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黄曲霉菌aflR基因启动子序列变异与黄曲霉毒素产生相关联 被引量:12
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作者 陈茹 刘钟滨 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第6期912-916,共5页
为探讨黄曲霉菌aflR基因启动子序列变异与黄曲霉毒素产生的关系,收集黄曲霉菌、米曲霉菌和寄生曲霉菌若干株。在有利于黄曲霉毒素产生的条件下培养后,提取各菌株的总RNA,RT-PCR法检测aflR基因的mRNA表达水平;并应用ELISA法检测各菌株产... 为探讨黄曲霉菌aflR基因启动子序列变异与黄曲霉毒素产生的关系,收集黄曲霉菌、米曲霉菌和寄生曲霉菌若干株。在有利于黄曲霉毒素产生的条件下培养后,提取各菌株的总RNA,RT-PCR法检测aflR基因的mRNA表达水平;并应用ELISA法检测各菌株产生黄曲霉毒素B1的情况。提取各菌株的基因组DNA,PCR扩增aflR基因启动子序列并测序。应用基因分析软件将不产毒素的黄曲霉菌与产毒黄曲霉菌的aflR基因启动子序列进行比较,找出不产毒菌株aflR基因启动子序列的变异位点。ELISA法和RT-PCR法结果表明,产毒的黄曲霉菌菌株均有明显的aflR基因转录,而在2株不产毒的黄曲霉菌菌株中,一株aflR基因无转录,另一株仅有较低水平的转录。序列比较结果表明,不产毒黄曲霉菌菌株的aflR基因启动子序列存在如下共同变异位点:-90、-236、-253、-262、-282位。米曲霉菌产生黄曲霉毒素B1和aflR基因转录的检测均为阴性,并且其aflR基因启动子序列中存在与上述不产毒黄曲霉菌菌株相同的变异位点。寄生曲霉菌产生黄曲霉毒素B1和aflR基因转录的检测均呈阳性,并且其aflR基因启动子序列的上述5个位点与产毒黄曲霉菌完全一致。在不产毒素的黄曲霉菌aflR基因启动子序列中发现了5个共同变异位点,实验结果提示这些变异位点可能与黄曲霉毒素的产生有关。 展开更多
关键词 黄曲霉菌 黄曲霉毒素 aflr基因 启动子 序列变异
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米曲霉菌AFLR基因启动子序列的克隆 被引量:2
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作者 刘钟滨 谢艳辉 刘洋 《上海铁道大学学报》 CAS 2000年第9期4-5,21,共3页
目的 从米曲霉菌中克隆 AFL R基因启动子序列 ,为进一步开展有关研究以深入阐明曲霉菌产生黄曲霉毒素的机制打下基础。方法 应用分子生物学手段从基因文库中克隆目的基因 ,对克隆基因进行了限制性酶谱分析 ,再对启动子序列进行亚克隆... 目的 从米曲霉菌中克隆 AFL R基因启动子序列 ,为进一步开展有关研究以深入阐明曲霉菌产生黄曲霉毒素的机制打下基础。方法 应用分子生物学手段从基因文库中克隆目的基因 ,对克隆基因进行了限制性酶谱分析 ,再对启动子序列进行亚克隆并进行了序列测定。结果 从米曲霉菌 ATCC 14895基因文库中克隆获得含 AFL R基因的 8.3kb DNA片段。对该基因片段进行了限制性酶谱分析并绘制了限制性酶切图谱。根据酶谱分析结果 ,将其中 42 0bp片段亚克隆至 p BS 质粒中 ,获得重组质粒 p AP1.1。结论 序列分析结果表明我们成功地从米曲霉菌中克隆了AFL 展开更多
关键词 黄曲霉菌素 aflr基因 启动子序列 米曲霉菌 克隆
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黄曲霉毒素生物合成途径调节基因aflR
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作者 陈茹 刘钟滨 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期431-434,共4页
黄曲霉毒素生物合成途径调节基因在黄曲霉毒素产生过程中发挥十分重要的作用,它为绝大多数黄曲霉毒素合成相关基因的表达所必需。黄曲霉毒素生物合成途径调节基因的启动子中,含有若干真菌转录因子同源物的假定结合位点。AflR蛋白是黄曲... 黄曲霉毒素生物合成途径调节基因在黄曲霉毒素产生过程中发挥十分重要的作用,它为绝大多数黄曲霉毒素合成相关基因的表达所必需。黄曲霉毒素生物合成途径调节基因的启动子中,含有若干真菌转录因子同源物的假定结合位点。AflR蛋白是黄曲霉毒素生物合成途径中的主要正性转录因子,它调节大多数黄曲霉毒素合成相关基因,也包括其自身基因的表达。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素 黄曲霉毒素生物合成途径调节基因 生物合成 生物合成途径 调节基因 相关基因 转录因子 产生过程 结合位点 启动子
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利用PCR-RFLP方法鉴别黄曲霉毒素产毒菌株 被引量:12
