A rat model for acute hepatic failure

OBJECTIVE: To develop a surgical model of acute hepatic failure.METHODS: Hepatectomy was performed in rats according to the method described by Higgins andAnderson. Ninety percent liver resection (removing the left lateral, median, and right lateral lobes)(n=7) and 95% liver resection leaving only half of the caudate lobe (n=13) were performed.Hypoglycemia was corrected by giving 20% glucose in the drinking water, coupled with repeatedintraperitoneal injection of 5% glucose adapted to glycemia. While the survival rate, alanine transaminase(ALT) and bilirubin were observed.RESULTS: 95% liver resection decreased survival rates of the rats from 86% (90% liver resection) to23% (P【0. 05), and increased bilirubin levels (4.04±2.84 mg/dL vs. 1.25±1.85 mg/dL [90%liver resection]).CONCLUSION: 95% liver resection is a good rat model for acute hepatic failure.

黄芪对免疫损伤性肝纤维化大鼠的治疗作用

目的:研究中药黄芪的抗肝纤维化作用,对比观察中药861合剂及其组分之一黄芪对肝纤维化的治疗作用。方法:采用大鼠白蛋白免疫损伤性肝纤维化动物模型,通过光镜、电镜观察、胶原免疫组化染色及胶原蛋白生化测定。结果,黄芪可使大鼠肝纤维化程度及超微结构的病理改变明显减轻,减少总胶原及Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ型胶原在肝内的沉积,随着疗程的延长,作用更为显著。同时以肝总胶原蛋白含量为指标,黄芪的抗肝纤维化作用不如中药861合剂。结论:黄芪与其它成份组成中药复方可加强抗纤维化作用。

犬暴发性肝功能衰竭模型的建立

目的 为研究原位部分肝移植对暴发性肝功能衰竭的治疗作用 ,而建立犬肝功能衰竭模型。方法 将四氯化碳 (CCl4)与等量花生油混合溶液 ,以 0 .9ml/kg腹腔注射 ,血清谷丙转氨酶 (ALT ) ,总胆红素 (TB) ,凝血酶原时间 (PT ) ,血氨 (NH4) ,血糖 (BG )监测 ,犬死亡 ,或于存活第 7d ,1 4d活杀行病理学检查。存活第 3d ,行脑电图检查 (EEG )。结果 注射CCl4 后犬呈进行性肝功能衰竭表现 ,第 72h血ALT ,TB ,NH4 明显升高 ,PT延长 ,BG降低 ,(均P <0 .0 1 ) ;脑电图检查出现异常波型。第 7d病理检查显示 :肝细胞大片溶解坏死 ,网状支架大部分存在 ,肝细胞轻度增生。暴发性肝功能衰竭形成率为 93.0 %。动物4 8～ 96h死亡率 73.0 % ,1 4d内肝损害明显恢复。动物一般表现 ,实验室及组织学检查与临床暴发性肝衰相似。结论 该模型不需手术操作 ,适合于作实验性肝移植受体及急性肝衰治疗的研究。

急性肝功能哀竭动物模型的建立

目的 建立与临床较相近的急性肝功能衰竭动物模型。方法 应用中国实验小型猪7头，采用Ⅰ期门静脉．下腔静脉吻合、Ⅱ期（48h后）供肝动脉暂时结扎4h的方法建立缺血性急性肝功能衰竭动物模型；中国实验小型猪6头给于1．2g／kg的D-氨基半乳糖诱导肝功能衰竭，建立药物性急性肝功能衰竭动物模型。观察比较每组动物一般状况、生存时间、生理生化指标、颅内压、组织病理等方面的变化。结果 在缺血性模型中，1头猪死于术中大出血，1头猪的生存时间超过5d，其余5头存活时间为18～30h[平均存活时间（22．5±5．6）h]；反映肝功能的主要指标（AST，总胆红素、凝血酶原时间、血氨、血糖）均明显异常；组织病理显示肝脏大块坏死。在药物性模型中，动物在给药后12h各项指标开始变化明显，给药后48h损伤达高峰，平均存活时间为（67．9±9．4）h，最终死于严重肝功能衰竭。结论应用缺血方法与药物方法均能建立急性肝功能衰谒动物模型，其中D-氨基半乳糖1．2g／kg的给药剂量建立的模型稳定性好且能较好模拟临床急性肝功能衰竭发生发展的病理生理过程，可用于研究机制和评价疗效。

