m6A去甲基化酶ALKBH5在形觉剥夺性近视豚鼠中的表达变化及其意义

目的探讨形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠视网膜中m6A去甲基化酶AlkB同源蛋白5(ALKBH5)表达变化及其参与近视的作用机制。方法采用随机数字表法将30只健康SPF级3周龄三色豚鼠分为正常对照组和实验组,每组15只。实验组中眼罩遮盖右眼作为FDM组,暴露左眼为自身对照组。分别于实验前及实验1、2、3和4周时进行豚鼠眼生物学参数测量。采用带状光检影镜测量屈光度,采用A型超声仪测量眼轴长度。实验4周,通过免疫组织化学染色和免疫荧光染色检测ALKBH5在豚鼠视网膜中的表达分布。采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测豚鼠视网膜中ALKBH5 mRNA和蛋白表达情况。结果与正常对照组和自身对照组相比,实验2、3和4周,FDM组豚鼠近视屈光度明显增加,眼轴显著增长,差异均有统计学意义(均P<0.001)。免疫组织化学染色和免疫荧光染色显示,ALKBH5分布在视网膜神经纤维层、视锥视杆细胞层和视网膜色素上皮(RPE)层,其中以神经纤维层和RPE层为主。正常对照组、自身对照组和FDM组豚鼠ALKBH5蛋白相对荧光强度值分别为1.000±0.204、0.874±0.076和0.571±0.053,FDM组视网膜中ALKBH5蛋白荧光强度值明显小于正常对照组和自身对照组,差异均有统计学意义(t=4.069,P=0.006;t=5.176,P=0.014)。造模后4周,FDM组豚鼠视网膜中ALKBH5 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和自身对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论FDM组豚鼠视网膜中m6A去甲基化酶ALKBH5表达下降,ALKBH5及相关m6A甲基化修饰可能参与了近视的发生和发展。

METTL3和ALKBH5在甲状腺癌中的表达

目的 探讨甲基转移酶样3(METTL3)和alkB同系物5(ALKBH5)在甲状腺癌(TC)中的水平及意义。方法 选取2014年3月至2015年9月于北京积水潭医院住院治疗的116例TC患者癌组织作为TC组,选取其相应癌旁组织作为对照组。检测组织METTL3、ALKBH5 mRNA水平;分析METTL3、ALKBH5 mRNA水平与患者临床病理特征的关系;分析METTL3 mRNA与ALKBH5 mRNA表达的相关性;以Kaplan-Meier法分析TC组织中METTL3、ALKBH5表达与患者五年内总生存率的关系;采用多因素Cox回归分析TC预后的影响因素。结果 TC组METTL3 mRNA水平高于对照组,ALKBH5mRNA水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。METTL3高表达组患者TNMⅢ期、淋巴结转移比例高于低表达组,ALKBH5低表达组TNMⅢ期、淋巴结转移比例高于高表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。TC组织中METTL3 m RNA与ALKBH5 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.589,P<0.05)。METTL3高表达组五年总生存率低于METTL3低表达组,ALKBH5低表达组五年内总生存率低于ALKBH5高表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移及METTL3高表达、ALKBH5低表达是影响TC预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 TC中METTL3呈高表达、ALKBH5呈低表达,均可作为TC患者的独立预后因素。

m^(6)A去甲基化酶ALKBH5与肿瘤发生、发展的研究进展

N^(6)-甲基腺嘌呤(m^(6)A)修饰是指在腺苷酸6位的N原子上插入一个甲基取代基。m^(6)A修饰在甲基转移酶、去甲基化酶和解读器蛋白共同调控下完成,其修饰调控紊乱可影响基因的表达,进而通过调节肿瘤生物学过程(如增殖、迁移、侵袭、转移)在多种肿瘤中发挥重要作用。ALKB同系物5作为m^(6)A修饰中的一种重要去甲基化酶,在不同肿瘤中的表达水平、目标基因以及发挥的作用均不同,且其作用机制尚未明确,未来仍需进一步阐明其具体机制,进而为肿瘤的分子靶向治疗提供新线索。

