利用CRISPR/Cas9技术构建ACBD3基因敲除Hela细胞系

利用CRISPR/Cas9技术敲除Hela细胞的乙酰辅酶A结合结构域3(ACBD3),构建ACBD3基因敲除的Hela细胞系,便于后续研究ACBD3对肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)生长发育的影响及相关信号通路。根据CRISPR/Cas9设计原则,设计向导RNA(sgRNA),将sgRNA与Cas9蛋白即RNP复合物通过电转染至Hela细胞,挑取单克隆细胞进行培养鉴定,利用Western blot和免疫荧光法检测ACBD3蛋白表达情况。测序显示成功构建敲除细胞株,Western blot和免疫荧光结果显示ACBD3蛋白不表达。利用CRISPR/Cas9技术成功构建ACBD3基因敲除的Hela细胞系,为进一步研究该基因对Cpn生长发育的作用及相关信号通路奠定了基础。

褪黑素通过NF-κB/NLRP3信号抑制子宫内膜异位症的进展机制研究

目的:探讨褪黑素(MEL)对子宫内膜异位症(EMT)进展的抑制作用,以及其对核转录因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号的调控机制。方法:通过自体子宫内膜皮下种植法构建EMT大鼠。动物实验模型分假手术组(Sham组,大鼠在造模过程中仅进行子宫片段剪取)和实验处理4组,分别为:模型组(EMT组,大鼠进行自体子宫内膜皮下种植)、褪黑素组(EMT+MEL组,以50 mg/kg的MEL灌胃处理)、EMT+NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA)组(EMT+PMA组,以5 mg/kg的PMA腹腔注射)、EMT+MEL+PMA组(以50 mg/kg的MEL灌胃处理和5 mg/kg的PMA腹腔注射)。检测各组大鼠子宫内膜异位的质量、血清和腹腔液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;免疫组化、免疫荧光检测各组样本中髓过氧化物酶(MPO)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blot实验检测各组样本中NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达。结果:与Sham组相比,实验处理4组大鼠中动情周期紊乱的比例、异位子宫内膜的质量、血清以及腹腔液中TNF-α和IL-6的含量、MPO和VEGF的表达及NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与EMT组相比,EMT+MEL组和EMT+MEL+PAM组以上各项指标明显下降,而EMT+PAM组各项指标明显升高;与EMT+MEL组相比,EMT+MEL+PAM组、EMT+PAM组以上各项指标明显升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MEL能明显抑制EMT中的炎症反应,抑制EMT的进展,这可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号的激活实现的。

NLRP3炎症小体在阿尔兹海默症中的作用及潜在治疗靶点

阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是常见的神经退行性疾病,严重影响患者的生存质量。目前尚无有效的针对性治疗措施。AD发病机制复杂,是环境、遗传和年龄影响因素共同作用的结果。大脑中β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积、微管相关蛋白tau过度磷酸化形成的神经纤维缠结及神经元丢失是AD典型病理特征,大量研究证明,Aβ、tau蛋白聚集诱导核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor pyrin domain-containing 3,NLRP3)炎症小体活化是AD炎性机制的核心环节,且以其和上下游分子为靶点的抑制剂和化合物治疗在细胞和动物模型中均发挥神经保护作用,改善空间记忆功能障碍,但临床疗效和安全性仍待研究。因此,抑制NLRP3炎症小体的活化可能是AD的潜在治疗靶点。本文以NLRP3炎症小体的活化机制和影响因素及与AD关系进行综述,并总结以NLRP3炎症小体为靶点的AD治疗药物,以期为AD等NLRP3炎症小体相关疾病提供新的治疗方向。

