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海洋细菌Agarivorans sp.HZ105的琼胶降解酶系 被引量:3
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作者 林伯坤 陆国永 +3 位作者 宋燕 谢锐权 陈鸿霖 胡忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期160-166,共7页
通过克隆得到菌株Agarivorans sp.HZ105中3个琼胶酶基因,长度分别为2 988 bp、1 437 bp和1 362 bp,分别编码琼胶酶HZ1、HZ3和HZ4,分别属于糖苷水解酶GH50、GH118和GH16家族。将这些琼胶酶基因与质粒p ET-32(a)构建重组表达载体,转化大... 通过克隆得到菌株Agarivorans sp.HZ105中3个琼胶酶基因,长度分别为2 988 bp、1 437 bp和1 362 bp,分别编码琼胶酶HZ1、HZ3和HZ4,分别属于糖苷水解酶GH50、GH118和GH16家族。将这些琼胶酶基因与质粒p ET-32(a)构建重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了琼胶酶基因的重组原核表达,制备了重组酶,研究了琼胶酶的酶解产物。琼胶酶HZ1降解琼脂糖以及高聚合度新琼寡糖(聚合度为8、10、12和14)得到新琼二糖和新琼四糖;琼胶酶HZ3降解琼脂糖的终产物是高聚合度新琼寡糖;琼胶酶HZ4降解琼脂糖和高聚合度新琼寡糖为新琼四糖和新琼六糖。因此推测菌株HZ105主要先用琼胶酶HZ3和HZ4降解琼脂糖为较高聚合度的新琼寡糖,随后这些寡糖被琼胶酶HZ1和HZ2(课题组先前报道的另一个琼胶酶)降解为低聚合度新琼寡糖。首次研究报道了Agarivorans属中能产生4个琼胶酶的细菌菌株及其琼胶降解酶系,丰富了有关细菌降解琼胶酶体系及其中各琼胶酶作用的研究和认识,也有利于菌株HZ105琼胶酶的有效开发应用。 展开更多
关键词 琼胶酶 基因克隆 agarivorans 酶系 降解产物
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海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质 被引量:4
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作者 修爽 贾馨媛 祖国仁 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期328-331,共4页
以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12... 以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。 展开更多
关键词 琼胶酶 海洋细菌Vibrio agarivorans-1 酶学性质
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4株琼胶降解菌的分离、鉴定及产酶条件分析 被引量:7
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作者 牟宗娟 李贵阳 +2 位作者 茅云翔 孔凡娜 莫照兰 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期13-20,共8页
从海藻及海参中分离筛选得到4株琼胶降解菌HD、JL、QJ和HS,均为革兰氏阴性菌,确定了它们发酵产酶的最佳条件均为:2216E海水培养基、初始Ph 7.5、琼胶底物浓度0.30%、培养温度28℃、培养时间36 h。大部分酶分泌到细菌细胞外。生理生化检... 从海藻及海参中分离筛选得到4株琼胶降解菌HD、JL、QJ和HS,均为革兰氏阴性菌,确定了它们发酵产酶的最佳条件均为:2216E海水培养基、初始Ph 7.5、琼胶底物浓度0.30%、培养温度28℃、培养时间36 h。大部分酶分泌到细菌细胞外。生理生化检测、16SrDNA序列同源性及聚类分析结果表明,HD、JL、HS为白色噬琼胶菌(Agarivorans albus);QJ的16SrDNA序列与Simiduia sp.,糖噬胞菌属(Sac charophagus sp.)和船蛆杆菌(Teredinibacter sp.)的相似性为93%~94%,在进化树上单独形成一个分支,但生理生化特征与它们有所不同,分类地位需要进一步确定。从HD、JL和HS中能克隆到β-琼胶酶基因,它们与其他物种的β-琼胶酶基因序列的相似性为97%~98%。 展开更多
关键词 琼胶降解菌(agarase-producing bacteria) 琼胶酶活力 鉴定 白色噬琼胶菌(Agarivor ansalbus) β-琼胶酶基因
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白色噬琼胶菌QM38 β-琼胶酶基因agaD02的克隆与表达 被引量:6
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作者 王静 马吉飞 +2 位作者 苗婷婷 李兆杰 杜宗军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期6-10,40,共6页
从白色噬琼胶菌(Agarivorans albus)QM38基因组中扩增到一段编码β-琼胶酶的DNA序列,命名为agaD02。序列相似性分析的结果表明,基因agaD02和弧菌Vibrio sp.JT0107及Vibrio sp.PO-303的琼胶酶基因具有同源性,其相似性程度分别为98.7%和97... 从白色噬琼胶菌(Agarivorans albus)QM38基因组中扩增到一段编码β-琼胶酶的DNA序列,命名为agaD02。序列相似性分析的结果表明,基因agaD02和弧菌Vibrio sp.JT0107及Vibrio sp.PO-303的琼胶酶基因具有同源性,其相似性程度分别为98.7%和97.4%,而同GenBank中的其他序列同源性很低。对此基因的序列进行了分析,结果表明,其开放阅读框长度为2 868 bp,编码的蛋白质包含955个氨基酸,在蛋白数据库中的编号为ABM90422,推测其分子质量为106 ku,等电点为4.87。利用网上数据库资源和生物学软件对预测的琼胶酶蛋白序列进行了同源性分析和结构分析。设计两端含酶切位点的特定引物,克隆agaD02基因,构建入表达载体pET24a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),转化后提取质粒进行酶切和电泳验证,转化后的大肠杆菌经诱导可产生胞外琼胶酶。 展开更多