亚慢性铝暴露致大鼠认知障碍ALKBH5/PTEN/AKT信号通路机制

目的探讨麦芽酚铝暴露对miR-193a-3p、去甲基化酶AlkB同源蛋白5(ALKBH5)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)和蛋白激酶B(AKT)的影响,以及miR-193a-3p是否通过调控ALKBH5/PTEN/AKT信号通路参与铝致认知障碍的机制。方法将无特定病原体级健康雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组8只。3个剂量组大鼠分别予浓度为10.00、20.00和40.00μmol/kg体质量的麦芽酚铝溶液腹腔注射染毒,对照组大鼠予等体积0.9%氯化钠溶液;每周连续染毒5 d,持续3个月。染毒结束后,以新物体识别实验检测大鼠学习记忆能力,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠海马组织中miR-193a-3p和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA相对表达水平,以蛋白质印迹法检测大鼠海马组织中ALKBH5、PTEN和AKT2蛋白的表达。结果高剂量组大鼠辨别指数和偏好指数分别低于对照组和低剂量组(P值均<0.05)。高剂量组大鼠海马组织中miR-193a-3p和Bcl-2 mRNA相对表达水平分别低于对照组和低剂量组(P值均<0.05),Bax mRNA相对表达水平分别高于对照组和低剂量组(P值均<0.05),Caspase-3 mRNA相对表达水平分别高于其他3组(P值均<0.05)。高剂量组大鼠海马组织中ALKBH5蛋白相对表达水平低于对照组(P<0.05),PTEN蛋白相对表达水高于对照组和低剂量组(P值均<0.05),AKT2蛋白相对表达水平低于对照组和低剂量组(P值均<0.05)。结论亚慢性铝暴露可抑制大鼠海马组织中miR-193a-3p的表达,从而破坏ALKBH5/PTEN/AKT通路,影响正常的神经元稳态和细胞功能;此机制可能在铝诱导的认知障碍过程中发挥重要作用。

m^(6)A去甲基化酶在胃癌发生发展中的作用机制研究进展

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,多数患者发现时已处于晚期,预后不佳。外科手术及化学治疗(化疗仍是目前胃癌的主要治疗方式。N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)是近年来肿瘤研究的热点。m^(6)A作为真核生物中最常见的RNA修饰形式,可以调控RNA循环的各个阶段,包括RNA剪接、加工、降解和翻译等,从而调控RNA的表达和功能,在细胞分化、发育和代谢等各个环节中发挥关键作用。m^(6)A去甲基化酶可去除RNA上的甲基基团,确保m^(6)A甲基化是一个动态的可逆的过程。作为m^(6)A甲基化过程的关键酶,m^(6)A去甲基化酶——脂肪和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)、AlkB同系物5(AlkB homolog 5,ALKBH5)、ALKBH3的失调能通过多种机制调控胃癌的演进过程,与胃癌的发生发展密切相关。m^(6)A去甲基化酶通过调节信号通路,改变胃癌细胞的增殖和侵袭能力,影响胃癌对化疗药物的耐药性,参与调控胃癌的免疫应答及线粒体代谢,从而影响胃癌细胞的生长,有望成为一个全新的治疗靶点。该文综述了m^(6)A去甲基化酶参与胃癌发生发展的分子机制,以及其表达和功能与胃癌生物学特性的关系,旨在为胃癌的早期诊断和靶向治疗提供新的研究思路。

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响。方法基于公共数据库分析LncRNA TUG1在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA TUG1在胃癌细胞系中的表达;采用si-TUG1、si-NC转染胃癌细胞SGC-7901,分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、克隆形成实验、Transwell实验和基质胶成管实验分析敲低lncRNA TUG1对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响。基于公共数据库分析烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)基因与lncRNA TUG1的相关性。采用放线菌素D实验验证ALKBH5与lncRNA TUG1的调控关系。通过细胞功能实验分析敲低ALKBH5对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响。结果lncRNA TUG1在胃癌组织和胃癌细胞系中均表达上调;敲低lncRNA TUG1后,SGC-7901细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均较对照细胞下降,差异有统计学意义(P<0.05)。数据库分析结果显示,在胃癌中,ALKBH5与lncRNA TUG1表达呈正相关(r=0.37,P<0.05)。与对照细胞相比,敲低ALKBH5的SGC-7901细胞lncRNA TUG1的RNA稳定性下降,且细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过诱导lncRNA TUG1表达,促进胃癌细胞的增殖、集落形成、迁移和血管生成。

