微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性研究

目的评价微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的可行性。方法用微孔板Alamar Blue显色法对41株和70株结核分枝杆菌临床分离株分别检测利福平和异烟肼的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定利福平和异烟肼的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏比例法进行比较。结果微孔板Alamar Blue显色法获得结果平均时间为8d,利福平和异烟肼的最佳耐药阈值均为0.5μg/mL,以罗氏比例法为金标准,利福平的灵敏度和特异度均为100.0%,异烟肼的灵敏度和特异度分别为96.6%和100.0%。结论微孔板Alamar Blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的快速检测。

Alamar blue法检测药物细胞内抗结核活性的研究

目的建立基于Alamar blue法检测的巨噬细胞模型,应用于氯苯吩嗪衍生物细胞内抗结核活性的测定。方法以不同菌量/细胞比例感染巨噬细胞不同时间,阳性药INH、RFP、EMB与感染细胞作用不同时间,CFU计数测定细胞内菌量,考察最适感染复数、感染时间与药物作用时间。以比色法测定一些常用抗生素对感染细胞内菌量的影响,并与CFU计数结果比较,考察比色法的准确性、特异性,并应用比色法测定氯苯吩嗪衍生物的细胞内抗结核活性。结果最适感染复数为10:1,感染4h为宜,药物作用时间为3d。比色法与CFU计数测定药物细胞内抗菌活性的结果一致。所测的吩嗪类化合物显示出良好的细胞内抗菌活性。结论建立了Alamar blue比色法巨噬细胞筛选模型,可对细胞内药物抗结核活性作出快速、客观的评价。

Alamar Blue法用于体外培养细胞活性检测的方法研究

目的 在比较Alamar Blue法与MTT法的基础上探讨Alamar Blue法用于测定细胞体外增殖及细胞毒实验的可行性。方法 采用Alamar Blue法及MTT法分别测定人肝癌细胞株SMMC-7721的体外增殖以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、顺铂、羟基喜树碱对该细胞株体外增殖的影响。结果 使用Alamar Blue法，接种人肝癌SMMC-7721细胞数在3．12×10^2-2×10^3／孔范围内时，细胞数与Alamar Blue还原率呈线性相关（r=0．9989），高、中、低三种细胞浓度组内差异分别为1．41％、3．88％、4．87％。使用MTT法接种人肝癌SMMC-7721细胞数在3．12×10^2-2×10^4／孔范围内时，细胞数与OD490-620值呈线性相关（r=0．9981），高、中、低三种细胞浓度组内差异分别为1．44％、4．07％、8．27％。结论 Alamar Blue法是一种简便、敏感、安全、经济的方法，可用于体外测定细胞增殖及化疗或免疫制剂的细胞毒作用。

微孔板Alamar blue显色法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的研究

目的评价微孔板Alamar blue显色法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的可行性。方法用微孔板Alamar blue显色法对78株结核分枝杆菌检测氧氟沙星的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定氧氟沙星的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏培养基比例法进行比较。结果微孔板Alamar blue显色法获得结果平均时间为8d,氧氟沙星的最佳耐药阈值为2μg/mL,以罗氏培养基比例法为金标准,氧氟沙星的灵敏度和特异度分别为88.6%和94.1%。结论微孔板Alamar blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的快速检测。

Alamar Blue-B13细胞株生物法测定IL-5水平

目的 探讨应用Alamar Blue测定细胞因子IL-5的方法。方法 将依赖IL-5的B13细胞加到细胞培养板上,加入系列稀释的待测样品IL-5/CHO细胞培养上清,孵育4d后加入Alamar Blue,继续孵育6h测定每孔A值(A_(570)-A_(600))。结果 随着样品中IL-5浓度的升高,B13细胞增殖程度增加,A值增大。敏感性较生物素ELISA法提高12～15倍。结论 AlamarBlue-B13细胞株生物法是一种测定IL-5的可行的、无放射性污染的、敏感的方法。