缺血性脑卒中患者血清TIM-3、GATA-3与颅内动脉斑块稳定性的关系

目的探讨缺血性脑卒中患者血清T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)与颅内动脉斑块稳定性的关系。方法选取2021年4月—2023年4月海南医学院第一附属医院收治的124例缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据高分辨率磁共振(HRMRI)颅内动脉管壁成像检查结果分为无斑块组19例、稳定斑块组28例、不稳定斑块组77例。采用酶联免疫吸附试验检测血清TIM-3、GATA-3水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清TIM-3、GATA-3对缺血性脑卒中患者颅内的动脉斑块稳定性的预测价值;采用多因素逐步Logistic回归分析探究影响缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块稳定性的因素。结果无斑块组、稳定斑块组、不稳定斑块组患者的高血压患病率、颅内动脉狭窄程度构成比、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。无斑块组、稳定斑块组、不稳定斑块组患者血清TIM-3、GATA-3水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);稳定斑块组、不稳定斑块组血清TIM-3水平高于无斑块组(P<0.05),不稳定斑块组血清TIM-3水平高于稳定斑块组(P<0.05);稳定斑块组、不稳定斑块组血清GATA-3水平低于无斑块组(P<0.05),不稳定斑块组血清GATA-3水平低于稳定斑块组(P<0.05)。ROC曲线结果显示,TIM-3联合GATA-3预测缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块稳定性的曲线下面积(AUC)最大,为0.903(95%CI:0.846,0.957),特异性为85.7%(95%CI:0.832,0.943),敏感性为84.0%(95%CI:0.795,0.892)。多因素逐步Logistic回归分析显示,颅内动脉狭窄程度高[O^R=2.016(95%CI:1.419,2.863)]、高水平Hcy[O^R=2.323(95%CI:1.567,3.445)]、TIM-3≥393.78 ng/L[O^R=3.022(95%CI:1.903,4.800)]、GATA-3≤38.49ng/L[O^R=2.497(95%CI:1.645,3.790)]是缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块不稳定的独立危险因素(P<0.05)。结论高水平TIM-3、低水平GATA-3与缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块稳定性下降有关,且两项指标可作为预测患者颅内动脉斑块稳定性的血清标志物。

系统性红斑狼疮患者尿液Gal-3BP,VSIG4表达水平与疾病活动度及肾损伤的相关性研究

目的探讨尿半乳糖凝集素-3结合蛋白(galectin-3 binding protein,Gal-3BP)及V-set包含免疫球蛋白域4(V-set containing immunoglobulin domain 4,VSIG4)水平在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者尿液中的表达及其与疾病活动和肾损伤的关系。方法选取儋州市人民医院收治的SLE患者105例(SLE组)和体检正常者50例(对照组)作为研究对象。105例SLE患者根据SLE疾病活动度指数(SLEDAI)评分分为轻度活动度组(SLEDAI评分≤9分,n=51)、中度活动度组(14分≥SLEDAI≥10分,n=29)和重度活动度组(SLEDAI评分≥15分,n=25)。按肾功能受损程度分为肾功能正常组、肾功能轻度受损组和肾功能中重度受损组。采用酶联免疫吸附法检测尿液Gal-3BP,VSIG4表达水平,应用多元Logistic回归分析影响SLE患者发生肾损伤的危险因素,绘制ROC曲线分析尿Gal-3BP及VSIG4水平预测SLE患者发生肾损伤的价值。结果SLE组尿Gal-3BP(251.38±46.75 ng/ml)及VSIG4(13.40±4.27 ng/ml)水平均明显高于对照组(117.50±18.24 ng/ml,2.73±0.85ng/ml),差异具有统计学意义(t=19.315,15.681,均P<0.001)。SLE患者活动度越高,尿Gal-3BP及VSIG4水平越高,重度活动度组>中度活动度组>轻度活动度组,差异具有统计学意义(F=23.416,17.380,均P<0.001)。肾功能中重度受损组和轻度受损组尿Gal-3BP及VSIG4水平明显高于肾功能正常组(t=24.580,18.163;20.864,15.947),且中重度受损组尿Gal-3BP及VSIG4水平明显高于轻度受损组(t=19.837,11.215),差异具有统计学意义(均P<0.001)。多元Logistic回归分析显示,尿Gal-3BP(OR=3.472,95%CI:2.685~11.463)及VSIG4(OR=2.376,95%CI:1.842~9.105)水平升高是影响SLE患者发生肾损伤的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,Gal-3BP及VSIG4二项联合预测SLE患者发生肾损伤的曲线下面积(95%置信区间)[AUC(95%CI)]最大[0.909(0.846~0.973)],其准确度为88.6%。相关分析显示,SLE患者尿Gal-3BP与VSIG4水平呈正相关(r=0.813,P<0.05),尿Gal-3BP及VSIG4水平与SCr,BUN,24h尿蛋白、抗dsDNA抗体及SLEDAI评分均呈正相关(r=0.358~0.702,均P<0.05),而与血红蛋白、eGFR均呈负相关(r=-0.479~-0.670,均P<0.05)。结论尿Gal-3BP及VSIG4水平在SLE患者中明显升高,其高表达与疾病活动和肾损伤有关,二项联合预测SLE患者发生肾损伤有较好的价值。