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作者 孙长坡 常晓娇 +1 位作者 伍松陵 沈晗 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期3675-3683,共9页
【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信... 【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasitieus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP方法对产毒菌株区分结果,利用大豆培养基对上述菌株进行发酵培养,并利用HPLC方法测定了菌株产毒能力。【结果】生物信息学分析结果表明黄曲霉毒素可能产生菌株的aflR高度同源,但启动子和结构基因的部分碱基出现了规律性变异,并导致了限制性酶切图谱中的NheⅠ、PvuⅡ和HincⅡ等限制性酶切位点的改变;通过提取各菌株基因组DNA,PCR扩增得到aflR和启动子序列片段,测序得知片段长度分别为798 bp和515bp;PCR-RFLP鉴定结果表明产生黄曲霉毒素菌株的aflR启动子片段经NheⅠ酶切后得到176 bp和339 bp 2个片段,不产毒菌株无该限制性酶切位点;试验进一步对黄曲霉菌和寄生曲霉菌aflR结构基因的分析发现,利用HincⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR的结构基因,可以分别得到3个片段(387、250和161 bp)和2个片段(548、250 bp);利用PvuⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR结构基因,可以分别得到2个片段(652、146 bp)和3个片段(413、239和146 bp);产毒试验表明,米曲霉菌和酱油曲霉菌不产生黄曲霉毒素,PCR-RFLP分析表明不产毒的黄曲霉菌的确丧失了产生黄曲霉毒素的能力;产生黄曲霉毒素各曲霉菌株之间产毒能力差异显著,不但产生的黄曲霉毒素总量高低相差几十倍,其产生的黄曲霉毒素组分也不尽相同。【结论】本研究阐明了在可能产生黄曲霉毒素关键基因aflR序列中存在的差异,通过PCR-RFLP方法快速鉴别黄曲霉菌株产毒与否,并且对黄曲霉和寄生曲霉两种曲霉进行了区分。黄曲霉毒素产生菌株鉴定方法的开发,将为粮油食品安全检测和质量控制,粮食食品生产过程的质量安全控制与监测提供基于分子水平的新型技术。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素 aflr基因 PCR-RFLP 产毒菌株鉴别
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黄曲霉菌株的分离、鉴定及产毒能力分析 被引量:13
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作者 杨生瑞 屈凌波 +3 位作者 孙长坡 沈晗 沈瑾 伍松陵 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第6期110-114,123,共6页
对几株从发霉粮食中分离出的黄曲霉菌菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并进行发酵培养和产毒能力的HPLC测定。结果表明:试验分离菌株均为黄曲霉菌株且含有黄曲霉毒素产生的关键基因aflR;黄曲霉菌株之间产毒能力差异巨大:黄曲霉菌株3.440... 对几株从发霉粮食中分离出的黄曲霉菌菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并进行发酵培养和产毒能力的HPLC测定。结果表明:试验分离菌株均为黄曲霉菌株且含有黄曲霉毒素产生的关键基因aflR;黄曲霉菌株之间产毒能力差异巨大:黄曲霉菌株3.4408产毒量最高,黄曲霉菌株HDWS产毒量最低,黄曲霉菌株3.2572甚至不产生黄曲霉毒素;产生黄曲霉毒素菌株中部分黄曲霉菌株产生4种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2,黄曲霉菌株HDWH只产生黄曲霉毒素AFB1、AFB2。 展开更多
关键词 黄曲霉菌 黄曲霉毒素 aflr基因 高效液相色谱
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食用酱油中曲霉的检测方法 被引量:3
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作者 王建伟 刘昌来 +3 位作者 周艳红 祭芳 徐剑宏 史建荣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期848-852,共5页