CCK-8法与Alamar blue法对RKO细胞株增殖活力测试条件的对比分析

目的以RKO细胞株为增殖活力测试的研究对象，比较CCK-8法与Alamarblue法在检测中波长、孵育时间、细胞密度等方面的差异性。方法取体外培养对数生长期的RKO细胞株，分别比较两者在不同检测波长（380、430、480、530、580、630nm）、不同孵育时间（1、2、3、4、5、6h）、不同细胞密度（2×10^4、5×10^3、1．25×10^3CUF·mL^-1）下所测的光密度值（OD值），并比较两者在相同条件下同-标本重复检测时的平衡性。结果ALamarblue法在不同细胞密度中的最佳检测波长皆为580nm，而CCK-8法的最佳检测波长会随着细胞密度的变化而有所改变；1—6h时，CCK-8法适合的孵育时间在1h以后，Alamarblue为2h以后，且CCK-8法的灵敏度、平衡性都强于Alamarblue法。结论CCK-8法在细胞增殖活力检测中的灵敏性、平衡性、快捷性等都略强于ALamarblue法。

利用实时细胞分析法和Alamar Blue法测定雾霾细颗粒物对呼吸系统的细胞毒性

目的利用实时细胞分析(real time cell analyze,RTCA)法及Alamar Blue法测定雾霾细颗粒物对于人支气管上皮细胞(BEAS-2B)和人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的毒性作用,比较两种方法检测雾霾细颗粒物对呼吸系统影响的差异。方法分别将BEAS-2B及MRC-5细胞接种于RTCA配套16孔板及普通96孔板。接种24 h后,分别用终浓度为2500、1250、625、312.5、156.25和78.125μg/m L的雾霾细颗粒物进行染毒。选择3、12、24、36和48 h通过RTCA法及Alamar Blue法两种方法进行测定,计算IC_(50)。采用SPSS 16.0,利用配对t检验,对两种方法所得IC_(50)进行统计分析,并分析其相关性。结果雾霾细颗粒物作用于两种细胞后分别利用RTCA法及Alamar Blue法测得的IC50具有相关性,但差异无统计学意义。结论雾霾细颗粒物对于呼吸系统细胞有毒性,RTCA法可以应用于雾霾细颗粒物体外毒性检测。

实时细胞分析技术与Alamar Blue法用于测定纳米氧化铜细胞毒性的比较研究

目的通过比较研究实时细胞分析技术(real time cell analyze,RTCA)及Alamar Blue法测定纳米氧化铜体外作用于人胚肺成纤维细胞MRC-5及人正常肺上皮细胞BEAS-2B的毒性作用,探讨RTCA实时细胞分析技术用于测定纳米材料体外细胞毒性的可行性。方法分别将MRC-5及BEAS-2B细胞接种于RTCA配套16孔板中及普通96孔板中,96孔板中细胞用于Alamar Blue法测定细胞毒性。分别用剂量为0.75g/L、0.38g/L、0.19g/L、0.094g/L、0.047g/L的纳米氧化铜混悬液进行染毒。选择12h、24h、36h、48h、60h时间点计算两种方法测得的IC50值。采用SPSS 16.0分析软件,利用配对t检验,对两种方法所得相同时间点的IC50值进行统计分析,判断其相关性及是否存在差异。结果 MRC-5细胞用RTCA法测定染毒后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的IC50值分别为391 mg/L、249 mg/L、185 mg/L、165mg/L、147mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为507 mg/L、206 mg/L、172 mg/L、154mg/L、95.2mg/L。两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义。BEAS-2B细胞用RTCA法测定染毒后12h、24h、36h、48h、60h的IC50值分别为131 mg/L、83.78 mg/L、65.37 mg/L、53.98mg/L、51.23 mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为148 mg/L、104 mg/L、77.3mg/L、42.5mg/L、39.2mg/L。两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义。结论RTCA实时监测法与Alamar Blue法在相同时间点测定纳米氧化铜体外细胞毒性得IC50值差异无统计学意义,说明RTCA实时监测法测定体外细胞毒性结果可靠,适用于纳米材料的体外毒性研究。

