白头翁总皂苷碱水解产物的抗胶质瘤作用及机制研究

目的探讨白头翁总皂苷碱水解产物(PAHS)的抗胶质瘤作用及机制。方法采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率,同时采用Giemsa染色观察PAHS对肿瘤细胞形态学变化;采用hoechest33342染色观察人脑胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞的凋亡;用Western Blot法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果 PAHS可以剂量依赖性的抑制U251细胞的增殖,抑制U251细胞集落的形成;PAHS(6.25,9.375,12.5μg·mL-1)可以诱导U251细胞凋亡,抑制率分别为(6.00±2.05)%、(46.19±0.24)%、(78.26±2.10)%。PAHS可以上调Caspase-3、Bcl-2等蛋白的表达。结论PAHS具有良好的抗胶质瘤作用,其机制可能与调节Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达有关。

白头翁总皂苷结肠定位固体分散体制备

目的制备白头翁总皂苷结肠定位固体分散体。方法采用溶剂法制备白头翁总皂苷固体分散体,以体外累计释放度为评价指标,采用单因素方法筛选制备工艺及处方,并采用电子扫描显微镜(SEM)、红外光谱(IR)对制备的固体分散体进行分析。结果 SEM和IR分析结果显示白头翁总皂苷和Eudragit S100形成了固体分散体。体外释放度结果显示载药量在20%时指标成分在p H 1.0溶液中2 h基本不释放,在p H 6.8溶液中4 h累积释放度小于16%,在p H 7.8溶液中2 h累积释放大于86%。结论所制备的固体分散体达到了结肠定位的效果。

HPLC-ELSD法测定白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷

目的建立同时测定白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷成分的HPLC-ELSD方法。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%甲酸水溶液;柱温35℃;梯度洗脱条件:0～30 min,70%～100%甲醇;体积流量1.0 mL/min;ELSD气化室温度40℃;气体压力350 kPa。结果白头翁皂苷D、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖、白头翁皂苷A、黑海常春藤苷A1、白头翁皂苷F、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷进样量分别在0.799～4.568、0.563～6.756、0.431～2.683、0.894～7.826、0.643～7.504、1.351～7.822、0.629～2.515、0.698～2.794μg,峰面积(A)的对数值lgA与相应质量(M,μg)的对数值lgM呈良好的线性关系(n=5),8种成分的平均回收率在99.0%～101.0%,且RSD值均小于1.5%。结论本检测方法简便、准确,为白头翁总皂苷碱水解产物的质量控制提供了依据。

白头翁总皂苷溶解性能考察

目的:考察白头翁总皂苷及其指标成分在不同试剂中的溶解情况,研究在各溶剂中,总皂苷溶解度、指标成分溶解度以及总皂苷分散情况三者之间的关系。方法:运用沉淀法、指标成分含量测定法、粒径测定法对总皂苷溶解度、指标成分溶解度以及混悬液粒径进行测定。结果:白头翁总皂苷及其指标成分在各溶剂中的溶解能力为甲醇>人工结肠液>人工小肠液>蒸馏水>人工胃液;混悬液粒径为人工胃液>蒸馏水>人工小肠液>人工结肠液>甲醇。结论:白头翁总皂苷及其指标成分在甲醇中溶解度较大,人工胃液中相对最小,混悬液的粒径变化趋势与溶解度变化趋势基本呈反相关。

白头翁总皂苷在大鼠肠外翻试验中吸收特性考察

目的:考察白头翁总皂苷的肠吸收特性。方法:采用离体外翻肠囊模型研究白头翁总皂苷在不同肠段、不同药物浓度下的肠吸收特性,采用HPLC测定样品中指标成分常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-L-吡喃阿拉伯糖苷的质量浓度。结果:白头翁总皂苷指标成分在各个肠段的吸收无显著性差异,各肠段累积吸收量均随药物质量浓度的增加而增加。结论:白头翁总皂苷在大鼠肠道内不存在特殊的"吸收窗",可能为被动扩散吸收。

白头翁总皂苷碱水解产物通过线粒体通路促进肝癌细胞凋亡研究

目的研究白头翁总皂苷碱水解产物(PAHS)抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法检测PAHS对于人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并用Giemsa染色法观察细胞形态;采用Hoechst 33258染色法以及流式细胞术检测PAHS对细胞凋亡、细胞周期及线粒体膜电位的影响;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Cytochrome C、Caspase-3、cleaved Caspase-3和Bcl-2的表达。采用ICR小鼠腋下sc肝癌细胞H22建立体内肝癌模型,测定肿瘤生长抑制率,并通过HE染色和透射电镜观察组织形态。结果体外结果显示,PAHS能够以剂量和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的增殖,能够将肿瘤细胞的生长周期阻滞在S期,降低线粒体膜电位。PAHS可以上调Cytochrome C、cleaved Caspase-3的表达和下调Bcl-2、Caspase-3的表达。体内实验结果显示,PAHS(50、100、200 mg/kg)可以抑制小鼠肝癌细胞的生长,具有剂量依赖性。组织学观察显示PAHS组的小鼠肿瘤组织均有大面积坏死及凋亡细胞的出现。结论 PAHS可通过诱导细胞凋亡发挥抗肝癌作用,其作用机制与线粒体凋亡途径有关。