苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的研究苏拉明联合顺铂对肺腺癌LA795细胞T739小鼠移植瘤的抑制作用和移植瘤内bFGF表达的影响。方法复制小鼠移植瘤模型,将32只接种高转移性LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、苏拉明组和顺铂+苏拉明组。用药干预16d,用药中观察肿瘤生长情况,于接种后24d处死各组小鼠,取出双肺和剥离皮下肿瘤,计算出肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率。移植瘤标本行病理观察,免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度(MVD)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达。结果各用药组肿瘤的生长受到抑制,瘤重明显低于对照组,其抑瘤率分别为23.03%、34.40%和56.30%。苏拉明组与对照组比肺表面转移结节数、肺转移发生率下降,肺表面结节转移抑制率上升,联合组更为明显。病理观察见各用药组肿瘤细胞出现坏死、苏拉明组及联合组肿瘤间质中血管数减少。苏拉明组,顺铂+苏拉明组MVD、bFGF的表达都比对照组减少,差异有显著性(P<0.01);两者联合有协同下调MVD、bFGF表达的作用,而单用顺铂组与对照组比差异无显著性。结论苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长和转移,与顺铂有协同作用,其机制可能与下调bFGF表达,抑制其微血管形成有关。

黄芩黄素对人食管腺癌OE33细胞的抑制作用

本研究初步探讨体外黄芩黄素对人食管鳞癌OE33细胞的抑制作用以及可能的作用机制。MTT分析结果表明,黄芩黄素对人食管腺癌OE33细胞具有较强的增殖抑制作用;光学显微镜和激光共聚焦显微镜观察结果表明,黄芩黄素可诱导OE33细胞分化。荧光定量RT-PCR和Western-blot分析结果表明,经80μmol/L黄芩黄素作用后,OE33细胞中hTERT mRNA的表达下降;黄芩黄素诱导14-3-3σ、抑制cyclin B1和cyclin D1的表达,推测此3种基因可能是黄芩黄素实现细胞分化诱导作用的靶基因。

TGF-beta1诱导人肺腺癌PC9细胞上皮-间质转化的研究

背景与目的研究表明上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅参与胚胎形成与发育,而且参与肿瘤侵袭转移。此外,人转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂。本研究旨在探讨TGF-β1诱导人肺腺癌PC9细胞发生EMT及其对PI3K/AKT信号通道的影响。方法将体外培养的PC9细胞用不同浓度TGF-β1处理48h,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot和细胞免疫荧光验证EMT相关标记蛋白表达变化。同时,采用Western blot方法检测AKT和P-AKT的表达水平。结果TGF-β1可诱导PC9细胞向间质型细胞形态转化,并上调间质标记蛋白Fibronectin的表达及下调P-AKT的表达。结论TGF-β1可诱导PC9细胞发生EMT,并影响PI3K/AKT信号通道。

苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的转移

目的研究苏拉明联合槲皮素对小鼠肺腺癌转移的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:对照组、顺铂(DDP)组、槲皮素组、苏拉明组、苏拉明+槲皮素组。实验3周后,处死全部小鼠,取出双肺和剥离皮下肿瘤,计算肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率,测量各组小鼠肺湿重。免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达并定量分析。结果苏拉明组、槲皮素组与对照组相比肺表面转移结节数明显下降,同时苏拉明组中肺转移发生率、皮下肿瘤内MVD、VEGF的表达与对照组相比也明显下降,相反顺铂组对此则无明显影响。联合用药组则显著抑制肺表面转移结节数且具有协同作用。结论苏拉明和槲皮素对LA795肺腺癌的肺结节转移具有协同抑制作用,苏拉明抑制LA795肺腺癌转移与其抑制其肿瘤内VEGF表达相关。

Wnt5a在肺鳞癌和腺癌中的表达及意义

目的探讨Wnt5a基因及蛋白在肺鳞癌和腺癌中的表达水平及其临床意义。方法用Northern blot及Westernblot分析对43例肺鳞癌和腺癌癌组织及10例非肺癌正常肺组织的Wnt5a基因及蛋白的表达进行检测。结果Wnt5a在肺癌组织中的表达高于正常肺组织,有淋巴结转移的肺癌组织Wnt5a表达高于无转移的肺癌组织。结论Wnt5a与肺鳞癌和腺癌的转移与恶化密切相关。