为了快速检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染,利用现代分子技术并结合曲霉菌的一些菌落与孢子特征差异,建立了曲霉菌快速检测方法。结果表明,使用黑曲霉钙调蛋白基因所设计的黑曲霉特异性引物,能够将黑曲霉与其他曲霉分离,... 为了快速检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染,利用现代分子技术并结合曲霉菌的一些菌落与孢子特征差异,建立了曲霉菌快速检测方法。结果表明,使用黑曲霉钙调蛋白基因所设计的黑曲霉特异性引物,能够将黑曲霉与其他曲霉分离,黑曲霉中可以扩增出钙调蛋白基因特异性片段,而在米曲霉和黄曲霉中不能扩增到该基因片段。利用aflR等多个已知基因设计特异性引物,扩增结果表明,米曲霉和黄曲霉的菌株并无特异性条带差异。但是,黄曲霉与米曲霉的菌落特征及孢子特征差异显著。由此建立的以PCR检测结合菌株培养特征区分多种曲霉的方法,可以用于检测酱油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素产生菌的污染。 展开更多
关键词 酱油 曲霉 钙调蛋白基因 aflr基因 PCR 菌落特征
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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)野生与养殖群体遗传多样性的比较研究 被引量:5
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作者 黎中宝 雷光高 +4 位作者 常建波 赵斌丽 陈锦 张桂玲 王展林 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期414-418,共5页
采用扩增片段长度多态性技术(AFLP技术)对2个野生和2个养殖的半滑舌鳎群体进行了遗传多样性的比较研究。实验采用8对AFLP引物组合,在四个群体的120个个体中共扩增出498个位点。结果表明,半滑舌鳎养殖群体的遗传多样性降低:河北唐山野生... 采用扩增片段长度多态性技术(AFLP技术)对2个野生和2个养殖的半滑舌鳎群体进行了遗传多样性的比较研究。实验采用8对AFLP引物组合,在四个群体的120个个体中共扩增出498个位点。结果表明,半滑舌鳎养殖群体的遗传多样性降低:河北唐山野生群体和江苏连云港野生群体的多态位点百分数分别为45.18%和39.96%,Nei遗传多样性指数分别为0.1159和0.1059,Shannon多样性指数分别为0.1817和0.1663,平均有效等位基因数分别为1.1884和1.1704;山东海阳养殖群体和福建漳州养殖群体的多态位点百分数分别为37.95%和37.75%,Nei遗传多样性指数分别为0.1046和0.1015,Shannon多样性指数分别为0.1629和0.1587,平均有效等位基因数分别为1.1696和1.1635。半滑舌鳎群体间遗传距离为0.0648—0.0820,平均为0.0725。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 aflr群体 遗传多样性
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有源光纤环脉冲复制器工作特性分析 被引量:2
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作者 杨义 郑铮 +2 位作者 李铮 酆达 陈宇晓 《激光技术》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期228-230,239,共4页
为了研究向全光等效时间采样系统提供被采样一致脉冲序列的技术,讨论了使用有源光纤环脉冲复制器进行脉冲复制的方法。分析了利用环内注入直流光实现对复制器非线性增益与放大自发辐射噪声所导致误差的抑制。通过实验得到了复制器误差... 为了研究向全光等效时间采样系统提供被采样一致脉冲序列的技术,讨论了使用有源光纤环脉冲复制器进行脉冲复制的方法。分析了利用环内注入直流光实现对复制器非线性增益与放大自发辐射噪声所导致误差的抑制。通过实验得到了复制器误差随环内注入直流光的变化趋势、复制器复制稳定性和误差分布的测量结果。结果表明,利用有源光纤环脉冲复制器可以有效地产生被采样等效时间周期脉冲序列。 展开更多
关键词 光电子学 有源光纤环脉冲复制器 脉冲复制 等效时间采样 半导体光放大器
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Peanut aflatoxin contamination and soil Aspergillus flavus isolates in different climate regions 被引量:1
9
作者 Xiaohui DU Xiaowei DENG +4 位作者 Peiwu LI Xiaoxia DING Linxia WU Haiyan ZHOU Yinzhen BAI 《Oil Crop Science》 2016年第1期60-66,共7页