应用Alamarblue法检测TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用

目的:神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞对TRAIL的杀伤效应不敏感与其Caspase 8表达的缺失有关。本研究中我们用γ-干扰素(Interferonγ,IFNγ)诱导NB细胞株CHP212和SH-SY5Y(SY5Y)Caspase 8表达,观察表达Caspase 8的NB细胞是否对TRAIL的细胞毒作用敏感,从而探讨Alamar blue法用于测定细胞体外增殖及细胞毒实验的可行性。方法:应用Western-blot方法检测IFNγ作用前后NB细胞Caspase 8蛋白的表达;应用Alamar blue还原率测定IFNγ、TRAIL、IFNγ+TRAIL、Caspase 8抑制剂+TRAIL对NB细胞生长的影响。结果:对TRAIL敏感的CHP212细胞表达Caspase 8且经IFNγ处理后Caspase 8表达水平逐步增加;对TRAIL不敏感的SY5Y细胞不表达Caspase 8,IFNγ作用后其Caspase 8蛋白表达明显增加。CHP212细胞还原率随TRAIL浓度的增加和作用时间的延长而降低,各实验组与对照组比较有显著差别(P<0.05)。SY5Y对TRAIL耐药,而IFNγ+TRAIL组的SY5Y细胞还原率与单独用IFNγ或TRAIL组比较,显著降低(P<0.01)。结论:Alamar blue还原率测定结果表明CHP212细胞对TRAIL的细胞毒作用敏感,存在时间和剂量依赖性;经IFNγ诱导表达Caspase 8的SY5Y细胞对TRAIL的细胞毒作用亦敏感。本研究结果证实Alamar blue法是一种简便、敏感、安全的方法,可用于体外测定细胞增殖及化疗药的细胞毒作用。

应用Alamarblue检测细胞内药物抗结核分枝杆菌活性的研究

目的建立基于Alamarblue检测的结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型，应用于氯苯吩嗪衍生物细胞内抗结核活性的测定，为新药筛选提供参数和依据。方法以不同菌量／细胞比例感染巨噬细胞不同时间，阳性药INH、RFP、EMB与感染细胞作用不同时间，CFU计数测定细胞内菌量，考察最适感染复数、感染时间与药物作用时间。以Alamarblue比色法测定一些常用抗结核药对感染细胞内菌量的影响，并与CFU计数测定结果比较，考察比色法的准确性与特异性，并以比色法测定氯苯吩嗪衍生物的细胞内抗结核活性，探讨其在新药筛选中的应用。结果最适感染复数为10：1，感染4h为宜，药物作用时问为3d。比色法与CFU计数测定药物细胞内抗菌活性的结果一致。所测的吩嗪类化合物显示出良好的细胞内抗菌活性。结论建立了Alamarblue比色法巨噬细胞筛选模型，可对细胞内药物抗结核活性作出快速、客观的评价。

应用AlamarBlue和MTT法测定抗结核药物最低抑菌浓度的研究

目的建立并评价微孔板AlamarBlue和MTT分析法用于抗结核分枝杆菌药物最低抑菌浓度（MlC）的测定。方法应用AlamarB1ue和MTr显色法将12种抗结核药物对结核分枝杆菌H37Rv‰的最低抑菌浓度分别进行测定，并与传统的试管二倍稀释法进行比较。结果AlamarBlue和MTr试验分别在6天和8天报告结果，Alamarblue法与试管法相比较，完全符合率是91．7％（11/12）：MTT法与试管法相比较完全符合率是75％（9／12），具有较好的一致性。结论AlamarBlue和MTT方法测定药物对结核分枝杆菌的MIC具有快速、操作简便等特点，适用于新抗结核化合物的大量快速筛选。

一种水产迟钝爱德华氏菌快速药敏检测方法的研究

为了建立一种可以应用于水产养殖现场的药敏快速检测方法,以迟钝爱德华氏菌JF-1为试验菌株,在MHB培养基基础上通过添加鱼肉蛋白胨及调节无机盐离子浓度,优选了迟钝爱德华氏菌的增菌液,在此基础上利用阿尔玛蓝作为细菌生长指示剂,选择11种水产常见药物并设置了8个倍比稀释的质量浓度梯度,制备了迟钝爱德华氏菌快速药敏检测微孔板,板内设有药敏检测区、生长对照区及空白对照区。经显色法及分光光度法药敏检测试验结果比对,选定1×105个/mL菌液密度作为快速药敏检测的接菌密度,将该密度菌液接种于制备的快速药敏检测微孔板进行药敏检测,同时以分光光度法及试管稀释法检测结果作为比对,结果显示在接种12h后,显色法测定的所有药物对菌株JF-1的最小抑菌质量浓度与分光光度法完全吻合,但与接种24h后观察的稀释法在氨苄青霉素和复方新诺明两种药物的最小抑菌质量浓度上存在微小偏差。试验结果显示,本研究建立的迟钝爱德华氏菌快速药敏检测方法能够快速、简便、准确地对该菌进行药敏检测。

