尖孢镰刀菌转化表达松材线虫Bx-apa-2和Bx-apm-2基因dsRNA以及饲喂法介导的RNAi研究

通过使用饲喂法介导的RNAi技术,对松材线虫Bx-apa-2和Bx-apm-2基因进行了研究。结果表明:线虫通过取食相应真菌转化体,可以实现持续性的RNA干扰,并造成靶基因的显著性下调。干扰Bx-apa-2基因,线虫主要表现出细小的表型;干扰Bx-apm-2基因,雌虫主要表现出细小的表型,而雄虫则表现出短粗的表型;同时干扰Bx-apa-2和Bx-apm-2基因,线虫主要表现出更为显著的短粗表型。因此,研究结果进一步证明了饲喂法介导的RNAi可以显著性的抑制松材线虫靶基因的表达,并对线虫的表型产生明显的影响。

适应素耳结合外壳相关蛋白2高表达对肝细胞癌生物学功能的影响

目的:探讨适应素耳结合外壳相关蛋白2(NECAP2)在肝细胞癌中的表达与肝细胞癌(HCC)患者预后的关系,观察NECAP2在肝癌细胞MHCC-97H中的表达及其对HCC增殖及侵袭的影响。方法:从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库下载并整理TCGA-LIHC的数据进行分析;选取16例肝癌样本及其配对的癌旁样本进行研究,用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测这16对样本、正常肝细胞LO2以及肝癌细胞MHCC-97H中的差异表达水平;用小干扰RNA转染MHCC-97H细胞以沉默NECAP2的表达,实验分为实验组(si-NECAP2组)和对照组(si-NC组)。并采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验、Transwell实验和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测实验组和对照组的细胞活力、增殖、迁移和侵袭能力以及表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达量。两组间比较采用t检验。结果:基于TCGA数据库中的肝癌细胞组和正常肝细胞组,癌旁组织中NECAP2的表达水平明显低于肝癌组织(3.747±0.474比4.367±0.593),差异有统计学意义(t=7.102,P<0.05);NECAP2在正常肝组织中的表达(3.746±0.474比4.263±0.503)要显著低于配对的肝癌组织,差异有统计学意义(t=5.152,P<0.05)。ROC曲线下面积(AUC)值为0.802,表明NECAP2对HCC有很好的诊断价值,Kaplan-Meier分析结果显示,NECAP2高表达组患者的生存期更短;实验组细胞吸光度(A)值、EdU阳性细胞占比、迁移细胞数量和侵袭细胞数量[3.201±0.300、(15.06±8.90)%、(103.000±7.550)个、(112.333±5.508)个]明显低于对照组[4.852±0.462、(49.070±10.520)%、(141.000±8.888)个、(146.333±4.041)个],差异有统计学意义(t=5.995、4.269、5.664、8.621,P<0.05)。此外,EGFR的表达量更低,与NECAP2的表达呈正相关。结论:NECAP2在HCC中的表达显著上调,NECAP2高表达组的患者预后更差;细胞实验证明下调NECAP2的表达可能通过下调EGFR的表达来抑制HCC的增殖、迁移及侵袭能力。