hnRNP K在肺腺癌中表达及其作用的研究

目的研究核内不均一核糖核蛋白K（hnRNP K）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法采用SP免疫组织化学方法对经手术切除病理确诊为肺腺癌的70例肺癌组织标本进行hnRNP K蛋白表达的检测,根据不同肿瘤的直径,计算阳性表达率;构建hnRNP K siRNA表达载体,采用Lipofectamine 2000瞬时转染A549细胞24h后,RT-PCR、Western blot检测A549细胞hnRNP K mRNA及其蛋白表达量;以流式细胞仪检测重组质粒hnRNP K siRNA及siRNAn转染A549细胞后细胞周期及凋亡的变化。结果肺腺癌组织中肿瘤直径≤3cm、3～5cm、≥5cm的hnRNP K的阳性表达率分别为38.5%、95.2%、91.7%;hnRNP K siRNA转染24h后的A549细胞hnRNPK mRNA及蛋白表达明显被抑制（P〈0.01）;hnRNP K siRNA能显著抑制A549的生长及细胞周期的分布,G0/G1的细胞数从37.21%增加到85.60%,S和G2/M的细胞数分别从47.71%、13.00%减少到13.50%和0.32%,差异均有统计学意义（P〈0.01）。hnRNP K siRNA能促进A549的凋亡,其凋亡率达到4.79%（P〈0.01）。结论hnRNP K能促进肺腺癌细胞的生长;hnRNP K siRNA可抑制肺腺癌细胞的生长,促进其凋亡。

耐阿霉素人胃腺癌细胞亚株的分离及其特征

通过间歇性加药逐步提高培养液中阿霉素(ADM)的浓度,我们从人胃腺癌细胞SGC—7901中获得了耐ADM的细胞亚株。该耐药亚株对ADM具有25倍的耐受性,同时对其它多种抗癌药具有交叉耐受性。与亲代细胞相比,耐药细胞的某些生物学特性发生了改变:细胞内ADM的聚积量降低1倍;细胞内ADM的分布也发生了改变。该耐药亚株的获得,将为深入研究人胃癌耐药机制以及寻找克服耐药性的药物和方法,提供一个重要的体外实验模型。

人肺腺癌细胞株A549和GLC-82的计算机图像色度学定量分析

目的从色度学角度定量分析人肺腺癌细胞株A549和GLC-82的相似性和差异性,为更好地认识、分析、理解及比较这两株细胞的有关研究结果奠定基础。方法用计算机图像分析技术分别测试A549和GLC-82细胞蜡块切片之HE染色和细胞甩片之巴氏染色的色度学参数,包括细胞浆的红、绿、蓝三基色(Rp、Gp、Bp)及其三基色系数(rp、gp、bp),核的红、绿、蓝三基色(Rn、Gn、Bn)及其三基色系数(rn、gn、bn)。结果色度学参数测试结果显示:除Gp外,A549和GLC-82细胞甩片巴氏染色细胞及胞核三基色参数Rp、Rn、Gn、Bp、Bn及其三基色系数rp、rn、gp、gn、bp、bn差异均具有显著性(P<0.01);A549细胞的Rp、Rn、rp、rn均高于GLC-82细胞,GLC-82细胞的Gp、Gn、Bp、Bn、gp、gn、bp、bn均高于A549细胞。GLC-82细胞蜡块切片HE染色细胞及胞核之Rp、Rn、Gp、Gn、Bp、Bn、gp、gn、bn均高于A549细胞(P<0.05),而A549细胞的rp、rn、bp均高于GLC-82细胞(P<0.01)。结论人肺腺癌细胞株A549和GLC-82细胞蜡块切片HE染色之色度学参数Rp、Rn、Gp、Gn、Bp、Bn、rp、rn、gp、gn、bp、bn差异具有显著性;两者细胞甩片巴氏染色之色度学参数Rp、Rn、Gn、Bp、Bn、rp、rn、gp、gn、bp、bn差异同样具有显著性,这些差异有助于这两株细胞的甄别。