香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞活力的影响及抗氧化物质的干预作用

目的 了解香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞活力的影响 ,并探讨多种抗氧化物质的干预作用。方法以PBS作吸收液 ,用大包氏管收集香烟主流烟气 ,分别以 0、1× 10 - 3、2× 10 - 3、4× 10 - 3、8× 10 - 3、12× 10 - 3和16× 10 - 3支 毫升的香烟烟气溶液 (CSS)作用于大鼠淋巴细胞 ,2小时后加入AlamarBlue ,以其还原率评价细胞的活力。选择中作用剂量 8× 10 - 3支 毫升的香烟烟气溶液处理细胞 ,之前用维生素C(VC)、维生素E(VE)、谷胱甘肽 (GSH)、褪黑素 (MLT)、二甲基亚砜 (DMSO)等抗氧化物质预处理 ,检测细胞的AlamarBlue还原率。结果 2× 10 - 3～ 16× 10 - 3支 毫升各组AlamarBlue还原率均显著低于对照组 ,且随CSS浓度的增高而下降。 0 0 5mmol LVC、0 2mmol LVE、0 1mmol LMLT、1mmol LGSH、1%DMSO均能显著增加CSS染毒组细胞的AlamarBlue还原率。结论 CSS能使大鼠淋巴细胞活力下降 ,VC、VE、MLT、GSH、DMSO等抗氧化物质能拮抗这种损伤作用。

控释性可注射牙槽骨修复材料聚磷酸酯的体外细胞毒性研究

目的：研究控释性可注射牙槽骨修复材料聚磷酸酯交联物的体外细胞毒性。方法：用细胞培养液浸提聚磷酸酯24h,配置不同浓度的聚磷酸酯浸提液（0.1-100mg/mL）,将小鼠成纤维细胞（L-929）在不同浓度的聚磷酸酯浸提液中分别培养24h,通过MTT比色法和Alamar Blue比色法,检测聚磷酸酯对L-929细胞相对增值率的影响,评价其细胞毒性。结果：两种测定方法均呈现高的细胞增值率,各浓度聚磷酸酯交联物浸提液之间差异无显著性意义（P〉0.05）,其细胞毒性为0-1级。结论：高分子交联聚合物聚磷酸酯无明显的细胞毒性,具有较好的生物相容性。

天南星果实对4株人白血病细胞株的体外抑瘤作用研究

目的观察天南星果实提取物对体外培养4株人白血病细胞生长的抑制作用,探讨天南星果实提取物对人白血病细胞的体外抗肿瘤活性。方法采用Alamar Blue法观察天南星果实提取物对4株人白血病细胞的生长抑制作用。结果果实总醇提取物对K562、HL-60、Raji、Jurkat细胞增殖均具有抑制作用,果实石油醚部分对K562、Raji、Jurkat细胞增殖具有抑制作用,果实乙酸乙酯、水部分对K562、HL-60、Jurkat细胞增殖具有抑制作用。结论天南星果实的提取物中具有抑制肿瘤生长的活性物质,值得进一步研究。

