SII、PNI、AGR对溃疡性结肠炎严重程度的预测价值

目的探讨全身免疫炎症指数(systemic immune-inflammation index,SII)、预后营养指数(prognostic nutritional index,PNI)、白蛋白与球蛋白比值(albumin to globulin ratio,AGR)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者中的变化情况,评估其对中-重度UC的预测价值。方法选取2018年9月至2023年3月在徐州医科大学附属医院住院并确诊为UC的患者361例,根据改良Mayo评分分为缓解期组(n=36)、活动期组(n=325)(轻度组80例,中度组206例,重度组39例);根据Mayo内镜评分对肠黏膜病变程度进行评估;肠道病变范围采用蒙特利尔分型分为E1组90例,E2组129例,E3组117例。收集中性粒细胞、淋巴细胞、血小板、白蛋白、AGR、肠镜表现等,计算SII、PNI。分析各炎症-营养指标与UC不同严重程度、Mayo内镜评分及肠道病变范围的关系。结果中-重度组UC患者的SII水平显著高于非中-重度组患者,而PNI、AGR、Alb、BMI水平显著低于非中-重度组患者。随着UC疾病活动度的增加、肠道病变范围的扩大、肠道黏膜炎症的增加,SII显著升高,PNI、AGR显著降低(P<0.001)。Logistic回归分析显示SII、PNI、AGR、Alb是中-重度UC患者的独立影响因素;ROC曲线显示SII、PNI、AGR、Alb及联合指标均对UC严重程度有预测价值,其中联合指标SII+Alb+BMI对中-重度UC的预测价值最高,AUC为0.780(95%CI:0.734~0.822,P<0.001)。结论SII、PNI、AGR对UC严重程度有预测价值,可作为评估UC严重程度的潜在生物标志物。

AGR2在三阴性乳腺癌中免疫调控功能及其潜在的预后价值分析

目的乳腺癌是我国女性最常见、发病率最高的恶性肿瘤,其又以三阴性乳腺癌预后最差、临床治疗较困难。本研究旨在分析三阴性乳腺癌基因表达数据,寻找免疫相关预后有关的三阴性乳腺癌的潜在标志物。方法通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库,分析三阴性乳腺癌和正常组织基因表达数据,筛选差异表达基因及功能并分析其对生存预后的意义。通过GEPIA2(gene expression profiling interactive analysis)数据库对具有预后意义的差异表达基因进一步分析其对乳腺癌分子分型的特异性。对具有预后相关的三阴性乳腺癌特异性基因分析其免疫意义。结果本研究共获得三阴性乳腺癌差异表达基因972个,其中具有预后意义的差异表达基因共27个,其中显著下调基因前梯度蛋白2(anterior gradient 2,AGR2)和显著上调基因S100钙结合蛋白B(S100 calcium binding protein B,S100B)具有三阴性乳腺癌相对特异性,AGR2在三阴性乳腺癌肿瘤免疫微环境中CD8+T细胞数量呈显著正相关(P<0.01),而S100B基因的表达水平与肿瘤微环境免疫细胞B细胞数量呈显著正相关(P<0.05),且AGR2表达水平与免疫检查点PDCD1显著相关(P<0.05)。结论AGR2在三阴性乳腺癌中显著低表达,其可能是三阴性乳腺癌特异性潜在的预后相关免疫标志物。

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.

结肠癌中AGR2和S100A4的表达及临床意义

目的探讨AGR2和S100A4在结肠癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测50例结肠癌组织及其相对应癌旁正常结肠组织中AGR2和S100A4的表达,分析两者在结肠癌中表达的相关性及其临床意义。结果 AGR2和S100A4在结肠癌中的阳性率均明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。AGR2及S100A4在结肠癌中的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05);与患者性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度的差异均无统计学意义(P>0.05)。AGR2与S100A4在结肠癌中表达呈正相关关系(r=0.538,P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线示:AGR2、S100A4均阴性的患者中位生存时间42个月,明显较单独AGR2阳性患者(27个月)、单独S100A4阳性患者(32个月)、AGR2、S100A4均阳性患者(27个月)长,且差异有统计学意义(χ~2=25.378,P<0.001;χ~2=9.533,P=0.002;χ~2=26.331,P<0.001)。结论 AGR2和S100A4在结肠癌中均高表达且关系密切,在结肠癌的发生、发展中起重要作用,联合检测两者有助于指导结肠癌患者术后治疗及预后判定。