异种MMP-2 DNA疫苗对小鼠结肠腺癌细胞CT26生长及转移的实验研究

目的通过对荷瘤裸小鼠进行异种MMP-2 DNA疫苗治疗结肠腺癌,观察其治疗效果,并初步探讨其作用机制。方法制备纯化异种MMP-2 DNA疫苗,裸鼠腋下注入大鼠CT26结肠腺癌细胞株1×106/只,建立BALB/C裸小鼠结肠腺癌动物模型,待肿瘤长至约1 cm(接种后第16天)开始治疗。异种MMP-2 DNA疫苗治疗组小鼠自荷瘤后次日开始后肢肌肉注射c-MMP-2 DNA疫苗(1 mg/ml),100μl/次,每周一次,连续4周。观察瘤体大小、测量肿瘤重量;免疫组化法测肿瘤组织微血管密度;Tunel法检测各组肿瘤细胞凋亡指数;HE染色观察重要器官组织坏死情况。结果异种MMP-2 DNA疫苗治疗结肠腺癌能明显抑制肿瘤组织的生长,并延长荷瘤小鼠的生存期,免疫组化显示治疗组小鼠的肿瘤组织中微血管密度明显减少;Tunel法显示凋亡指数明显增多;HE染色观察肿瘤组织坏死明显增多。结论异种MMP-2 DNA疫苗治疗能够抑制肿瘤生长、抑制肿瘤血管生成,是一种独特的抗肿瘤治疗途径。

肿瘤标志物联合检测在肺癌分型中的应用价值

目的通过肿瘤标志物联合检测,评价血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)50、CA125、CA153、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平在肺癌分型中的临床价值。方法用化学发光法测定了80例肺癌患者血清CEA、CA50、CA125、CA153、SCCA、CYFRA21-1、ProGRP、NSE水平,探讨了该8项肿瘤标志物在肺癌组织分型中的应用价值。结果小细胞肺癌(SCLC)患者NSE、ProGRP水平分别为(356.7±298.7)pg/mL和(52.03±28.98)μg/L,明显高于非小细胞肺癌(NSCLC)患者的(22.7±11.9)pg/mL和(37.01±18.01)μg/L,而CEA、CA50、CA125、CA153水平明显高于肺鳞癌,NSCLC患者明显高于SCLC患者。SCCA是肺鳞癌较特异的标志物,在判别SCLC与NSCLC类型中,CYFRA21-1是NSCLC最灵敏的肿瘤指标。结论该8项肿瘤标志物联合检测在肺癌组织分型方面可为临床提供有价值的参考资料。

胃腺癌中ROS1基因重排及其临床意义

目的分析ROS1基因重排与胃腺癌临床病理学指标的关系。方法应用荧光原位杂交技术(FISH),检测60例胃腺癌肿瘤组织中ROS1基因的重排;采用siRNA和Real-time PCR检测ROS1重排与胃癌细胞免疫反应的关键分子的关系。结果胃腺癌组织中ROS1基因重排发生率为1.7%(1/60)。ROS1基因高表达与胃肿瘤淋巴结转移呈正相关(P<0.05),但与患者性别、年龄、发生部位、肿瘤直径、Laurén分类、病理分级、HP感染、浸润深度和TNM分期等无关。ROS1阳性表达肿瘤组织中IL-6、TNF-α阳性表达率明显高于ROS1阴性组织。结论 ROS1基因重排可能与炎症因子基因协同发挥促癌作用。

SiewertⅡ、Ⅲ型胃食管结合部癌的临床特点及HER2、SKP2表达

目的：探讨 Siewert Ⅱ、Ⅲ型胃食管结合部癌（AEG）的临床特点及人表皮生长因子受体2（HER2）、细胞S 期激酶相关蛋白2（SKP2）表达变化。方法选取 SiewertⅡ及Ⅲ型 AEG 患者206例，比较二者的临床特点；应用免疫组化方法检测其 HER2、SKP2表达情况，分析 SiewertⅡ、Ⅲ型 AEG 患者 HER2、SKP2阳性表达与临床病理参数的关系。结果两型 AEG 患者肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度和 TNM分期比较有统计学差异（P 均＜0．05）。SiewertⅡ型 AEG 患者 HER2、SKP2阳性表达率分别为32．9％、41．2％，SiewertⅢ型 AEG 患者 HER2、SKP2阳性表达率分别为36．3％、55．4％；两组 SKP2阳性表达率差异有统计学意义（P ＜0．05）。SiewertⅡ或Ⅲ型 AEG 患者中，肿瘤直径＜5 cm 与≥5 cm、浸润深度 T1～T2与 T3～T4、高～中分化与低分化、淋巴结转移 N0～N1与 N2～N3之间 HER2阳性表达率有统计学差异（P 均＜0．05）。结论 HER2、SKP2异常表达可促进 AEG 的发生发展， HER2、SKP2表达检测对 AEG 早期诊断及疗效判断有重要作用。

