藜草花粉变应原免疫活性分析

目的：分析藜草花粉变应原成分及其变应原性、免疫原性．方法：用Sephacryl S-200HR葡聚糖凝胶层析法分离、纯化藜草花粉变应原，通过十二烷硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电脉法（SDS—PAGE）测定变应原各组分的分子质量；应用免疫印迹法检测各组分蛋白质与藜草花粉过敏性哮喘患者血清中sIgG和sIgE的反应率．结果：藜草花粉经电泳后得到12条蛋白质区带，分子质量依次为92，63．1，61，52，45，43，39．7，38．9，34，31．6，28．4和18．5～12ku；免疫印迹可见4条sIgE反应带，蛋白分子质量依次为92，34，31．6和18．5～12ku；与患者血清反应率分别是70％，50％，80％和90％；与血清sIgG结合的反应带有8条，蛋白分子质量为92，61，52，45，43，39．7，31．6和18．5～12ku；与患者血清反应率分别是80％，40％，10％，20％，80％，10％，10％和100％．结论：藜草花粉变应原主要含12种蛋白质成分，其中分子质量为18．5—12ku和92ku的蛋白质变应原活性及免疫原活性均很强，是主要变应原成分；分子质量在34和31．6ku的蛋白质有较强的变应原性而无或仅有较弱的免疫原性；而分子质量为43，61，45，52和39．7ku的蛋白质具有一定的免疫原性而无变应原性．

藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库的构建及初步鉴定

目的:构建藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库,并进行初步鉴定。方法:用TRIzol试剂抽提藜草花粉总RNA并分离mRNA。以纯化的mRNA为模板,以含有XhoI内切酶位点和18 bp的Poly(dT)序列的引物,用ZAP Express cDNA合成试剂盒反转录合成cDNA。将cDNA修饰、分级纯化后,获得大于400 bp的cDNA片段。将带有黏性末端的双链ds cDNA与Uni-ZAP XR载体连接,采用ZAP Express cDNA文库合成试剂盒利用λ噬菌体构建藜草花粉λ噬菌体cDNA表达文库,用包装蛋白对合成的ds cDNA进行体外包装,以包装产物感染宿主菌XL1-Blue MRF即获得cDNA表达文库。用PCR方法检测cDNA表达文库的滴度和插入片段的大小。结果:构建的藜草花粉变应原λ噬菌体表达文库的滴度为9.7×108pfu/L,重组率为100%,库容量为4.85 pfu。插入片段的长度平均约为1.0 kb。结论:构建的cDNA表达文库的容量及插入片段的大小合适,适用于藜草花粉变应原cDNA克隆的筛选,为制备基因重组藜草花粉变应原疫苗奠定了基础。

番木瓜、橄榄蜂花粉营养成分的分析与评价

经测定，番木瓜、橄榄蜂花粉的蛋白质含量分别为２１．８３１％和１９．１９４％；总糖含量分别为２２．６６％及２２．０８％冰解氨基酸的总含量分别为２１．７０７％和２３．３０７％，游离氨基酸的总含量分别是３９４．２５７ｍｇ／１００ｇ和５６２．９４１ｍｇ／１００ｇ，两者均具８种人体必需氨基酸，总含量分别为９．１１８％和８．８５１％，比值与ＦＡＯ／ＷＨＯ（１９７３）提出的理想蛋白质中人体必需氨基酸的比率模式接近，氨基酸分分别为７７．７和９２．６，番木瓜的限制性氨基酸为亮氨酸和缬氨酸，橄榄的限制性氨基酸为完氨酸。不饱和脂肪酸占脂肪酸总含量的６８．７９％和６７．７９％，多烯不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值分别为１．６９及１．４３。番木瓜、橄榄蜂花粉含１０种维生素，其中维生素Ｃ含量最高，分别达到５０．３２ｍｇ／１００ｇ和３５．４１ｍｇ／１００ｇ；番木瓜、橄榄蜂花粉除磷、钙、锌的含量普遍较高外，多数矿质元素的含量与其他果树蜂花粉相近。

藜草花粉过敏性哮喘诊断试验的研究

目的比较藜草花粉变应原皮肤挑刺试验（ＳＰＴ）、支气管激发试验（ＢＰＴ）、血清特异性ＩｇＥ（ｓＩｇＥ）的关系，并评估上述试验对藜草花粉过敏性哮喘的诊断价值。方法对４０例秋季哮喘发作的病人同时进行以上试验。结果ＳＰＴ、ｓＩｇＥ与ＢＰＴ有较高的符合率（７０％～８５％）。结论ＳＰＴ、ｓＩｇＥ的诊断价值与ＢＰＴ相仿，ＳＰＴ和ｓＩｇＥ安全、简便，值得临床推广应用。

藜草花粉过敏与支气管哮喘的研究

为了确定藜草花粉过敏原对哮喘患者的致敏作用。对外源性哮喘患者用藜草花粉过敏原进行了皮肤挑刺试验（SPT）和支气管激发试验（BPT）。结果藜草花粉SPT阳性者为28.2％,18例BPT阳性者中,14例出现哮鸣音。藜草花粉BPT与SPT的符合率为85％。提示藜草花粉过敏原是我国哮喘患者的一个重要吸入性过敏原。