基于肠道炎症反应研究降糖3号方抗糖尿病的作用机制

目的:观察降糖3号方对2型糖尿病小鼠肠道炎症相关指标的影响,揭示其抗糖尿病的作用机制。方法:选取4周龄C57BL/6N雄性小鼠,高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)注射构建2型糖尿病小鼠模型,采用随机数字表法将成模小鼠分成模型组、二甲双胍组、降糖3号方组,每组8只。选取8只标准饲料喂养的小鼠作为正常组。药物干预8周结束后,应用细胞因子抗体芯片技术检测小鼠结肠组织中多种炎症介质水平,并进行差异表达蛋白筛选、基因本体(GO)蛋白功能、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。蛋白质印迹法检测各组小鼠结肠组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活与肠道黏膜屏障相关的因子G蛋白偶联受体43(GPR43)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶(Caspase-1)以及闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的蛋白表达水平。结果:各组间肠道炎症介质差异明显,与模型组比较,降糖3号方组IL-1β、IL-6等炎症介质表达下降,降糖3号方可上调结肠组织中ZO-1、Occludin、GPR43蛋白表达水平,降低ASC、Caspase-1蛋白表达水平(P<0.05)。结论:2型糖尿病小鼠结肠炎症反应明显,降糖3号方能够有效抑制2型糖尿病小鼠肠道炎症,其作用可能与调控NLRP3炎症小体,进而影响下游炎症介质有关。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

原花青素A1抑制NLRP3信号通路缓解抑郁症大鼠海马神经元损伤的研究

目的:探究原青花素A1(PCA1)是否能通过抑制海马神经细胞凋亡而改善抑郁症大鼠疾病进展。方法:将40只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为正常对照组、慢性不可预测轻度应激(CUMS)组、PCA1治疗组、PCA1+BMS-986299组。实验期间每天观察大鼠一般情况;给药结束后用糖水偏好实验测试快感缺失症状,用旷场实验评估大鼠自发活动行为;取海马组织切片做尼氏染色分析神经细胞状态,蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关蛋白x(Bax)、胱天蛋白酶-8(Caspase-8)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和白细胞介素18β(IL-18β)的表达。结果:PCA1能够有效提高抑郁症大鼠的糖水偏好和活动兴趣,修复细胞超显微结构,有效降低CUMS大鼠海马中上调的Bax、Caspase-8、NLRP3、ASC和IL-18β蛋白水平,提高CUMS大鼠海马中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。然而,与PCA1组相比,给药BMS-986299后大鼠抑郁症行为恶化,细胞超显微结构排列紊乱,大鼠海马中Caspase-8、NLRP3、ASC和IL-18β蛋白水平再次上调同时Bcl-2蛋白水平再次下调。结论:PCA1通过抑制细胞凋亡通路中NLRP3炎症小体途径发挥治疗效果,可能是其干预抑郁症的分子依据。

