醛糖还原酶抑制剂的微量筛选模型的建立

从牛晶状体中提取醛糖还原酶，采用９６孔板建立该酶的体外微量高效筛选模型，筛选过程简便快捷。

微生物来源的醛糖还原酶抑制剂F01-195A的研究

利用自建的高通量醛糖还原酶抑制剂的筛选方法,从数千株放线菌和真菌中筛选得到阳性菌株F01-195.对阳性菌株的发酵产物进行有机溶剂提取、硅胶柱色谱和ODS HPLC纯化,得到活性化合物F01-195A,其对醛糖还原酶有较强的特异性抑制活性,IC50为57.2μmol/L.通过对F01-195A的紫外、质谱、核磁等理化数据的分析,鉴定了其化学结构与化合物Flavomannin相同,Flavomannin已被报道作为了抗疟疾药物的先导化学物.

索比尼尔、托瑞司他及24种中药对醛糖还原酶的抑制作用

目的:观察24种中药及典型醛糖还原酶(AR)抑制剂索比尼尔、托瑞司他对AR活性的抑制作用,以筛选防治糖尿病慢性并发症的中药。方法:利用牛睾丸纯化的AR观察药物对酶促反应动力学的影响,酶活性反应体系包括:NADPH0.1mmol.L-1,DL-甘油醛10mmol.L-1,Na+-K+磷酸缓冲液67mmol.L-1和酶适量。将测得的酶促反应速度按双倒数(Lineweaver-Burk)作图法确定药物对AR的抑制类型,再用Dixon或Cornish-Bowden作图法求取药物对AR的抑制系数Ki,根据Ki值大小筛选出作用较强的中药。结果:索比尼尔为非竞争性抑制剂,托瑞司他为反竞争性抑制剂,除龙胆草、柴胡无抑制作用外,其余中药均为混合性抑制剂。槲皮素、黄连素、鬼针草、黄芩苷、水飞蓟宾、艾叶、知母、墨旱莲、野菊花、决明子、茜草、青果酶抑制作用较强,其Ki为2.1～617.2μg.mL-1,黄芪、葛根素、淫羊藿、紫竹草、吴茱萸、牡丹皮、肉桂、菟丝子、丹参、甘草抑制作用较弱,其抑制常数超过mg.mL-1水平。结论:利用本实验建立的方法可进行AR抑制剂的初步筛选。

糖尿病致病基因醛糖还原酶基因及其抑制剂筛选模型的构建及功能研究

目的基因工程方法建立人醛糖还原酶基因(AR)的蛋白分子模型,并将该模型应用于中草药AR抑制剂的初步筛选。方法将含基因AR及融合基因AR∷GFP的重组质粒pcDNA3.1/myc-His-AR及pcDNA3.1/myc-His-AG瞬时转染HEK293细胞,分别命名为HAR、HAG细胞株。通过荧光显微镜观察AR∷GFP的绿色荧光直接判断转染效果及估计基因AR的表达;Western blot、紫外分光光度法检测AR蛋白表达及AR酶活性。应用此HAR模型对黄芩苷等5种中草药进行初步筛选,并与经典AR抑制剂Sorbinil、Zopolrestat的抑制效果比较。结果GFP绿色荧光表达丰富,表明质粒转染效率较高;Western blot和紫外分光光度法显示:转染后HEK293细胞中AR蛋白表达量高,AR酶活性强(空白对照的2.5倍)。AR抑制剂筛选实验揭示,黄芩苷、虎杖苷、蕨麻多糖JM等中草药表现出与Sorbinil相近的AR抑制活性。结论AR的蛋白分子模型成功建立,此模型可得到较大量高活性AR酶蛋白,并可应用于AR抑制剂的初步稳定筛选;黄芩苷、虎杖苷、蕨麻多糖JM等中草药显示出潜在的AR抑制活性。

Sorbinil和Zopolrestat对酵母工程菌中人醛糖还原酶活性的抑制作用

目的利用人醛糖还原酶基因(AR)及其与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合的酵母细胞表达模型,选用两种经典的AR抑制剂(ARI)-Sorbinil和Zopolrestat,初步观察模型在药物筛选方面的功能。方法复苏菌种并培养,在细胞培养液中加入ARI,观察细胞生长、GFP表达及荧光强度、AR蛋白表达及AR活性。结果 GFP荧光表达及AR蛋白的表达不受影响,但AR活性可被Zopolrestat抑制。结论 GFP标记的AR基因的酵母细胞模型可用于ARI的初步筛选,易重复,费用经济。Zopolrestat对酵母工程菌中表达的AR活性呈现出良好的抑制效应,可考虑作为该模型进行ARI筛选时的对照药物。

醛糖还原酶抑制剂筛选的研究进展

醛糖还原酶是多元醇通路中的关键限速酶,高血糖浓度下,此通路代谢旺盛,与糖尿病并发症的发生和恶化有密切关系。醛糖还原酶抑制剂因此而成为糖尿病并发症的药物治疗因子,它主要是通过山梨醇通路降低体内血糖浓度,减少山梨醇在体内组织中的堆积达到治疗目的。目前已从植物、微生物中或化学合成获得了许多醛糖还原酶抑制剂,其中2个分别在日本和爱尔兰上市,还有部分正进行临床试验。现主要概述醛糖还原酶抑制剂筛选的研究进展。

依帕司他联合羟苯磺酸钙治疗2型糖尿病周围神经病变临床观察

目的:观察羟苯磺酸钙联合依帕司他对2型糖尿病周围神经病变患者的临床疗效。方法:选取2015年1-12月笔者所在医院内分泌科门诊的2型糖尿病周围神经病变患者350例,按照就诊顺序进行分组,将奇数就诊号设置为治疗组,共177例;将偶数就诊号设置为对照组,共173例。两组均给予控制血糖治疗,对照组在此基础上给予依帕司他,治疗组在对照组基础上口服羟苯磺酸钙,均治疗12周。统计两组治疗前后密歇根糖尿病神经病变量表(MDNS)和密歇根神经病变筛查量表(MNSI)评分,对比两组临床疗效。结果:治疗12周后,对照组总有效率为84.97%,显著低于治疗组的96.04%,差异有统计学意义(χ^2=12.560,P=0.000)。治疗12周后,两组MDNS和MNSI评分均较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后MDNS和MNSI评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:羟苯磺酸钙联合依帕司他治疗2型糖尿病周围神经病变的效果优于单用依帕司他治疗。