茶碱类药物对哮喘小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白表达的影响

目的观察氨茶碱、多索茶碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织中AGR2蛋白和Muc5ac蛋白表达的影响,探讨茶碱类药物在哮喘气道黏液过度分泌中的作用。方法 32只雌性小鼠随机分为哮喘组、正常对照组、氨茶碱组和多索茶碱组,每组8只。免疫组织化学法分别检测4组小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白的表达。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其中白细胞介素(IL)-13的水平。结果哮喘小鼠肺组织中AGR2蛋白(0.544±0.039)和Muc5ac蛋白(0.556±0.045)的表达,较正常对照组(0.388±0.053,0.188±0.086)均明显升高(P<0.01)。多索茶碱组AGR2蛋白(0.491±0.029,P<0.05)和Muc5ac蛋白(0.446±0.044,P<0.01)的表达水平与哮喘组比较明显下降。结论多索茶碱可能通过下调哮喘小鼠AGR2、Muc5ac蛋白的表达,缓解哮喘气道黏液过度分泌。

抗AGR2单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备鼠抗AGR2单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定及其初步应用研究。方法:以AGR2-MBP融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗AGR2的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性。用免疫荧光、免疫沉淀和MTT法对mAb进行初步应用研究。结果:获得1株可持续、稳定分泌抗AGR2的mAb的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-6。Western blot检测显示,在Mr为20000处有1条清晰的带。免疫荧光显示,该mAb可与乳腺癌细胞中的AGR2蛋白结合。免疫沉淀证实该mAb可与天然状态的AGR2有效结合。MTT实验显示该mAb对乳腺癌细胞MCF7的生长有抑制作用。结论:制备出的鼠抗AGR2的mAb效价高、特异性良好,可抑制细胞的生长,有一定的应用价值,为进一步研究AGR2的功能及其在乳腺癌、前列腺癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。

AGR2、Lgr5在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨AGR2和Lgr5在人CRC中表达及其与临床病理特征的关系,评价二者联合检测对CRC诊断的意义。方法采用免疫组化SABC法检测70例CRC组织和20例癌旁正常组织中AGR2和Lgr5的表达情况。结果①CRC组织中AGR2阳性表达率较癌旁正常组织显著性增高(68.57%、25.00%,P﹤0.01)。在CRC组织中,AGR2的阳性表达率与肿瘤分化程度与淋巴结转移呈显著相关(P﹤0.05)。②CRC组织中Lgr5阳性表达率较癌旁正常组织显著性增高(74.29%、40.00%,P﹤0.01)。在CRC组织中,Lgr5的阳性表达率与肿瘤分化程度、浸润深度和淋巴结转移有显著相关性(P﹤0.05)。③联合检测AGR2、Lgr5曲线下面积与单独检测比较,差异有统计学意义(P均﹤0.05)。结论 AGR2、Lgr5在CRC的发生、发展过程中发挥了重要作用,两者联合检测有助于对CRC患者肿瘤进展的判断,为CRC患者的分子诊断和治疗提供了理论支持。

AGR2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨AGR2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义。方法利用Real-time RT-PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法检测AGR2在不同的细胞系以及前列腺癌组织中的表达。结果 AGR2的表达与前列腺癌的进展呈正相关。结论 AGR2蛋白可作为前列腺癌进展诊断的候选分子标志物。

前列腺癌中AGR2蛋白的表达及临床意义

目的探讨AGR2在前列腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测AGR2和AR在61例前列腺癌和33例良性前列腺增生症中的表达状况。结果 AGR2在前列腺癌中阳性率为68.9%,其在前列腺增生症中的阳性率为36.4%,两组中的差异有显著性(P<0.01)。前列腺癌中AGR2和AR的表达呈正相关(r=0.323,P=0.011)。AGR2与患者的临床分期、年龄、Gleason分级及术前患者血清的PSA及cPSA水平均无相关性(P>0.05)。结论 AGR2可能与前列腺癌的发生有关,该蛋白的表达可能受AR调控。

二亚硝基哌嗪上调AGR2促进鼻咽癌细胞转移

目的：探讨二亚硝基哌嗪（DNP）通过调控AGR2表达参与鼻咽癌转移的分子机制。方法：以具有低转移潜能的鼻咽癌细胞6-10B作为研究材科,应用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度;分别采用间接免疫荧光法、Western blot和实时荧光定量PCR法检测DNP对6-10B细胞中AGR2蛋白及m RNA表达的影响;采用针对AGR2基因的特异性小干扰RNA（si RNA）沉默6-10B细胞AGR2的表达,并用Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果：MTT法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度为0-10.0μmol/L;8.0μmol/L DNP处理6-10B细胞后,间接免疫荧光法检测发现AGR2蛋白表达明显上调,且以在细胞质中表达为主;不同浓度的DNP处理6-10B细胞24 h或用8.0μmol/L的DNP处理6-10B细胞不同时间后,Western blot结果发现AGR2蛋白的表达水平增加且呈浓度和时间依赖性（P〈0.05）;siRNA-AGR2沉默6-10B细胞屮AGR2基因的表达后,DNP诱导6-10B细胞的侵袭及迁移能力较干扰前明显降低（P〈0.05）。结论：DNP可能通过在转录水平上调AGR2的表达,影响鼻咽癌细胞的侵袭和转移能力。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及agr基因分型调查