急性肝损伤动物模型的建立

目的:以对乙酰氨基酚、四氯化碳、氨基半乳糖为肝毒剂,建立急性肝损伤动物模型。方法:分别测定不同剂量对乙酰氨基酚、四氯化碳、氨基半乳糖所致急性肝损伤模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。结果:剂量为100 mg·kg^(-1)的对乙酰氨基酚、浓度为0.05%～1.0%四氯化碳及剂量600,800 mg·kg^(-1)的氨基半乳糖造模后均能明显升高小鼠血清ALT水平。结论:对乙酰氨基酚、四氯化碳、氨基半乳糖造模可用于保肝药的筛选与评价。

水动力注射法构建乙型肝炎病毒感染小鼠模型

目的建立尽量接近人类自然条件下发生的急性病毒性肝炎感染动物模型,研究其发病机制和治疗方法。方法选择中国地区高流行的人HBV C基因型具有复制能力的1.2倍HBV基因组为材料,构建可高效表达HBV基因组的重组腺病毒相关病毒载体pZAC2.1-HBV。利用尾静脉水动力注射法将pZAC2.1-HBV注入小鼠。结果瞬间转染人肝癌细胞系HepG2细胞后,在细胞上清和裂解液中检测到HBsAg。ELISA方法检测小鼠血清中HBsAg和HBeAg的水平可持续表达14天,随后抗-HBs、抗-HBe出现。同时在14天之内可检测到血清中HBV-DNA特异片段。结论采用水动力注射法成功建立HBV感染急性小鼠模型。

生脉散抑制急性肝衰竭大鼠内毒素血症的机制研究

目的探讨生脉散对急性肝衰竭内毒素血症模型大鼠的作用机制。方法选取50只SD大鼠,随机分为正常对照组、肝衰竭模型组(简称肝衰组)、肝衰竭模型加生脉散治疗组(简称肝衰+中药组)、肝衰竭内毒素血症模型组(简称LPS组)及肝衰竭内毒素血症模型加生脉散组(简称LPS+中药组),每组各10只。采用D-氨基半乳糖腹腔注射建立大鼠急性肝衰竭模型,在此基础上以大肠杆菌脂多糖(LPS)腹腔注射建立肝衰竭内毒素血症模型。肝衰+中药组与LPS+中药组造模前1h灌服生脉饮干预治疗。分别于造模2、8h后观察比较5组血清白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及LPS水平变化。结果肝衰组及LPS组造模2h后血清IL-6、IL-1β水平变化与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),LPS组血清LPS及TNF-α水平变化与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肝衰+中药组造模2h后血清IL-1β水平变化与肝衰组比较差异有统计学意义(P<0.05),LPS组血清IL-6、IL-1β、TNF-α及LPS水平变化与肝衰组比较差异有统计学意义(P<0.05);LPS+中药组造模2h后血清IL-6、IL-1β、TNF-α及LPS水平变化与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肝衰组及LPS组造模8h后血清IL-6、IL-1β及LPS水平变化与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肝衰+中药组造模8h后血清IL-1β水平变化与肝衰组比较差异有统计学意义(P<0.05),LPS组血清IL-6、IL-1β及LPS水平变化与肝衰组比较差异有统计学意义(P<0.05);LPS+中药组造模8h后血清IL-1β及LPS水平变化与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论生脉散能调节急性肝衰竭内毒素血症模型大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量变化,降低内毒素水平,不仅可减少炎性介质的产生,而且也阻断了炎性介质及内毒素本身对机体的损伤。

人工肝血浆置换联合血液滤过治疗猪急性肝衰竭实验研究

目的 建立大动物急性肝功能衰竭动物模型，用于评价非生物型组合人工肝治疗效果。方法 将中国实验小型猪12头随机分为对照组（n=6）与治疗组（n=6），静脉注射D-氨基半乳糖（1．2g／kg）诱导建立急性肝衰竭动物模型。治疗组动物在给药后24h及48h分别进行2次血浆置换联合血液滤过治疗，对照组未行任何干预措施。观察比较2组动物生存时间、生化指标、颅内压与病理变化的差异。结果 治疗组的生存时间较对照组明显延长，2组分别为（112．5±14．7）h和（67．9±9．4）h（P〈0．01），治疗组多项生化指标、颅内压、细胞因子、组织病理等都较非治疗组动物有不同程度改善（P〈0．05～0．01）。结论 血浆置换联合血液滤过的非生物型组合人工肝治疗，能显著延长急性肝衰竭动物模型的生存时间，降低颅内压，改善生化、病理指标与近期预后，可作为肝脏移植和药物治疗的有效辅助手段。