关键词 琼胶酶 白色噬琼胶菌(agarivorans albus) 克隆 序列分析 表达
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新型产琼胶酶海洋细菌的筛选和鉴定 被引量:5
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作者 刘丽莉 祖国仁 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第20期4831-4834,共4页
从大连沿海的50份石花菜中筛选出相对酶活较高的83株产琼胶酶菌株(酶活力测定采用3,5-二硝基水杨酸法),挑选琼胶酶活力最高的菌株并通过形态学特征、生理生化特征及16S r RNA基因序列分析研究其分类地位。结果表明,该菌株(暂命名为ZGR-... 从大连沿海的50份石花菜中筛选出相对酶活较高的83株产琼胶酶菌株(酶活力测定采用3,5-二硝基水杨酸法),挑选琼胶酶活力最高的菌株并通过形态学特征、生理生化特征及16S r RNA基因序列分析研究其分类地位。结果表明,该菌株(暂命名为ZGR-26)为革兰氏阴性杆菌,与食琼胶弧菌(Vibrio agarivorans)序列同源性达到99%,两者生理生化特性基本相符,可初步确定为食琼胶弧菌(Vibrio agarivorans)。筛选得到了新型的产琼胶酶海洋细菌——食琼胶弧菌(Vibrio agarivorans),分泌琼胶酶活力较高(32.1 U/m L),为微生物降解法生产琼胶寡糖提供了新的出发菌株。 展开更多
关键词 琼胶酶 筛选与鉴定 16S RRNA 食琼胶弧菌(Vibrio agarivorans)
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海洋细菌来源β-琼胶酶的生物信息学分析与高效制备 被引量:1
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作者 尤钰娴 解文嫣 +3 位作者 班宵逢 孔昊存 李才明 李兆丰 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期1-12,共12页
为丰富优质琼胶酶品类,充分利用海藻资源,实现功能性琼胶寡糖的高效制备,采用基因组挖矿技术挖掘得到一个来源于海洋细菌——淡黄色噬琼胶菌(Agarivorans gilvus)WH0801的β-琼胶酶(β-AGA酶),利用生物信息学分析对该酶的理化性质和结... 为丰富优质琼胶酶品类,充分利用海藻资源,实现功能性琼胶寡糖的高效制备,采用基因组挖矿技术挖掘得到一个来源于海洋细菌——淡黄色噬琼胶菌(Agarivorans gilvus)WH0801的β-琼胶酶(β-AGA酶),利用生物信息学分析对该酶的理化性质和结构特征进行预测,发现该酶为非分泌性蛋白。在此基础上,采用分子生物学手段引入信号肽,实现了该酶在大肠杆菌(Escherichia coli)中的胞外表达,并通过发酵调控策略优化提高其生产效率。结果表明,采用种龄5 h的种子培养液进行发酵,发酵出发培养基为TB(pH 7.0),碳源为6 g·L^(-1)的果糖,氮源为30 g·L^(-1)的酵母提取液Ⅱ,于25℃培养2 h后加入终浓度为0.025 mmol·L^(-1)的IPTG诱导48 h,此条件下发酵所得酶活为16.72 U·mL^(-1),相比初始酶活提高了约5倍,证明β-AGA酶具有良好的工业应用潜力。 展开更多
关键词 琼胶酶 淡黄色噬琼胶菌 生物信息学分析 异源表达 高效制备
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噬琼胶菌产新琼二糖热稳定琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性 被引量:2
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作者 刘雪 陈艳红 +3 位作者 姜泽东 倪辉 李清彪 朱艳冰 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2021年第5期82-90,共9页
利用PCR从噬琼胶菌AL1中扩增琼胶酶基因,将其克隆至表达载体p ET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;利用薄层色谱和质谱鉴定酶解产物,并测定酶解产物的还原能力和清除DPPH、ABTS+和·OH自由基的能力,分析酶解产物... 利用PCR从噬琼胶菌AL1中扩增琼胶酶基因,将其克隆至表达载体p ET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;利用薄层色谱和质谱鉴定酶解产物,并测定酶解产物的还原能力和清除DPPH、ABTS+和·OH自由基的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。结果表明,来自噬琼胶菌AL1重组琼胶酶的分子质量为105 ku。该琼胶酶能专一地降解琼脂,为β-琼胶酶。重组琼胶酶在50℃和p H 7.0表现出最大酶活力,在50℃以下,p H 5.00~11.00宽p H范围内稳定性良好,说明该重组酶具有良好的热稳定性和p H稳定性。经薄层色谱和质谱鉴定酶解产物为新琼二糖,该酶解产物对·OH、ABTS和DPPH自由基的半数抑制剂量IC50分别为1.28 mg/mL、3.46 mg/mL和9.87 mg/mL,还原能力较强,说明该酶解产物具有良好的抗氧化活性。 展开更多
关键词 噬琼胶菌 重组琼胶酶 酶学性质 酶解产物
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响应面法优化琼胶酶发酵培养基
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作者 修爽 祖国仁 《安徽农业科学》 CAS 2014年第23期7729-7731,共3页