微小RNA-3679与小鼠异种移植物肿瘤生长的关系研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-3679对小鼠异种移植物(Hep3B)肿瘤生长影响的机制研究。方法将裸鼠随机分为3组,空白对照组(NC组),抑制miRNA-3679组(CT1组)及同时转染miRNA-3679 inhibitor与si-ZADH2组(CT2组);裸鼠成瘤实验检测各组瘤体质量及体积;实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关基因表达;蛋白质免疫印迹检测瘤组织中靶蛋白及相关凋亡蛋白;免疫组化染色测定Caspase-3的表达;Ki-67免疫组织化学染色分析细胞增殖情况。结果28 d,CT1组肿瘤体积及质量均小于NC组(P<0.01);CT1组及CT2组中miRNA-3679的表达低于NC组(P<0.01),CT1组中的ZADH2表达高于NC组及CT2组(P<0.001);蛋白质免疫印迹检测提示,CT1组中的ZADH2蛋白表达升高(P<0.001),CT2组ZADH2蛋白表达低于CT1组(P<0.001);CT1组Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达高于NC组和CT2组(P<0.05),但CT1组Bcl-2蛋白表达低于NC组和CT2组(P<0.05);免疫组织化学染色显示,CT1组Caspase-3的表达高于NC组和CT2组(P<0.05);Ki-67免疫组织化学染色提示,CT1组肿瘤细胞数量少于NC组和CT2组(P<0.01)。结论miRNA-3679可促进小鼠异种移植物(Hep3B)肿瘤的发生与发展,且miRNA-3679可通过靶基因ZADH2发挥作用。

血清ATX、Angptl4、S100 A12与脓毒症并发ARDS患者NLRP3炎性小体及预后的关系

目的 探讨血清自分泌运动因子(autotaxin, ATX)、血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,Angptl4)、S100钙结合蛋白A12(S100 calcium-binding protein A12,S100A12)与脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体以及预后的关系。方法 选取2019年1月至2022年4月收治的303例脓毒症患者,根据是否合并ARDS分为ARDS组(106例)和非ARDS组(197例),比较两组研究对象的血清ATX、Angptl4、S100A12、NLRP3及细胞因子白细胞介素(IL)-1β及IL-18水平,采用Pearson相关系数法分析血清ATX、Angptl4、S100A12水平与NLRP3、IL-1β及IL-18水平的相关性。根据ARDS组患者住院期间预后情况分为生存组(57例)与死亡组(49例),分析两组患者临床资料,并采用logistic回归分析模型分析导致脓毒症并发ARDS患者住院期间死亡的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清ATX、Angptl4、S100A12单独及联合检测对脓毒症并发ARDS患者住院期间死亡的预测价值。结果 ARDS组血清ATX、Angptl4、S100A12、NLRP3、IL-1β及IL-18水平均高于非ARDS组(P<0.05)。Pearson分析显示,血清ATX、Angptl4、S100A12与NLRP3 mRNA、IL-1β、IL-18水平均呈正相关(P<0.05)。死亡组年龄、急性生理与慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、血乳酸、血清ATX、Angptl4、S100A12水平以及休克、机械通气时间≥3 d、ICU入住时间≥10 d、侵入性置管患者的占比均高于生存组,氧合指数(OI)、白蛋白水平低于生存组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,入院时APACHEⅡ、SOFA评分、血清ATX、Angptl4、S100A12升高均是导致患者死亡的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清ATX、Angptl4、S100A12及三者联合预测脓毒症并发ARDS患者住院期间死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.729、0.708、0.780、0.852,三血清指标联合预测效能高于单项检测。结论 脓毒症并发ARDS患者血清ATX、Angptl4、S100A12水平升高,与NLRP3炎性小体及其细胞因子关系密切,且是影响住院期间病情转归的独立危险因素,联合检测血清ATX、Angptl4、S100A12有助于脓毒症并发ARDS患者短期预后的判断。

