绞股蓝总皂苷对人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖及凋亡蛋白Caspase-8表达的影响

目的探讨绞股蓝总皂苷(Gyp)体外干预对人肾上腺皮质癌(ACC)SW-13细胞增殖及其含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的Gyp对SW-13细胞增殖的影响;普通显微镜下观察细胞形态学改变;实时荧光定量PCR检测Gyp干预后Caspase-8表达的变化。结果 Gyp对SW-13细胞增殖产生明显地抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;光镜下观察,Gyp干预后SW-13细胞凋亡特征更明显;实时荧光定量PCR结果显示,Gyp干预后SW-13细胞Caspase-8 mRNA表达明显上调(P<0.01)。结论 Gyp可显著抑制人ACC SW-13细胞的增殖,其作用机制可能为通过上调Caspase-8 mRNA的表达来实现。

氯硝柳胺对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖和凋亡的影响

目的研究氯硝柳胺对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移力、侵袭力的影响。方法通过体外培养SW-13细胞,采用CCK8法和i CELLigence实时无标记细胞增殖监测仪检测不同浓度氯硝柳胺对细胞增殖的影响;设对照组和氯硝柳胺组,流式细胞技术检测氯硝柳胺作用后SW-13细胞周期的变化,AO/EB染色法和Annexin V/PI染色流式细胞技术测定细胞凋亡率的变化,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot(WB)法检测β-catenin/LRP6表达的变化。结果不同浓度的氯硝柳胺分别作用SW-13细胞24、48、72、96、120 h后,呈时间和浓度依赖性抑制SW-13细胞增殖(F=157.93,P<0.001);流式细胞仪周期检测结果显示24、48、72 h后,与对照组相比氯硝柳胺组将SW-13细胞周期阻滞在G0/G1期(P=0.001、0.005、0.008);AO/EB染色法和Annexin V/PI染色法结果均显示氯硝柳胺组的凋亡率与对照组相比明显升高(P<0.001);Transwell实验结果示氯硝柳胺组SW-13细胞的侵袭力降低(P<0.001),细胞划痕实验结果显示氯硝柳胺组SW-13细胞的迁移能力下降(P=0.002),WB结果示氯硝柳胺组SW-13细胞β-catenin/LRP6的表达明显降低(P<0.001)。结论氯硝柳胺抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡;可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

姜黄素干预肾上腺皮质癌SW-13细胞的miRNA调控机制

目的 探讨姜黄素干预肾上腺皮质癌SW-13细胞的miRNA调控机制。方法 将肾上腺皮质癌SW-13细胞分为对照组和姜黄素干预组,分别加入基础培养基2 mL、50μmol/L姜黄素溶液2 mL,干预24 h后提取总RNA用于小RNA文库构建和测序。将获得的序列进行miRNA注释和新miRNA预测后,筛选差异性表达的miRNA;对差异性表达的miRNA进行靶基因预测,对靶基因进行功能和通路富集分析。使用实时荧光定量PCR鉴定部分差异性表达miRNA的表达量。结果 共筛选出44个差异性表达的miRNA,包括21个表达上调的miRNA和23个表达下调的miRNA,其中预测有靶基因且有功能的miRNA共9个。功能富集分析结果显示,靶基因主要富集在细胞增殖、细胞迁移、细胞分化和凋亡等生物学过程;通路富集分析结果显示,靶基因主要富集在癌症途径、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、内质网应激信号通路、细胞周期和凋亡途径等。实时荧光定量PCR结果提示,miR-184、miR-490-3p、miR-766-3p、miR-200b-3p、miR-200c-3p和miR-3622a-5p的表达量与小RNA测序数据结果基本一致。结论 姜黄素可能通过miR-184、miR-490-3p、miR-766-3p、miR-200c-3p、miR-3622a-5p等miRNA参与调控癌症途径、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、内质网应激信号通路、细胞周期和凋亡途径等信号通路,以抑制细胞增殖、迁移、分化和凋亡,从而发挥抗肾上腺皮质癌的作用。

ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌细胞中的表达及意义

目的:探讨ABCG2在不同微环境下在肾上腺皮质癌细胞中的表达和意义。方法:利用SW-13细胞株建立体内及体外微环境模型,流式细胞技术检测ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌组织及细胞中的表达情况。结果:ABCG2在裸鼠转移淋巴结中的表达率[(5.41±2.57)%]明显高于标准培养基[(1.04±1.01)%]、干细胞培养基[(2.44±2.30)%]、裸鼠皮下移植瘤[(0.89±1.43)%]及腹腔转移瘤[(3.14±2.42)%]微环境的表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌细胞中的表达有差异,ABCG2为骨髓侧群细胞(side population,SP)特异表型,肾上腺皮质癌组织中可能存在SP细胞。

人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用人肾上腺皮质癌细胞株SW-13细胞接种于裸鼠腋下皮下,记录成瘤潜伏期,观察肿瘤生长情况,并绘制生长曲线,对移植瘤进行组织病理学鉴定。结果采用SW-13细胞皮下接种方式建立移植瘤的模型成瘤百分率为95%,成瘤平均潜伏期为(18±1.2)d,移植瘤体积倍增时间为(10±1.8)d天,移植瘤组织病理学形态与人肾上腺皮质腺癌相似。结论成功建立人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型,为研究其发病机制及诊治方法提供实验依据。

miR-205靶向E2F1对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖影响

目的探讨miR-205对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响及机制。方法采用miR-205模拟物转染肾上腺皮质癌SW-13细胞,设置空白组(未进行转染)、miR-205阴性对照组(转染无义序列)、miR-205模拟物转染组(转染miR-205模拟物),采用CCK-8法检测各组SW-13细胞的增殖,实时定量PCR检测miR-205和E2F1表达,Western blot检测SW-13细胞E2F1蛋白表达,应用生物信息学网站预测E2F1是否为miR-205潜在的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验验证。结果 miR-205过表达抑制SW-13细胞增殖,下调SW-13细胞中E2F1mRNA和蛋白表达水平,生物信息学分析结果显示,E2F1是miR-205的靶基因之一,双荧光素酶实验证实E2F1为miR-205的靶基因。结论 miR-205通过靶向调控E2F1抑制肾上腺皮质癌SW-13细胞的增殖。