[目的]优化海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶液体发酵培养基的最佳组分。[方法]首先通过单因素试验筛选出3个重要因子(琼脂、NaCl和酵母膏质量浓度),在单因素的基础上,通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法确定了3个因子的最优... [目的]优化海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶液体发酵培养基的最佳组分。[方法]首先通过单因素试验筛选出3个重要因子(琼脂、NaCl和酵母膏质量浓度),在单因素的基础上,通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法确定了3个因子的最优发酵条件。[结果]最佳营养组分为:琼脂粉质量浓度为3.9 g/L,NaCl质量浓度为45.2 g/L,酵母膏质量浓度为12.9 g/L,此条件下酶活力达到7.589 U/g,比优化前提高了3.35倍。[结论]该研究对提高海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶具有重要意义。 展开更多
关键词 海洋细菌Vibrio agarivorans-1 琼胶酶 响应面
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Identification and preliminary characterization of novel B3-type metallo-β-lactamases
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作者 Manfredi Miraula Conor SBrunton +1 位作者 Gerhard Schenk Natasa Mitić 《American Journal of Molecular Biology》 2013年第4期198-203,共6页
Antibiotic resistance has emerged as a major global threat to human health. Among the strategies employed by pathogens to acquire resistance the use of metallo-β-lactamases (MBLs), a family of dinuclear metalloenzyme... Antibiotic resistance has emerged as a major global threat to human health. Among the strategies employed by pathogens to acquire resistance the use of metallo-β-lactamases (MBLs), a family of dinuclear metalloenzymes, is among the most potent. MBLs are subdivided into three groups (i.e. B1, B2 and B3) with most of the virulence factors belonging to the B1 group. The recent discovery of AIM-1, a B3-type MBL, however, has illustrated the potential health threat of this group of MBLs. Here, we employed a bioinformatics approach to identify and characterize novel B3-type MBLs from Novosphingobium pentaromativorans and Simiduia agarivorans. These enzymes may not yet pose a direct risk to human health, but their structures and function may provide important insight into the design and synthesis of a still elusive universal MBL inhibitor. 展开更多
关键词 Antibiotic Resistance β-Lactam Antibiotics Metallo-β-Lactamases Sequence Homology Novosphingobium Pentaromativorans Simiduia agarivorans
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毕赤酵母表达食琼脂火色杆菌褐藻胶裂解酶
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作者 程志钱 程晓峰 +2 位作者 涂红艳 冯青青 程功 《食品科技》 CAS 北大核心 2024年第6期19-25,共7页
选择食琼脂火色杆菌(Flammeovirga agarivorans)的潜在褐藻胶裂解酶基因,对其进行序列优化及全基因合成,在毕赤酵母(Pichia pastoris)中进行分泌表达。摇瓶诱导表达产物的蛋白浓度为0.23 mg/mL。表达的褐藻胶裂解酶最适pH值为9.0,最适... 选择食琼脂火色杆菌(Flammeovirga agarivorans)的潜在褐藻胶裂解酶基因,对其进行序列优化及全基因合成,在毕赤酵母(Pichia pastoris)中进行分泌表达。摇瓶诱导表达产物的蛋白浓度为0.23 mg/mL。表达的褐藻胶裂解酶最适pH值为9.0,最适温度为40℃,在该条件下的酶活力达400.00 U/mL。该酶在40℃及以下时较稳定。底物特异性分析结果显示,该酶对聚甘露糖醛酸及聚古罗糖醛酸均有水解能力,但对聚古罗糖醛酸的水解能力更强。利用该酶水解褐藻酸钠并使用高效液相色谱及质谱方法对产物进行了分析,结果显示,产物主要为聚合度2~4的褐藻寡糖。研究获得的褐藻胶裂解酶可用于褐藻寡糖的酶法规模制备。 展开更多
关键词 食琼脂火色杆菌 褐藻胶裂解酶 毕赤酵母 褐藻寡糖
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