Peanuts are important oil and food sources worldwide and can be easily contaminated by highly toxic aflatoxins (AFs) , which often exist in peanuts and related foodstuff. In this experiment, a total of 12 A. flavu... Peanuts are important oil and food sources worldwide and can be easily contaminated by highly toxic aflatoxins (AFs) , which often exist in peanuts and related foodstuff. In this experiment, a total of 12 A. flavus strains were isolated from soil collected from 7 cities of China and the aflatoxin con-tamination levels in peanuts in these areas were detected to find out the relationship between aflatoxin contamination level and amount of soil isolates in the same region, as well as the correlation between cli-mate type and peanut aflatoxin contamination level. In this study, we found that in high - temperature and moist areas, toxin producing strains were easier to be isolated and the aflatoxin contamination level in peanuts was higher. We also studied the association between the aflR expression determined by fluorogen- ic quantitative PCR and the aflatoxin production. The results showed all 3 atoxigenic isolates had the same cycle threshold 21. 38, suggesting that atoxigenic strains had the same expression of aflR, which was the key gene of aflatoxin production. 展开更多
关键词 peanuts AFLATOXIN aflr Aspergillus flavus
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成都市售辣椒中产黄曲霉毒素菌株的分离及其基因分析
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作者 凌莉 叶正茂 +5 位作者 王溯源 金燕 陈宇航 郑田利 张立实 裴晓方 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期684-687,共4页
目的从成都市售辣椒粉中,分离产黄曲霉毒素的菌株,探究产毒基因aflR、omt-1和ver-1与产黄曲霉毒素B1(AFB1)能力的关系。方法采用传统培养法分离菌株,多重PCR方法筛查潜在产黄曲霉毒素菌株,对潜在产黄曲霉毒素菌株进行产毒培养,以ELISA... 目的从成都市售辣椒粉中,分离产黄曲霉毒素的菌株,探究产毒基因aflR、omt-1和ver-1与产黄曲霉毒素B1(AFB1)能力的关系。方法采用传统培养法分离菌株,多重PCR方法筛查潜在产黄曲霉毒素菌株,对潜在产黄曲霉毒素菌株进行产毒培养,以ELISA方法检测潜在产毒株7d产毒培养液中AFB1含量;同时基于潜在产毒株的产毒关键基因aflR、omt-1和ver-1构建系统进化树,分析其同源性。结果 64份辣椒样品中,分离到17株潜在产AFB1的黄曲霉菌株,有11株分离株产毒,产毒黄曲霉分离率为64.71%;且基于aflR、omt-1和ver-1基因与产毒标准菌株有较高同源性;有6株分离株不产毒,与米曲霉序列有较高同源性。结论控制黄曲霉污染是黄曲霉控制中重要的环节之一。并非含有产毒基因的黄曲霉都会产AFB1毒素,产AFB1能力与产毒基因aflR的序列有着直接联系,而AFB1合成量的高低与omt-1和ver-1基因有关。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 黄曲霉 辣椒粉 同源性分析 aflr Omt-1 Ver-1
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