结直肠腺瘤、腺癌与腰围及腰臀比的关系

目的：研究腰围（WC）、腰臀比（WHR）与结直肠腺瘤、腺癌危险性之间的关系。方法：采用病例对照研究。所有结直肠腺瘤、腺癌的患者均查结肠镜活检病理证实,对照为与病例相同医院的同期就诊,结肠镜结果正常健康人群。观察组与对照组各140例,1∶1匹配。同时对腰围和臀围进行测量。采用多元Logistic回归模型对患者腰围、腰臀比与结直肠腺瘤、腺癌的比值比（OR）及其相应的95%可信区间进行估计。结果：腹型肥胖者（腰围〉85 cm）与正常腰围者（腰围≤85 cm）相比,发生结直肠腺瘤、腺癌的OR=0.98,95%CI：0.91~1.33;与正常体型者（腰臀比〈0.9）相比较,向心性肥胖者（腰臀比≥0.9）与发生结直肠腺瘤、腺癌的危险性增加有关（OR=1.16,95%CI：1.02~1.87,P〈0.05）。结论：向心性肥胖为结直肠腺瘤、腺癌的一个危险因素。

结肠腺癌LYVE-1,ICAM-1及LFA-1的表达与淋巴道转移的关系

目的:探讨癌细胞淋巴管转移机制,观察细胞黏附分子LYVE-1,ICAM-1及LFA-1在结肠腺癌组织及淋巴管的表达．方法:结肠腺癌患者术后组织标本60例,其中淋巴结转移30例,无淋巴结转移30例,运用免疫组织化学的方法检测LYVE-1,ICAM-1及LFA-1在结肠腺癌组织及淋巴管的表达．结果:有淋巴结转移组的结肠腺癌淋巴管数密度(5．05±1．57 vs 3．45±1．84,P<0．01)和吸光度(0．231±0．078 vs 0．196±0．089,P<0．05)均比无淋巴结转移组增加,单个淋巴管的平均面积减少;ICAM-1在淋巴结转移组结肠腺癌的癌细胞中表达上调(0．069±0．036 vs 0．017±0．012,P<0．01),淋巴管不表达;LFA-1在结肠腺癌的血管及转移组部分淋巴管内皮上有表达．结论:LYVE-1,ICAM-1及LFA-1在人结肠腺癌中的表达,可能与淋巴管增生和扩张,促进癌细胞的淋巴转移有关．

端粒酶活性两种检测方法的相关性研究

〔目的〕用TRSP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法测定端粒酶活性并对其特异性、敏感性及相关性进行研究。方法 :以人肺腺癌A5 49细胞为实验材料 ,用RNA酶、加热、倍比稀释的等因素处理A5 49细胞 ,TRAP -银染法对其特异性、敏感性进行检测 ;用 2mmol/LCINN加入A5 49细胞培养体系 ,用两种方法检测诱导分化剂CINN对肿瘤细胞前后端粒酶活性的改变 ,及对其相关性进行分析。结果 :端粒酶活性在A5 49细胞中有很强的特异性 ,且可以检出约 10 2 个肿瘤细胞的端粒酶活性 ;CINN可抑制端粒酶活性并对时间有依赖性 ;TRAP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法作等级相关分析 ,呈正相关 (rs=1.0 0 0 ,P <0 .0 1)。结论 :两种方法测定端粒酶活性有很高的特异性及敏感性且呈正相关。

胃腺癌细胞Gs蛋白α亚单位的表达

目的 了解胃腺癌细胞中岛苷酸结合蛋白 (G蛋白 )亚型Gs蛋白α亚单位的表达 ,探讨其与肿瘤发生发展的关系。方法 采用免疫组织化学SP方法 ,检测Gs蛋白α亚单位在培养的胃腺癌细胞和正常胃粘膜上皮细胞中的表达。结果 与正常胃粘膜上皮细胞比较 ,胃腺癌细胞Gs蛋白α亚单位呈强阳性表达 ,定量分析显示其数值明显增高 ,面密度减小而数密度增大。结论 胃腺癌细胞内信息物质增多 ,信号转导过程增强 ,可能有促进肿瘤细胞增殖。

以肾门淋巴结转移为临床表现的肾乳头状腺癌(附1例报告并文献复习)