药物性急性肝衰竭动物模型的建立

目的建立用于人工肝实验研究的急性肝衰竭大动物模型。方法应用中国实验小型猪13头随机分为3组,低剂量组(n=3)给予1.0g/kg的D-氨基半乳糖;中剂量组(n=6)给予1.2g/kg的药物;大剂量组(n=4)给药剂量为1.5g/kg。观察比较每组动物的一般状况、生存时间、生理生化指标、颅内压、组织病理等方面的变化,从中得出建立急性肝衰竭动物模型的较稳定方法。结果低剂量组动物在给药后均出现一过性的肝功能损害,未出现肝昏迷表现,在给药后3～4d肝功能开始恢复,约1周后指标基本恢复正常,所有动物均存活;高剂量组的动物肝损害出现时间早,损伤剧烈,存活时间短(24.8±5.3h),均死于严重的肝衰竭。中等剂量组的动物在给药后12h各项指标开始变化明显,在给药48h时损伤达高峰,存活时间为67.9±9.4h,最终死于严重的肝衰竭。结论应用药物方法能建立急性肝衰竭动物模型,其中D-氨基半乳糖1.2g/kg的给药剂量建立的模型稳定性好,且能较好模拟临床急性肝衰竭发生、发展的病理、生理过程,可作为人工肝治疗的实验平台。

人工肝治疗前后实验性急性肝衰竭动物细胞因子变化的研究

目的探讨人工肝血浆置换联合血液滤过治疗前后对急性肝衰竭动物细胞因子变化的影响。方法28头中国实验小型猪随机分为对照组(n=13)和治疗组(n=15),在给予1.2g/kg的D-氨基半乳糖后48h,治疗组进行血浆置换联合血液滤过治疗,对照组未进行任何治疗。观察比较治疗前后两组动物细胞因子的变化。结果在经过人工肝治疗后,治疗组的生存时间(128.7±11.3)h较对照组(67.9±9.4)h明显延长(t=15.9,P<0.01)。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)均出现暂时性下降,同一时间点与对照组相比差异有显著性(t=1.9～4.7,P<0.05)。结论1次人工肝治疗可以使炎性细胞因子暂时下降,缓解急性肝衰竭的进程,但尚不能完全阻断病情的进展。

小鼠急性肝坏死模型锌指蛋白A20的变化及意义

目的探讨锌指蛋白A20在小鼠急性肝坏死模型中的表达变化规律及意义。方法用D-氨基半乳糖(D-GalN)+内毒素(LPS)联合制备小鼠急性肝坏死模型。将BalB/C小鼠随机分为正常对照组和模型组,于不同时间点取肝组织,采用苏木素-伊红(HE)染色光镜下观察肝组织病理学变化,免疫组化SP法检测肝细胞A20的表达情况。结果A20在正常对照组小鼠肝细胞中无表达。模型组小鼠在注射D-GalN和LPS后1h肝细胞开始表达A20;2h时表达水平迅速上升达峰值,Constantine半定量评分为4.33分,A20染色阳性肝细胞达20%～45%,主要分布在小叶间静脉周围;3h时A20表达下降;7h时降至难以检测水平。在肝坏死期,A20染色阳性肝细胞仍部分存活,而A20染色阴性肝细胞则大片坏死。结论在小鼠急性肝坏死模型出现大量肝细胞坏死前,A20在肝细胞中表达水平快速上升至高峰;当肝细胞大量坏死时,A20表达水平降至极低。A20在控制炎症反应、保护肝细胞免受损伤方面发挥了作用。