m^(6)A修饰调控的COL6A5对肺腺癌细胞侵袭能力的影响

目的明确6型胶原蛋白α5(COL6A5)在肺腺癌中的表达及意义。方法通过在线数据库及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测COL6A5在肺腺癌细胞和组织中的表达。采用GEPIA数据库分析COL6A5的表达量与肺腺癌患者预后的相关性。生物信息学预测结合RNA甲基化免疫沉淀-实时荧光定量PCR(MeRIP-qPCR)实验检测COL6A5转录本上的m^(6)A位点。qPCR法检测RNA去甲基酶ALKBH5在肺腺癌组织中的表达量,并分析ALKBH5与COL6A5在27例肺腺癌组织中表达的相关性。qPCR和Western blot检测ALKBH5对COL6A5的抑制作用。生物信息学预测结合Transwell实验和Western blot验证COL6A5在肺腺癌中的作用。结果在线数据库Oncomine分析显示,COL6A5在肺癌中低表达,GEPIA数据库分析显示肺腺癌组织中COL6A5 m RNA表达水平显著低于正常组织(P<0.05)。qPCR结果显示,COL6A5 mRNA在27例肺腺癌组织中的表达量低于癌旁组织;与正常肺上皮细胞相比,COL6A5 mRNA在肺腺癌细胞中的表达量明显受到抑制(P<0.05)。生物信息学预测结合MeRIP-qPCR实验证实,COL6A5 mRNA上存在m^(6)A位点。肺腺癌组织中ALKBH5 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织,且与COL6A5 m RNA表达呈负相关(r=-0.599,P<0.01)。在H1299细胞中敲低ALKBH5,可显著上调COL6A5的表达。分析与COL6A5共表达的基因,结果显示COL6A5可能参与调控肺腺癌细胞上皮间质转换、止血和细胞表面相互作用等生命活动。Transwell和Western blot证实,过表达COL6A5可显著抑制H1299细胞的侵袭转移能力。结论 ALKBH5在肺腺癌中下调COL6A5,过表达COL6A5可明显抑制肺腺癌细胞的侵袭转移能力。

m^(6)A去甲基化酶ALKBH5——新的原癌基因

AlkB同源蛋白5(AlkB homolog 5,ALKBH5)属于AlkB家族,对N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladeno-sine,m^(6)A)具有高效的脱甲基活性,参与RNA的剪接、加工、出核和翻译等生物学过程。近年来研究发现,ALKBH5在卵巢癌、胃癌、肺癌和胶质母细胞瘤等生殖、消化、呼吸和神经系统恶性肿瘤中的表达异常升高,而且这种异常高表达往往密切关联癌细胞增殖、侵袭/迁移与耐药,预示ALKBH5可能成为一种新的原癌基因。因此,本文主要就ALKBH5在这些系统癌症中的促进作用及其机制作一综述,旨在明确新的癌症防治靶点并研发新药。

mRNA N6⁃甲基腺苷甲基化在帕金森病患者血液中的变化

目的探究帕金森病(PD)患者血液中mRNAN6⁃甲基腺苷(m6A)甲基化水平以及相关的甲基转移酶[甲基转移酶样蛋白14(METTL14)]和去甲基化酶[脂肪与肥胖相关基因蛋白(FTO)、AlkB同源蛋白5(ALKBH5)]的变化情况。方法连续性收集2020年1月至2021年6月在该院神经内科门诊及住院就诊的PD患者(PD组,50例)以及健康对照人群(对照组,50例)。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹(WB)、实时定量PCR(QPCR)、m6A甲基化定量等实验,检测两组血浆及外周单个核细胞(PBMC)的METTL14、FTO、ALKBH5及m6A水平。结果与对照组比较,血浆中PD组的METTL14、FTO、ALKBH5蛋白水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,外周单个核细胞(PBMC)中PD组的METTL14、FTO、ALKBH5蛋白条带灰度值较低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,PBMC的mRNA中PD组的METTL14、FTO、ALKBH5表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,PBMC的mRNA中PD组的m6A水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在PD患者血浆和PBMC中MET⁃TL14、FTO、ALKBH5和m6A甲基化水平均有不同程度的下降,表明mRNAm6A甲基化与PD的发生发展存在一定的联系。