牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白E2基因不同高可变区缺失型核酸疫苗的构建

为了构建牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)囊膜蛋白E2基因高可变区(hyper variable region,HVR)缺失型核酸疫苗,为BVDV防控提供新的方法,试验依据GenBank中BVDV基因组序列设计引物,以BVDV新疆分离株TC cDNA为模板,扩增E2基因并测序,使用生物信息学软件分析E2蛋白的跨膜区和HVR区域等;采用常规PCR和搭桥PCR等方法扩增E2基因的不同缺失型HVR区域,并将其插入到真核表达载体pVAX1中,构建成真核表达质粒;分别于0,2,4周时免疫Balb/c小鼠,并在首次免疫后0,14,28,42天采集血清,通过ELISA法测定IgG水平。结果表明:成功扩增出BVDV TC株E2基因,大小为1122 bp;E2基因与BVDV 1b毒株HP-KY-PK13(登录号KT355592.1)及BVDV 1b毒株3156(登录号JN704144.1)的E2基因具有较高的同源性,E2 HVR1区域位于E2基因N端,HVR2区域位于E2基因中间部位;成功构建了E2基因不同的HVR缺失型真核表达质粒pVAX1-E2 HVR1△1-20、△1-64、△21-40、△41-64和pVAX1-E2 HVR2△140-216;与免疫pVAX1相比,E2基因不同HVR缺失质粒及野生型E2质粒诱导的IgG抗体水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);而在首次免疫42天时,用pVAX1-E2 HVR1△41-64免疫诱导的IgG抗体水平最高,约为pVAX1-E2的3.9倍。说明用pVAX1-E2 HVR1△41-64制备的核酸疫苗能诱导动物产生较高水平的IgG。

埃博拉病毒包膜糖蛋白进化特征分析

目的研究埃博拉病毒包膜糖蛋白的进化和变异特征。方法从美国生物信息中心（NCBI）数据库选取1976至2014年埃博拉病毒包膜糖蛋白氨基酸序列100条，通过多序列比对和蛋白进化树分析埃博拉病毒包膜糖蛋白的进化和变异特征。结果1976至2014年，不同亚型埃博拉病毒包膜糖蛋白氨基酸序列间的同源性为54．00％～65．00％，同亚型包膜糖蛋白氨基酸序列同源性为95．00％～100．00％。2014年在不同地域分离到的同亚型埃博拉病毒的包膜糖蛋白氨基酸序列并不完全一致，但是变异很小，同源性达到了99．70％～100．00％。2014年来自塞拉利昂的扎伊尔一埃博拉病毒包膜糖蛋白氨基酸同源性达到了100．00％，但是来自几内亚的三条扎伊尔一埃博拉病毒糖蛋白氨基酸序列有一定变异。不同亚型埃博拉病毒包膜糖蛋白分别在进化树的不同分支上：2014年分离自塞拉利昂的扎伊尔一埃博拉病毒包膜糖蛋白在一大分支上；1976至2014年分离自塞拉利昂以外国家的扎伊尔一埃博拉病毒糖蛋白在另一个大分支上。结论埃博拉病毒包膜糖蛋白氨基酸变异具有时间性和地域性。2014年流行于不同地域的扎伊尔一埃博拉病毒可能是同一来源的两个不同变种，没有迹象表明不同亚型埃博拉病毒之间具有“混合杂交现象”发生。

丙型肝炎病毒1b亚型E2区序列与干扰素治疗应答的关系

目的探讨上海地区丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型感染者E2区的高变区1(HVR1)和高变区2(HVR2)、双链RNA激活的蛋白激酶真核翻译启动因子磷酸化同源区域(PePHD)及其邻近区域的基因序列与干扰素应答的相关性。方法收集上海地区24例HCV1b慢性感染者在α干扰素治疗前后及随访过程中的血清标本,用逆转录聚合酶链反应扩增E2区的HVR1、HVR2、PePHD及其邻近区域的基因并进行测序和氨基酸同源性分析。结果治疗前的HVR1区氨基酸序列高度变异,基于HVR1序列的种系发生树提示序列变化与干扰素应答类型无关。持续应答组(SR)、无应答组(NR)和复发组(TR)治疗前的HVR2区平均氨基酸变异数分别为2.0、1.0和1.5,统计学分析显示SR组与NR组差异有显著性(t=3.098,P<0.05)。治疗前的PePHD序列高度保守,无1例存在氨基酸变异。观察4例NR患者治疗过程中的PePHD序列,也未发现有任何氨基酸的突变。进一步比较PePHD邻近区域的氨基酸序列发现存在个别位点的变异(平均氨基酸变异SR组6.67,NR组5.75,TR组7.43),但变异的多少与疗效无关(SR组∶NR组t=1.413,P=0.195;SR组∶TR组t=1.706,P=1.107;TR组∶NR组t=0.682,P=0.504)。结论与HCVE2基因的HVR1区、PePHD区及其邻近区域序列与患者对干扰素的应答无相关性比较。

鸭血烯酸钠对水痘-带状疱疹病毒的作用

用鸭血烯酸钠配伍5-氟尿嘧啶(5-Fu)治疗带状疱疹病人,结果发现,治疗后的水痘-带状疱疹病毒(Varicella-Zoster Virus,VZV)的包膜变薄、破裂或消失,核衣壳内的DNA消失。试验组有效率为87%,对照组有效率为33%。差异十分显著(P<0.005)。试验组经治疗3.17±2.5d后疼痛消失,对照组则要7.90±3.83d,两者差异非常显著(P<0.001)。