蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究

目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;

蚯蚓纤溶酶的成分分析

蚯蚓纤溶酶（ｅａｒｔｈｗｏｒｍｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｓ，ＥＦＥ）是从蚯蚓体内提取的一类纤维蛋白水解酶，是一种新的溶栓药．利用亲和层析技术，自蚯蚓匀浆液一步提取蚯蚓纤溶酶，并对该酶的成分进行了分析．实验表明，蚯蚓纤溶酶是一组非均一的糖蛋白，含糖量为５％左右，以中性已糖为主；等电点（ｐＩ）在４．０以下；富含Ａｓｐ，而Ｍｅｔ、Ｔｒｐ和Ｌｙｓ含量很少；ｌｍｇ蚯蚓纤溶酶相当于２５０～３００尿激酶单位．

蚯蚓纤溶酶的亲和层析纯化及部分性质

用牛血纤溶酶原Separose4B亲和层析方法从蚯蚓粗提物丙酮粉中分离纯化一种纤维蛋白溶解酶。该酶为糖蛋白 ,含糖量约为 1.43 % ,Mr为 30 0 0 0。实验结果表明此酶具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的间接溶解纤维蛋白的双重作用 ,并对人血凝块有明显的溶解作用。 1%PMSF对酶有显著的抑制作用 。

用亲和色谱柱纯化蚯蚓纤溶酶

蚯蚓纤溶成分具有良好的抗栓、溶栓作用，也未见毒副反应。利用亲和柱色谱分离可获得纯度极高的产品，本研究用国产对氨基苯砜乙基交联琼脂代替进口Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，可降低生产成本，是一种较为实际的纯化方法。

赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性

用慈菇蛋白酶抑制剂Sepharose 4B亲和层析方法从蚯蚓丙酮粉抽提液中得到较高纯度和活性的蚯蚓纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)制剂。经快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,内含9个纤溶活性峰。对其中第九峰进行电泳测定,为单一条带,分子量为27000,还测定了其氨基酸组成,糖含量及酶的底物特异性。

双胸蚓纤溶酶的纯化及性质

用硫酸铵分段盐析、超滤膜分级分离及DEAE-纤维素、Sephadex A-25和Sephadex G-50三种柱层析方法从双胸蚓组织的粗提取液中分离纯化出一种纤溶酶,分子量为29kD,由一条肽链组成。此晦具有强烈的溶解纤维蛋白的作用,对家兎实验性血凝块也具有明显的溶解作用。此酶的最适pH为8.0,在pH7.6～8.4之间活力相差不到2％;酶在PH4.7—11.0范围内稳定;酶作用的最适温度为57℃;此酶热稳定性较好,于25～50℃保温3小时,酶活力基本不变,60℃时,活力保留65％。金属离子Na^(+)、K^(+)、Mg^(2+)等可提高此酶的活力,而Hg^(2+)、Ca^(2+)等金属离子对此酶有不同程度的抑制作用。

以壳聚糖为基质对蚯蚓纤溶酶进行亲和层析

蚯蚓纤溶酶(Earthworm fibrinolytic enzymes)有多种同工酶,分离纯化相对比较困难.我们采用壳聚糖作为基质,大豆胰蛋白酶抑制剂为配体,戊二醛为偶联剂,分别研究了酸性和碱性条件下对蚯蚓纤溶酶的纯化效果.实验表明经壳聚糖为载体所制备的亲和吸附剂对蚓激酶具有较高的分离纯化选择性.并且在酸性条件下提取比在碱性条件下提取所得同工酶要少.

从新旧蚯蚓匀浆液中制备蚯蚓纤溶酶组分的比较研究

为探寻从蚯蚓匀浆液中制备蚯蚓纤溶酶(EFE)的简便途径,利用亲和层析的方法,分别从新鲜制备的与多年存放的蚯蚓匀浆液中制备了新、旧蚯蚓纤溶酶(即新、旧EFE)。利用天然电泳、SDS-PAGE纤维蛋白活性电泳分析组分差异,通过纤维蛋白平板比较两者纤溶酶活性,发现蚯蚓匀浆液在存放过程中,EFE的部分组分发生降解,但EFE的比活却升高了1.4倍。

蚯蚓纤溶酶的分离纯化研究

目的从赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)中分离纯化出一种相对分子质量(Mr)较小的纤维蛋白溶解组分--蚯蚓纤溶酶(EFE),为其注射剂的研制开发打下基础.方法采用盐析、透析、凝胶过滤色谱、离子交换色谱等方法分离纯化EFE,用SDS-PAGE对纯化的活性组分进行Mr测定,用酶谱分析方法初步探讨蚯蚓中存在的其它纤溶酶活性组分.结果分离纯化得到了EFE单一组分,经SDS-PAGE EFE呈单一条带,Mr约为25 000.经酶谱分析发现纤溶酶活性组分Mr分布在25000～50 000之间.结论反复使用色谱技术可分离纯化EFE,并得到单一组分.

瓜蒌纤溶酶的分离纯化及性质研究

利用亲和层析从瓜蒌蛋白粗提液中分离纯化得到一纤溶酶,并对其部分酶学性质进行研究。结果表明,该酶表观分子量为66.0kD;最适pH值为9.0;在4～40℃活性无明显变化,78℃以上完全失活;在以酪蛋白为底物的水解反应中,温度、酶底物比、pH值、反应时间4种因素对水解反应的影响力大小为:温度>酶底物比>反应时间>pH;Km值为1.89mg/mL,Vmax=555.56μmol/(L·min)。

一种安全制备活化琼脂糖树脂的方法

溴化氰是常用载体 (树脂 )活化剂 ,但其毒性很强 ,具有挥发性 ,活化后树脂带较强的电荷而导致非特异性吸附 .羰基二咪唑 (1,1′ carboxyl diimidazole,CDI)近年来被用于树脂的活化 ,具有毒性低、相对安全、方便、活化效率高、活化后树脂所带电荷相对较少等优点 .由于国内同行很少采用CDI活化树脂制备亲和层析柱或固定化酶 。

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶,为溶栓药物的研究奠定基础。方法利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶,测定其比活力,并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用,采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分,比活力为89.08 U.mg?1,比纯化前提高了7.37倍,该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基,采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分,且比活力相对提高。