大肠杆菌中表达外源重组蛋白的研究

通过聚合酶链式反应(PCR),扩增出交链孢菌激活蛋白辅助蛋白基因p42A,并将该基因按正确阅读框克隆到表达载体pGEX-KG中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌BL21,通过建立重组菌生长时间与OD600值的关系,及对菌液密度、诱导剂浓度、诱导时间和温度等条件的摸索,根据SDS-PAGE电泳检测结果判断融合蛋白的最佳表达条件。实验结果表明,最适诱导时期为重组菌生长对数中期;IPTG的最佳浓度为1.0mmol/L;37℃下诱导培养4h时产物表达量最高。超声波破碎菌体细胞,离心及电泳结果表明,表达产物为可溶性蛋白。