急性肝衰竭动物模型的研究进展

急性肝衰竭是一种伴随多种临床症状的严重肝损伤疾病,死亡率高,治疗难度大,因此制备急性肝衰竭动物模型以进行治疗研究就显得非常必要。本文综述了适用于不同种类实验动物的急性肝衰竭模型的制备方法。

重组8型腺相关病毒介导HBV急性感染树鼩模型建立

目的利用重组8型腺相关病毒介导1.3拷贝HBV基因组(1.3HBV,ayw亚型)在树鼩肝脏表达,建立HBV急性感染树鼩模型。方法通过大腿内侧静脉注射将携带有1.3 HBV的重组8型腺相关病毒(recombi-nant adeno-associated virus 8,rAAV8-1.3HBV)导入树鼩肝脏,通过ELISA检测树鼩血清中HBsAg、HBeAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb,荧光定量PCR检测树鼩肝脏和血清中HBV DNA,全自动生化分析仪检测血清中ALT水平,并观察感染后肝脏的病变情况。结果 HBV感染主要血清标志物1～2周内均检测阳性;30 d后肝组织仍可检测到病毒抗原阳性细胞;55 d时肝组织HBV DNA拷贝数仍可达到104～105;树鼩血清中HBV DNA拷贝数持续一个月高于正常组;肝组织炎细胞略增多,血清ALT水平持续升高。结论 rAAV8所携带的HBV基因组高效专一导入树鼩肝细胞并复制表达,成功建立HBV急性感染树鼩模型,为进一步探索rAAV8树鼩慢性感染模型打下一定的基础。

D-氨基半乳糖诱导的非人灵长类动物急性肝衰竭模型的建立

目的探讨不同剂量D-氨基半乳糖(D-Gal)对非人灵长类动物食蟹猴的影响并建立不同程度急性肝衰竭(ALF)猴模型。方法将12只食蟹猴分为3组,每组4只,分别为低剂量组、中剂量组和高剂量组,给药剂量分别为0.23、0.25、0.27 g/kg。各组动物均在清醒状态(无麻醉)下,将相应剂量的D-Gal溶液经前臂静脉一次性注射入猴体内。记录猴的存活时间,观察是否出现消化道症状和肝性脑病症状。分别于给药前0 h,给药后12、24、36、48、60、72、96、120、144 h测量生命体征,留取血标本检测丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)、血氨等指标。取肝脏组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理学改变。结果低剂量组猴全部存活,仅出现一过性肝损伤,无肝性脑病症状,给药后60 h,肝功能和凝血指标达峰值,后逐渐恢复,120 h后基本恢复正常;中剂量组猴病程进展稍缓,在出现严重肝功能损伤及肝性脑病症状后逐渐恢复,仅1只死亡;高剂量组猴均出现肝性脑病症状后死亡,存活时间(72±13)h,肝功能严重受损。肝组织病理学检查示,低剂量组肝组织散在肝细胞坏死,炎症细胞浸润;中、高剂量组可见肝小叶结构不清,肝细胞片状坏死伴有明显出血。结论中、高剂量组均符合ALF模型标准,中剂量组ALF程度较轻,有利于肝移植手术等实验的开展;高剂量组ALF程度较重,适用于相关治疗方案疗效评价。

香猪急性免疫性肝炎的形态学研究

采用香猪肝细胞免疫山羊，制备成抗肝细胞抗血清。实验香猪分成３组：第１组从脉系膜静脉内注入抗血清，按２．５ｍｌ／ｋｇ给药；第２组注入相同量的正常山羊血清；第３组通过胃管给四氯化碳，按５００ｍｇ／ｋｇ给药，取肝脏做光镜及透射电镜检查，第１组表现为典型的急性肝炎，第２组肝脏结构正常，第３组表现为小叶中央型坏死。