目的了解我院金黄色葡萄球菌的临床分布、耐药性变迁及agr基因分型。方法我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤法进行药敏试验和结果判断;采用多重PCR法进行agr基因分型测定。结果 2015年10月至2017年3月分离的183株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要来源于24个科室,感染标本来源主要是分泌物、深部痰及非开放性脓液标本,药敏试验提示万古霉素、利奈唑胺、替加环素、复方新诺明、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌敏感率分别为100%、100%、100%、83.06%、62.29%、57.38%、55.19%、53.0%和12.57%;agr基因分型以Ⅰ型为主,其次为Ⅱ型、Ⅲ型。结论我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌于全院均匀分布,对红霉素耐药率较高,未发现对万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药株。

新型药物靶点agr群体感应系统的研究进展及其应用

病原菌能够引起人类疾病,引起疾病的原因是因为其具有毒力因子和致病力。为了感染宿主引起疾病,致病菌要针对宿主信号,准确调控毒力基因的表达。在病原菌中存在复杂的调节致病因子分泌的机制,附属基因agr系统是金黄色葡萄球菌中研究最多的毒力响应调节因子。综述了金黄色葡萄球菌agr系统的最新研究进展,并阐述了其在新型抗菌药物开发中的应用前景。

重复序列致agrC突变对金黄色葡萄球菌致病性的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金葡菌附属调节基因agr扩增并测序,分析菌株毒力变异的机制,并进一步通过qRT-PCR检测XQ株agr调控的毒力因子变化情况。结果动物毒力实验证实XQ株的毒力较对照菌ATCC25923强,体外传代培养后,XQ株第180代菌株（XQ180）的毒力明显下降,SDS-PAGE分析发现毒力下降的XQ株（XQM株）培养上清的蛋白表达谱较XQ株有明显改变,对金葡菌agr基因进行测序分析发现XQM株的agr C基因第443位有一段188 bp的序列插入,而该插入序列就是agr C基因255~442间序列,正是该188 bp重复序列导致Agr C蛋白的截短型突变,引起新桥株的致病性降低,qRT-PCR检测结果证实XQM株中受agr调控的毒力基因表达水平显著下降。结论临床分离的金葡菌XQ株毒力强,在体外传代中易发生毒力变异,这种变异与重复序列导致的agr C突变有关。

细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药关系及机制研究

目的:探讨细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。方法:用不同浓度顺铂(6、12、18、24μg/mL)处理细胞,筛选出大鼠卵巢癌耐药细胞株,MTT法检测细胞存活率。用超速差速离心法获得外泌体蛋白,纳米流式检测外泌体蛋白的粒径大小及颗粒浓度。通过qRT-PCR技术比较两组细胞系AGR2相关mRNA的转录情况,并通过Western blot实验对外泌体中AGR2蛋白表达水平进行比较,分析细胞外泌体中蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。结果:NUTU-19肿瘤细胞生存率与化疗药浓度呈负相关;药物浓度的升高与耐药细胞株(NUTU-19R)死亡率相关性不明显。NUTU-19R细胞株AGR2相关mRNA表达水平高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05);NUTU-19R细胞株AGR2蛋白表达高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞外泌体蛋白AGR2高表达促进了上皮性卵巢癌获得性耐药的形成。

IL-13对小鼠AGR2表达的影响及其在哮喘气道黏液过度分泌中的作用

目的研究白细胞介素-13(IL-13)对AGR2mRNA和蛋白在哮喘小鼠肺组织中表达的影响,探讨AGR2在哮喘气道黏液过度分泌中的作用。方法 18只雌性小鼠随机分为哮喘组、对照组和IL-13组,IL-13组于26d-28d激发前经鼻滴入100μg重组小鼠IL-13。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计嗜酸性细胞分类计数。Real time-PCR方法检测肺组织AGR2mRNA表达。免疫组化法分别检测AGR2蛋白和Muc5ac蛋白在小鼠肺组织的表达。结果哮喘组BALF中嗜酸性细胞分类计数(19.1±6.34)%较正常组(0.28±0.29)%明显增多(P<0.01);IL-13组BALF中嗜酸性细胞分类计数(30.05±9.32)%较哮喘组明显升高(P<0.01)。IL-13组小鼠肺组织中AGR2mRNA(1.702±0.046)和蛋白(0.617±0.028)的表达较哮喘组(1.52±0.071,P<0.01;0.505±0.078,P<0.05)升高,IL-13组AGR2mRNA与Muc5ac蛋白的表达水平呈直线正相关(r=0.862,P<0.05);AGR2蛋白与Muc5ac蛋白水平呈直线正相关(r=0.847,P<0.05)。结论 AGR2可能参与了哮喘气道黏液过度分泌发病机制,IL-13可通过上调其表达,进一步促进黏蛋白Muc5ac表达。

