH自由基、羟基自由基清除能力、还原力、铁离子螯合能力、亚油酸自氧化抑制能力6个指标衡量水解物的抗氧化能力,并结合水解度(DH)、蛋白质利用率、多肽含量等理化指标筛选最适蛋白酶。结果表明,酶解物具有良好的体外抗氧化活性,其抗氧化活性与抗氧化肽的剂量呈正相关,其中Alcalase2.4L水解能力、酶解液抗氧化能力最强。还研究了热处理、超声、均质等预处理方式对水解能力、抗氧化能力的影响,发现均质对酶解产物的影响最大。

拟黑多刺蚁活性组分对系统性红斑狼疮的治疗作用及机制

目的:采用动物模型和细胞模型,探讨拟黑多刺蚁活性组分(AFPV)对系统性红斑狼疮(SLE)的作用及可能机制。方法:采用大鼠Arthus反应,将60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,醋酸泼尼松组(5 mg·kg-1),AFPV高、中、低剂量组(400,200,100 mg·kg-1)。采用牛血清蛋白-弗氏完全(不完全)佐剂复制SLE模型。观察AFPV对SLE大鼠背部皮肤红肿直径的影响,酶联免疫吸附测定检测血清抗双链DNA(ds DNA)抗体,补体3(C3),补体4(C4),免疫球蛋白M(Ig M),白细胞介素-1(IL-1),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-31(IL-31),白细胞介素-33(IL-33)水平;免疫磁珠法分选16~18周MRL/lpr狼疮小鼠和C57BL/6J正常小鼠脾脏CD4+T细胞,观察AFPV对miR-200a,miR-155的表达及沉默E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)水平的影响,探讨AFPV对SLE的作用及可能机制。结果:与正常组比较,模型组大鼠背部皮肤红肿直径显著增大(P <0. 01),与模型组比较,AFPV高、中剂量组可显著降低SLE大鼠背部皮肤红肿直径(P <0. 05,P <0. 01);与正常组比较,模型组大鼠血清Ig M,IL-6,IL-33明显增高(P <0. 05),与模型组大鼠比较,AFPV高、中给药组Ig M,IL-6,IL-33明显降低(P <0. 05);与正常组比较,MRL/lpr狼疮小鼠的CD4+T细胞miR-200a的表达显著降低,miR-155的表达显著增高及ZEB1水平显著增高而SOCS1的表达显著降低(P <0. 01),与模型组比较,AFPV干预后miR-200a的表达显著增高,miR-155的表达显著降低(P <0. 01),ZEB1水平显著降低而SOCS1的表达显著增高(P <0. 01)。结论:AFPV对SLE大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与其对miR-200a,miR-155及ZEB1和SOCS1的调节有关。