内毒素性急性肝衰竭小鼠肝细胞自噬动态变化的研究

目的观察D-氨基半乳糖(D-galactosamine, D-GalN)联合脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的内毒素性急性肝衰竭小鼠模型不同时间点肝组织病理及自噬水平的变化。方法选取无特定病原(specific pathogen free,SPF)级BALB/c雄性小鼠50只,随机分为3组:空白对照组5只,不给予任何处理;正常对照组5只,予0.9%无菌生理盐水腹腔注射;模型组40只,予D-GalN 700 mg/kg联合LPS 100μg/kg腹腔注射,模型组于给药后2 h、4 h、8 h、24 h随机麻醉小鼠3~5只,取肝行组织切片观察其病理、自噬水平的变化。结果 D-GalN联合LPS腹腔注射后2 h、4 h、8 h肝损伤程度逐渐加重,8 h达到最重,24 h基本恢复正常;与正常对照组比较,肝组织自噬水平2 h即明显增多,4 h达到最多,8 h较前下降,并且各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05),肝组织中自噬水平增加的主要是肝细胞。结论 D-GalN联合LPS诱导的内毒素性急性肝衰竭模型中,肝细胞在早中期自噬水平明显增加,晚期开始下降,与肝损伤的病理程度非正相关。

CCl_4致小鼠急性肝损伤模型的研究

目的建立稳定的CCl4小鼠急性肝损伤动物模型。方法观察小鼠性别、给药剂量、测定方法、动物质量因素对CCl4所致急性肝损伤模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的影响。结果动物性别对肝损伤模型动物ALT检测指标有一定的影响,0.1%浓度CCl4作为造模浓度较适宜,肝损伤模型动物ALT、AST指标机测较手测准确、简便,动物质量因素对CCl4肝损伤动物模型影响较大。结论 CCl4致小鼠急性肝损伤模型效果受动物性别、给药剂量和动物质量因素影响较大,各实验室应进行标准化研究,以保证CCl4急性肝损伤动物模型的稳定性。

常用急性肝损伤5种动物模型的病理组织学特点比较

目的比较并探讨5种急性肝损伤动物模型的病理组织学特点及其病理生理机制。方法按照常规方法制备5种常用急性肝损伤动物模型,实验结束取实验动物同一部位肝组织,经4%中性甲醛溶液固定后,制作常规组织切片、HE染色,镜下观察并应用电子显微成像系统分析形态学并采集图像。结果肝损伤组织病理学变化,异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导的以肝细胞灶状溶解、液化性坏死为主,D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导主要表现为肝脏组织发生灶片状凝固性坏死伴出血,卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)诱导以肉芽肿性炎症浸润为主,四氯化碳(CCl_4)诱导为肝小叶中央带凝固性坏死、周边肝组织发生空泡变性,四环素(TET)诱导为肝细胞弥漫性肿胀;ANIT造模组和CCl_4造模组1 w死亡率最高(100%),其次是BCG+LPS造模组(50%),而TET造模组1 w死亡率为0。结论不同肝损伤模型动物的肝脏病理形态学特征因诱导物不同而各不相同,不能简单地以病理形态学改变相同或相似作为选择模型动物的依据,选择模型动物时应该综合考虑疾病发生发展的病理机制和病理形态学改变。

急性肝衰竭的外科建模现状

急性肝衰竭是一种死亡率较高的严重肝损伤疾病,而人工肝支持系统是治疗急性肝衰竭的重要手段。随着新型人工肝支持系统的开发与应用,其有效性与实用性有待于理想的急性肝衰竭动物模型进行评估。本文综述了不同类型制备急性肝衰竭猪模型的外科手术学方法。

C3A细胞系构建生物人工肝治疗猪急性肝衰竭研究

目的探讨应用C3A细胞系所构建的生物人工肝对猪急性肝衰竭动物模型的治疗效果。方法将12只中华实验猪颈外静脉注射D-氨基半乳糖以建立急性肝衰竭模型,随机分成对照组(n=6)与生物人工肝治疗组(n=6)。应用C3A细胞系构建体外生物人工肝支持系统,在给予D-氨基半乳糖24h后对治疗组进行连续36h治疗,监测治疗前后不同时间点两组动物的一般状况、生存时间和生化指标。结果对照组动物平均存活时间为(48.9±11.2)h,治疗组存活时间为(105.7±12.6)h,生物人工肝治疗组在给药后48h、72h、96h、120h等各个时间点动物生存率均大于对照组。生物人工肝治疗结束时,血清胆红素、转氨酶下降,白蛋白、凝血酶原活动度上升,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05～P<0.01);血氨下降差异不明显(P>0.05)。结论D-氨基半乳糖猪急性肝衰竭模型能够较好的模拟临床急性肝衰竭过程,C3A细胞系生物人工肝具有一定的肝脏合成和解毒功能。