高尔基体蛋白ACBD3通过AKT-FOXOs信号通路促进三阴性乳腺癌细胞增殖

目的:探讨高尔基体蛋白含酰基辅酶A结合结构域蛋白3(ACBD3)促进三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的作用及其机制。方法:通过qPCR和Westernblot检测乳腺癌细胞系中ACBD3的表达;使用沉默内源性ACBD3的TNBC细胞株,采用MTT实验、EdU染色、平板集落形成实验及裸鼠体内异种移植成瘤术检测ACBD3对细胞增殖能力的影响;通过基因集富集分析(GSEA)观察ACBD3与胞内信号通路的关系;Westernblot验证ACBD3对AKT-FOXOs信号通路相关蛋白的影响。结果:qPCR及Westernblot实验结果显示,ACBD3的mRNA及蛋白水平在乳腺癌细胞中均高于永生化正常乳腺上皮细胞MCF-10A,其中ACBD3在TNBC细胞中的表达水平尤其高;细胞功能学实验表明,ACBD3能够通过促进TNBC细胞G_(1)/S期的转变从而增强细胞的增殖能力;GSEA结果显示ACBD3的表达与AKT信号通路相关。Westernblot实验验证ACBD3能够通过增强AKT活性,抑制FOXOs活性而促进TNBC细胞增殖。结论:在TNBC细胞中ACBD3能够调控AKT-FOXOs信号通路而促进细胞增殖。

木犀草素抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征的改善作用

目的:探讨木犀草素调控活性氧(ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的改善作用。方法:60只SD小鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(20 mg·kg^(-1))组、邻苯三酚(PG)(75 mg·kg^(-1))组和木犀草素(20 mg·kg^(-1))+PG(75 mg·kg^(-1))组,每组12只。除对照组外,其他组小鼠采用气管滴注脂多糖(LPS)溶液的方法建立ARDS模型,对照组小鼠气管滴注等量生理盐水。称量各组小鼠右肺湿质量和干质量,并计算湿质量/干质量(W/D)比值,检测各组小鼠动脉血氧分压(PaO_(2)),HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,检测各组小鼠吸气阻力(Ri)、每分钟通气量(MV)和呼气峰流速(PEF),检测各组小鼠肺组织中ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)水平及血清白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺泡壁变厚,肺泡塌陷变形,肺间质水肿伴有大量炎性细胞浸润,肺组织有严重病理损伤,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平升高(P<0.05);MV、PEF、PaO_(2)和肺组织中GSH-Px及CAT水平降低(P<0.05)。与模型组比较,木犀草素组小鼠肺组织病理损伤均有所改善,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平和TXNIP、caspase-1、caspase-4及NLRP3蛋白表达水平均降低(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均升高(P<0.05);PG组小鼠肺组织病理损伤均加重,W/D比值,Ri,血清IL-18、IL-1β及TNF-α水平,肺组织中ROS水平及TXNIP、caspase-1、caspase-4和NLRP3蛋白表达水平均升高(P<0.05),MV、PEF和PaO_(2)及肺组织中GSH-Px和CAT水平均降低(P<0.05)。结论:木犀草素可通过抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活,减轻肺部炎症与氧化应激,改善ARDS小鼠肺损伤,修复其肺功能。

Ⅲ期结直肠癌中NLRC3与预后和肿瘤免疫的关系

目的:探讨核苷酸寡聚化结构域样受体家族半胱天冬酶募集结构域蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 3,NLRC3)与Ⅲ期结直肠癌的预后及肿瘤免疫相关指标的关系。方法:回顾性收集中南大学湘雅医院2012年至2013年122例经手术根治切除的Ⅲ期结直肠癌患者的相关资料。利用免疫组织化学法分析NLRC3与CD8^+T细胞的表达情况,利用患者的术前临床资料计算中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR),并检测其微卫星稳定性。采用χ~2检验分析NLRC3与临床病理因素之间的关系,采用COX回归模型分析Ⅲ期结直肠癌的独立预后因素。结果:在Ⅲ期结直肠癌中,肿瘤组织CD8^+T细胞浸润分期(χ~2=27.79,P<0.01)、NLR值(χ~2=6.35,P<0.05)、淋巴结转移分期(χ~2=10.12,P<0.01)以及微卫星稳定性(χ~2=6.05,P<0.05)与NLRC3的表达有关。NLRC3(OR=0.066,95%CI:0.020～0.218)、血管癌栓(OR=3.119,95%CI:1.547～6.286)及NLR(OR=5.103,95%CI:2.465～10.563)对Ⅲ期结直肠癌的5年总生存期(overall survival,OS)有影响(均P<0.05);另外,NLRC3(OR=0.144,95%CI:0.055-0.377)、血管癌栓(OR=3.589,95%CI:1.859～6.932)及NLR(OR=2.939,95%CI:1.509～5.723)对Ⅲ期结直肠癌的无病生存期(disease free survival,DFS)同样有影响(均P<0.05)。结论:NLRC3,血管癌栓和NLR是Ⅲ期结直肠癌的独立预后因素。NLRC3通过抑制系统性炎症、促进局部抗肿瘤免疫而使Ⅲ期结直肠癌患者具有良好的预后。