微孔板阿尔玛蓝显色法检测速生长分枝杆菌药物敏感性

目的建立微孔板阿尔玛蓝显色法检测速分枝杆菌药物敏感性的方法,评价其临床检测效能。方法用GenoType Mycobacterium CM分枝杆菌菌种鉴定系统和测序法筛选20株龟分枝杆菌临床株、16株脓肿分枝杆菌临床株作为实验株,阿尔玛显色法检测龟、脓肿分枝杆菌对阿米卡星、头孢西丁、环丙沙星、克拉霉素、多西环素、亚胺培南、利奈唑胺、磺胺甲恶唑和妥布霉素9种抗生素的最低抑菌浓度,以微量肉汤稀释法为标准评价符合率和MIC结果解释的一致率。结果微孔板阿尔玛蓝显色法检测9种抗生素的MIC值分布与微量肉汤稀释法MIC值符合率分别为100%(阿米卡星、环丙沙星、利奈唑胺)、97.2%(头孢西丁、克拉霉素、多西环素、妥布霉素)、94.4%(亚胺培南)和88.9%(磺胺甲恶唑)(±1log2范围内);MIC结果解释一致率头孢西丁和利奈唑胺为94.4%,妥布霉素和磺胺甲恶唑为97.2%,其余5种药物药敏结果解释均完全一致。结论微孔板阿尔玛蓝显色法是一种简便、易于判读、准确的MIC测定方法,可用于速生长分枝杆菌临床分离株的快速药敏测试。

In Vitro Cytotoxicity of Polyphosphoester as a Novel Injectable Alveolar Replacement Material

The aim of this study was to investigate the in vitro cytotoxicity of polyphosphoester polymer used as a novel injectable alveolar bone substitutes for controlled delivery of tetracycline. Cell culture medium was exposed to the polymer （0.01-10 mg/mL） for 24 h. The L-929 mouse fibro- blasts were then exposed to the treated cell culture medium for 24 h. Finally, cell viability and growth were assessed by using MTT assay and Alamar Blue assay. No significant cytotoxicity of the polyphosphoester against L-929 mouse fibroblasts was observed at a concentration up to 10 mg/mL （P〉0.05）. The two evaluation methods showed no significant differences （P〉0.05）. This study suggests that polyphosphoester does not demonstrate any significant toxic effects to cells in vitro and has the potential to be used both as a medical device and as scaffolds in tissue engineering applications.

应用体外抑菌法筛选中华大蟾蜍抗结核有效成分的研究

目的验证中华大蟾蜍具有抗结核活性,筛选抗结核活性成分。方法对中华大蟾蜍水提物进行葡聚糖凝胶分子筛分离和反相高效液相层析法(RPLC)分离,并采用微孔板Alamar blue法将分离所得12组分进行体外抑菌实验研究。结果第1、6、10组分表现出对供试结核分枝杆菌的明显抑制作用,其最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别为339.98mg/ml、20.00mg/ml、2.95mg/ml。结论中华大蟾蜍含有抑制结核分枝杆菌的活性成分,该有效成分分子量接近14KD,并表现出弱极性的特征。

银粉玻璃离子体的细胞毒性研究

目的研究临床常用的银粉玻璃离子体（日本松风）的体外细胞毒性。方法用细胞培养液浸提银粉玻璃离子体的粉剂（powder）,液剂（liqu id）及粉剂＋液剂（Power＋liqu id）各24 h,配置不同浓度的浸提液（0.1~100 g/L）,将小鼠成纤维细胞（L-929）在不同浓度的浸提液中分别培养24 h,通过A lam ar B lue比色法,检测各组分对L-929细胞相对增殖率的影响,评价其细胞毒性。结果 L-929细胞呈现高的细胞增殖率,各浓度浸提液之间均无显著性差异（P均〉0.05）,其细胞毒性为0~1级。结论临床常用的银粉玻璃离子体无明显的细胞毒性,具有较好的生物相容性。

氟化物对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 研究不同浓度氟化物对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法 大鼠颅骨分离的成骨细胞经不同浓度 (10 μmol/L～ 4mmol/L)的氟化钠作用后 ,采用AlamarBlueTM摄入法检测细胞增殖 ;ELISA方法测定碱性磷酸酶活性。结果 低浓度氟化钠 (10 0 μmol/L～ 1mmol/L)在体外可刺激细胞增殖 ,高浓度氟化钠 (2mmol/L以上 )可抑制细胞增殖 ;10 μmol/L～ 5 0 μmol/L的NaF增强细胞ALP活力 ,10 0 μmol/L以上的NaF降低了细胞ALP活力。结论 氟化物对成骨细胞的增殖与分化具有双向作用 ,即低浓度促进 ,高浓度抑制。