目的:探讨肾乳头状腺癌的临床及病理特征。方法:报告1例以肾门淋巴结转移肿大压迫致肾积水为主要临床表现的肾乳头状腺癌的临床资料,CT平扫时肿瘤密度低于肾实质,肾门低密度软组织块影压迫血管及肾盂,导致肾积水;增强后肿瘤强化不明显,肾门淋巴转移融合包块强化不均匀,低于肾实质。行根治性肾切除术,手术顺利。结果:患者术后一般情况良好,切口痊愈出院,目前正进行规范的生物免疫治疗,随访6个月未见进展。结论:肾乳头状腺癌在临床、病理和生物学行为上与其他类型的肾细胞癌不同,应将其作为一种独立的病理类型进行诊断和治疗。其预后较非肾乳头状腺癌要好。

HIF-1α、MMP-9在胃腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨胃腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及意义。方法对在该院进行手术切除63例患者采用免疫组织化学方法检测,分析HIF-1α、MMP-9蛋白在胃腺癌癌区组织、癌旁区组织、手术切缘区及正常组织等各区域的表达及意义。结果 HIF-1α、MMP-9蛋白在胃腺癌组织的阳性率明显高于癌旁区组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);在胃腺癌组织中,随着组织学病理分级的增加与临床分期的进展和淋巴结转移呈正相关,HIF-1α、MMP-9蛋白表达也随着临床分期进展和淋巴转移的转移阳性率逐渐上升,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α、MMP-9蛋白表达具有相关性。结论 HIF-1α可能调控MMP-9的表达,两者联合检测可为胃腺癌的早期诊断、治疗、预后判断提供必要的理论依据。

p16、Ki-67蛋白在大肠腺瘤、腺癌组织中的表达及意义

目的探讨肠道肿瘤中p16和Ki-67的表达及其与预后的关系。方法收集大肠腺瘤16例、腺癌32例(高分化10例,中分化8例,低分化14例),运用免疫组化SP法检测p16和Ki-67的表达情况,实验结果用SPSS11.5进行卡方检验。结果p16在大肠腺癌和腺瘤中的阳性率分别为46.9%和81.3%,两者相比差异有显著性(P<0.05),p16蛋白随着大肠癌恶性程度的增加,表达强度逐渐降低,高分化腺癌与中、低分化组相比差异有显著性(P<0.05),而与淋巴结转移无关(P>0.05);Ki-67增殖指数在腺癌中明显高于腺瘤(P<0.05),且与大肠癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论p16蛋白表达在大肠腺瘤、腺癌的发生、发展过程中可能起了一定的作用,对大肠癌的诊断及评估预后有一定意义;Ki-67增殖指数与肿瘤的恶性度和淋巴结转移有关,可能是判断大肠癌预后的指标之一。

DWI术前评价直肠腺癌侵袭能力的应用价值研究

目的通过分析表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值与直肠腺癌病理学特征之间的相关性,探讨磁共振扩散加权成像(diffusion-weighted imaging,DWI)术前评价直肠腺癌侵袭能力的应用价值。方法收集48例直肠癌患者的影像学资料,所有患者均经肠镜活检证实为直肠腺癌并手术治疗。术前均行MRI常规及DWI检查,并测量肿瘤组织ADC值。分析直肠腺癌不同病理学特征(肿瘤分化程度,T分期,N分期,淋巴结外肿瘤种植,脉管癌栓,直肠系膜筋膜状态、增值指数Ki-67)与ADC值之间的相关性。结果直肠腺癌在不同分化程度、T3期固有肌层外浸润深度及有无结外肿瘤种植的ADC值,差异均有显著统计学意义(P<0.01),而对于不同T分期、N分期、有无脉管癌栓、直肠系膜筋膜状态的ADC值,差异均无统计学意义(P>0.05)。ADC值越低,直肠腺癌分化程度越低,浸润深度越大,越有可能伴有淋巴结转移、脉管癌栓或直肠系膜筋膜阳性。ADC值与T3期固有肌层外浸润深度、增值指数Ki-67均呈负相关(r=-0.577,P=0.001;r=-0.630,P=0.000)。结论 ADC值与直肠腺癌分化程度、T3期固有肌层外浸润深度、结外肿瘤种植及ki67均有一定相关性。ADC值越低,反映了肿瘤的侵袭性越强,预后越差。ADC值有利于对术前评价直肠腺癌侵袭性提供更多的辅助信息。