白色念珠菌经组织蛋白酶B途径诱导小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达

目的探讨含热蛋白结构域3富含亮氨酸重复序列的核苷酸结合寡聚化结构域(NLRP3)在白色念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及其激活途径。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为空白对照组、CA-074Me组、白色念珠菌组、白色念珠菌+10-6mol·L-1CA-074Me组和白色念珠菌+10-5mol·L-1CA-074Me组。实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内NLRP3 mRNA表达,Western blot检测细胞内溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B)和胱天蛋白酶-1(caspase-1)p20蛋白质水平,酶联免疫吸附试验测定各组细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果白色念珠菌组细胞内NLRP3 mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白表达、细胞培养上清液中IL-1β水平均显著高于空白对照组(P<0.01)。加入10-5mol·L-1CA-074Me干预后,细胞内NLRP3mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β水平与白色念珠菌组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白色念珠菌通过活化cathepsin B诱导巨噬细胞NLRP3的表达、caspase-1的活化和IL-1β的分泌。

蜂胶黄酮对炎症反应单核细胞中NLRP3炎性小体活性的影响

目的观察蜂胶黄酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的炎症反应单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性小体活性的影响。方法培养单核细胞THP1并分为5个组。实验1、2、3组及模型组加入ox-LDL 100μg/m L制作单核细胞炎症反应模型;实验1、2、3组在加入ox-LDL前分别给予5、10、15μg/m L蜂胶黄酮处理1 h;对照组不添加药物。各组培养24 h后,采用Western blotting法检测细胞中的NLRP3蛋白,采用ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β、IL-18。结果对照组、模型组、实验1组、实验2组、实验3组细胞中NLRP3蛋白相对表达量分别为0.26±0.04、1.12±0.15、0.98±0.11、0.65±0.07、0.52±0.06,模型组与对照组相比,P均<0.05;实验2组、实验3组与模型组相比,P均<0.05。模型组培养液上清中IL-1β、IL-18水平高于对照组,实验2组、实验3组培养液上清中IL-1β、IL-18水平低于模型组(P均<0.05)。结论蜂胶黄酮可下调ox-LDL诱导的单核细胞炎症反应模型中NLRP3蛋白的表达,降低IL-1β、IL-18分泌水平,抑制NLRP3炎性小体的活性。

丙泊酚通过NLRP3/ASC/Caspase-1通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响

目的探讨丙泊酚通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响。方法将肺癌A549细胞随机分为空白对照组、低浓度丙泊酚组(30μmol/L)、中浓度丙泊酚组(60μmol/L)、高浓度丙泊酚组(120μmol/L)、高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组(120μmol/L+100 nmol/L);各组进行相应处理后。四甲基偶氮唑蓝法检测肺癌A549细胞增殖;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;Hoechst/碘化丙啶(PI)双重染色检测肺癌A549细胞焦亡;荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肺癌A549细胞增殖[原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)]、焦亡[消皮素D-N端(GSDM D-N)、IL-1β]及NLRP3、ASC、Caspase-1信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果空白对照组细胞呈蓝色荧光;低、中、高浓度丙泊酚组红色荧光逐渐增加;与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组红色荧光较少;表明丙泊酚可促进肺癌A549细胞焦亡,NLRP3抑制剂可反转高浓度丙泊酚的作用效果。与空白对照组相比,低、中、高浓度丙泊酚组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平依次降低,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平依次升高(P<0.05);与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平升高,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论丙泊酚可能通过激活NLRP3/ASC/Caspase-1通路来抑制肺癌A549细胞增殖,促进细胞焦亡。

PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspse-1通路诱导大鼠子宫炎症反应

颗粒物(PM)对呼吸系统、心血管系统、神经系统和免疫系统均有损害,但目前关于吸入颗粒物对生殖损伤的研究较少。本研究旨在探讨细颗粒物(PM_(2.5))短期暴露对大鼠子宫炎症损伤及其作用机制。PM_(2.5)暴露30 d后,高剂量组大鼠的子宫脏器系数、内膜上皮细胞厚度和腺上皮高度均明显高于对照组(P<0.05),抑制剂MCC950则能明显降低PM_(2.5)对子宫的影响。子宫组织免疫荧光双染色结果显示,PM_(2.5)暴露组子宫内CD45白细胞和CD11b巨噬细胞均明显增加(P<0.05)。Elisa法检测子宫组织和血清中白介素1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1),暴露组子宫组织和血清中IL-1β和TGF-β1含量明显升高(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,PM_(2.5)上调核苷酸结合低聚体结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、pro-IL-1β、pro-Caspase-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白质表达量(P<0.05)。与高剂量组相比,NLRP3抑制剂MCC950能明显降低NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白质表达水平(P<0.05)。综上,PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspase-1信号,诱导大鼠子宫炎症反应,为PM_(2.5)生殖毒性预防和治疗提供理论基础。

褪黑激素抑制NLRP3炎性小体减轻小鼠蛛网膜下腔出血早期脑损伤

目的探讨褪黑素通过调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症复合体(NLRP3)对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)的保护作用和机制。方法建立小鼠颈动脉线穿法SAH模型,分为假手术组、假手术+溶剂组、SAH+溶剂组和SAH+褪黑素组四组,进行SAH出血量评级和小鼠神经功能缺陷评分,脑组织水含量测定脑水肿,伊文思蓝法测定血脑屏障(BBB)通透性,检测脑丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,神经核抗原(Neu N)和末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测神经元存活和死亡率,Western Blot检测脑凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症复合体(NLRP3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、前凋亡因子(Bim)和活化的caspase-1蛋白表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)脑中细胞因子白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平。结果槲皮素可以提高SAH小鼠生存率,降低神经功能缺陷评分,减少脑神经元凋亡,提高脑谷胱甘肽(GSH)水平,降低丙二醛(MDA)水平,减轻脑水肿和BBB通透性损害。槲皮素可以降低NLRP3以及细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达,抑制IL-1β、IL-6的分泌和活化的caspase-1的蛋白表达,并可以增高抗凋亡因子Bcl2的表达,降低凋亡前体因子Bim的表达。结论槲皮素通过抑制NLRP3炎性相关的凋亡来减轻SAH后的EBI。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症复合体在疾病中的作用

核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症复合体属于一种常见的模式识别受体,在调节先天免疫和保护性免疫中均发挥重要作用。近年来,大量文献报道,NLRP3炎性复合体及其激活的下游信号级联,例如白细胞介素(IL)1β、IL-18等,可以有效地阻止病毒和微生物的入侵,并帮助修复损伤细胞和组织。然而,近来也有文献报道IL-1β等活动的异常调节可以参与多种疾病的发生、发展。炎症复合体通过激活一系列下游信号转导通路,参与多种炎症疾病的发展。因此,NLRP3炎症复合体在机体疾病的发生中的起关键作用。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症小体与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(AD)是一种慢性神经退行性疾病,发病原因至今未明。聚集在大脑内部的β淀粉样蛋白斑块是AD的主要病理特征之一,然而靶向细胞外β淀粉样蛋白斑块的药物均未能治愈疾病。固有免疫应答与神经炎症在AD的发病及进展中发挥重要作用。小胶质细胞作为中枢神经系统中的巨噬细胞,参与细胞外β淀粉样蛋白沉积、细胞内tau蛋白形成神经原纤维缠结和神经元损伤过程。越来越多的研究显示,小胶质细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症小体的激活与AD的发生和发展相关,提示该信号通路可能是治疗AD的新靶点。本文总结了NLRP3炎症小体激活与调节在AD中的作用机制及以该通路为靶标治疗AD的研究现状,以期为未来该领域的研究提供参考。