新磷氮霉素A生产菌Streptomyces auratus AGR0001的遗传操作研究

目的建立新磷氮霉素A产生菌金黄色链霉菌AGR0001(Streptomyces auratus AGR0001)的遗传操作体系,为阐明其生物合成的调控和后修饰机制,并通过遗传改造提高其产量和获得更多的新化合物奠定基础,同时可为其它链霉菌的遗传操作研究提供新的参考。方法筛选了S.auratus AGR0001生长、产孢的最佳培养基,检测了其对11种不同抗生素的敏感性,探索了将外源DNA导入该菌的最适方法。结果 ISP4和MS培养基分别是S.auratus AGR0001的最佳产孢和生长培养基;该菌对壮观霉素等7种抗生素敏感,对氨苄和羧苄西林具有抗性,对萘啶酮酸和阿伯拉霉素在低浓度有抗性,而在高浓度敏感;使用PEG介导的原生质体转化、电转菌丝体、接合转移等方法均能将外源DNA导入S.auratus AGR0001中。利用接合转移将携带透明颤菌血红蛋白基因vhb(Vitreoscilla hemoglobin)的自杀型质粒p SET152导入S.auratus AGR0001中并整合至其染色体上进行表达,提高了发酵液的抗真菌活性。结论建立了S.auratus AGR0001的遗传操作体系。

AGR元模型到组织抽象模型的建模方法

将目标驱动思想引入AGR中,提出一种从AGR元模型到多Agent系统(MAS)组织抽象模型的建模方法。对AGR进行综述,给出该方法的具体步骤和形式化过程。应用于某智能故障诊断系统的结果表明,该建模方法有利于设计人员直接利用AGR元模型构建MAS组织抽象模型,可适用于各种AGR扩展。

稳定干扰AGR2乳腺癌细胞系的建立及其功能

将AGR2基因的shRNA表达序列连接到pSUPER质粒中,获得pSUPER-shAGR2质粒,经测序鉴定后,将pSUPER-shAGR2和pSUPER质粒通过Lipofectamine2000转染MCF7细胞,经流式细胞仪和600μg.mL-1G418筛选获得稳定干扰AGR2的MCF7细胞系和对照细胞系,Western blot检测其RNA干扰效果,MTT检测细胞生长情况;用无血清酚红培养基饥饿12 h后,25 ng.mL-1EGF处理15 min,Western blot检测ERK活化和PARP水平。测序结果证实AGR2shRNA核苷酸链序列插入正确,RNA干扰能有效降低MCF7细胞中AGR2的蛋白表达水平;稳定干扰AGR2的MCF7细胞系,细胞生长缓慢,ERK活化水平显著降低,而凋亡核心蛋白PARP也明显上调。稳定干扰AGR2的MCF7细胞系成功建立,发现RNA干扰AGR2抑制其生长和促进其凋亡,为AGR2作为乳腺癌预后与治疗研究靶点提供更充分的理论依据。

人源化AGR2单抗在不同宿主细胞中表达的比较

Anterior gradient-2(AGR2)基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞与CHO细胞这两种最常用的表达系统表达rhAGR2-mAb,获得了纯度为95%的抗体蛋白,同时比较了不同宿主细胞生产的蛋白在分子量、等电点、糖型等方面的差异,发现在分子量、等电点和糖基化的糖型种类方面,两种宿主细胞表达的rhAGR2-mAb并无明显差异,但两者表达的产物在糖型比例上有较大不同,这也导致了两种表达系统所表达的蛋白与抗原AGR2的亲和力略有不同,为rhAGR2-mAb将来选择合适的蛋白瞬时表达系统和稳定生产系统提供依据.

牛源MRSA新疆流行株毒力基因检测及Agr分子分型研究

为了解新疆地区引起奶牛乳房炎和子宫内膜炎的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的分子特征及毒力基因分布状况,对采集的221份样品进行金黄色葡萄球菌的分离,采用生化试验和分子生物学方法进行了鉴定,通过药敏试验对MRSA进行判定;应用多重PCR方法对MRSA新疆流行株进行Agr基因分型研究,并检测了MRSA流行株的部分毒力基因。结果表明,在新疆地区71株金黄色葡萄球菌临床分离株中共检出13株MRSA,检出率为18.3%;13株MRSA检出hld、luk ED和tst这3种毒力基因,其中3株检出hld,10株检出luk ED,13株检出tst;不同地区来源的13株MRSA均检出AgrⅠ和AgrⅣ2种Agr型。本研究表明新疆地区MRSA流行株的毒力基因以luk ED和tst为主,Agr分型以AgrⅠ和AgrⅣ基因型为主。