不同等电点沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白的双向电泳分析

为探索牛奶乳清蛋白提取的最适方法,以生鲜荷斯坦牛奶为对象,采用不同等电点(pH 4.6和pH 4.8)沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白样品,并对提取效果进行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱分析。依据凝胶图谱上蛋白斑点比较图谱质量,采用PDQuest 8.0凝胶图像分析软件进行凝胶图谱分析。结果显示:2种方法均能有效提取牛奶乳清蛋白,且获得的2-DE凝胶图谱背景清晰、蛋白点个体独立、无明显的拖尾现象,且重复性强,但都存在一定的酪蛋白残留。与超速离心法相比,pH 4.6沉淀法和pH 4.8沉淀法提取乳清蛋白的2-DE凝胶图谱可检测到较多的蛋白质斑点。pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备的2-DE凝胶图谱中蛋白点的表达丰度略高于pH 4.8沉淀法。研究表明:pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备2-DE凝胶图谱略优于pH 4.8沉淀法和超速离心法。但2种等电点沉淀法和超速离心法都可有效去除牛奶中的高丰度酪蛋白,提高低丰度蛋白的检出敏感性。

芝麻饼粕蛋白质的理化和功能性质研究

对碱溶酸沉法、超声辅助碱提法和蛋白酶法3种工艺制备的芝麻饼粕蛋白质PA、PU和PE的理化和功能性质进行了研究,结果表明3种工艺制备的芝麻饼粕蛋白质氨基酸组成无显著差异,除赖氨酸含量较低外,其他必需氨基酸组成均接近或高于FAO/WHO模式;芝麻饼粕蛋白的相对分子质量大小顺序为PA>PU>PE。芝麻饼粕蛋白质的溶解性、持水性、持油性、乳化性、起泡性及起泡稳定性大小顺序为:PE>PU>PA,且芝麻饼粕蛋白质的p H-乳化性曲线与p H-溶解性曲线相似,溶解度和乳化性在等电点(p H 4)时最低。

酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼蛋白的工艺优化及蛋白组成分析

以罗非鱼(Oreochromis niloticus)肉为原料,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼肌肉蛋白,主要探讨溶解p H值、料液比和溶解时间对可溶性蛋白得率以及沉淀p H值对可溶性蛋白沉淀得率及蛋白亚基组成的影响.结果表明,酸/碱溶解回收罗非鱼肉可溶性蛋白的最佳p H值为p H2.0、3.0、11.0和12.0,料液比1∶9(ω/v),溶解时间10 min,可溶性蛋白种类齐全,包含了典型的鱼蛋白电泳条带;酸/碱可溶性蛋白的最佳沉淀条件为p H 5.5,在此条件下,溶解-沉淀过程的蛋白得率分别为61.59%-64.95%.与鱼肉蛋白相比,四种分离蛋白中盐溶性蛋白的比例均升高,水溶性蛋白的比例均降低(p<0.05).比较而言,碱溶-等电点沉淀过程中鱼蛋白的变性程度较小,其水溶性组分和盐溶性组分所占的比例均较高,组成相对比较齐全,而酸提蛋白中肌球蛋白重链部分降解,少量肌浆蛋白损失.因此,碱溶-等电点沉淀法更有利于回收鱼肉分离蛋白.

等电点沉淀结合凯氏定氮法测定市售纯牛奶中酪蛋白的含量

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后的等电点沉淀方法,测定酪蛋白质量分数都在74%~76%。pH4.6HAc-NaAc缓冲溶液作为洗涤剂,对于体系pH的维持更加稳定。仅沉淀的处理方式可以将大部分乳清蛋白和酪蛋白进行分离。NaOH溶液最佳添加范围是25mL^35mL。改进后的等电点沉淀结合凯氏定氮法高效准确,简单易行,重现性好,可以用于纯牛奶中酪蛋白的掺假鉴定。

响应面法优化酸枣仁蛋白提取工艺

为优化碱提酸沉法制备酸枣仁蛋白的工艺条件,通过单因素试验考察了液料比、pH值、浸提温度和浸提时间对酸枣仁蛋白提取率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计建立并分析各因素与提取率之间关系的数学模型。结果表明:碱提酸沉法制备酸枣仁蛋白的最佳工艺条件为液料比24:1(mL/g)、pH11、提取温度57℃、提取时间46min,在此条件下酸枣仁蛋白提取率的最大理论值为73.15%,实际蛋白提取率为73.11%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。

盐提和碱提酸沉两种方法提取腰果蛋白的结构及其功能性质分析

使用盐提和碱提酸沉两种提取方法从腰果脱脂粉中提取分离蛋白,并对比研究盐提腰果蛋白(CNSPI)和碱提酸沉腰果蛋白(CNPI)的结构和功能性质。结果表明CNPI和CNSPI在结构、微观形态、功能性质和营养价值等方面有明显差异,CNSPI蛋白含量较高,溶解性和乳化性也优于CNPI,CNPI表现出较好的起泡性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明两种提取方法对分离蛋白的亚基组成没有显著影响;本研究使用氨基酸分析仪来测定分离蛋白的营养价值,结果表明两种方法提取的腰果蛋白氨基酸含量无明显差异,其营养价值都远高于腰果脱脂粉。表面疏水性测定结果表明CNPI的表面疏水性显著高于CNSPI。扫描电子显微镜结果表明CNSPI呈现出大量的片状微观结构,而CNPI呈现出少量球状和薄片结合成的不规则形状。圆二色光谱结果显示CNSPI和CNPI中主要二级结构是β-折叠,CNPI中有较多的无规卷曲,约占29.3%,CNSPI有较多的α-螺旋(27.0%)。在中性条件下,CNPI的起泡性为119.00%,CNSPI的乳化性达到30.14 m2/g。

双酶法制备富含多酚的荞麦浓缩蛋白及体外消化研究

开发一种双酶结合膜分离的方法制备富含多酚的荞麦浓缩蛋白,系统比较了双酶法与传统碱溶酸沉法、盐提法在蛋白质及多酚的含量和回收率、溶解性等方面的差异;并结合SDS-PAGE、氮释放量、胶束多酚释放量等,考察了荞麦浓缩蛋白的模拟体外消化。结果表明:相对于碱溶酸沉法和盐提法,双酶法制备荞麦蛋白不仅具有较高的蛋白质质量分数(49.07%)和最高的蛋白回收率(57.93%),而且多酚质量分数(11.35%)显著高于碱溶酸沉法(3.65%)和盐提法(2.67%),回收率更高达70.89%,多酚多以结合态与蛋白共存;体外消化试验后,3种残渣蛋白SDS-PAGE分析结果相似,分子质量大于14.4 ku的组分全部裂解;此外,双酶法制备的荞麦蛋白氮释放量相对较低(43.30%),而胶束的多酚释放量高达2.05%,是良好的抗消化蛋白。

超微冷冻粉碎处理下酸枣仁蛋白提取工艺优化

采用超微粉碎和冷冻粉碎技术对酸枣仁渣进行前处理,在单因素实验基础上,以料液比、pH、提取温度、提取时间为实验因素,采用响应面分析法,对酸枣仁蛋白的提取方法进行了优化。试验结果表明采用超微粉碎和冷冻粉碎条件下酸枣仁蛋白提取率显著高于普通粉碎条件(P<0.05),4个因素对蛋白提取率影响由大到小顺序为:pH、液料比、提取时间、提取温度。基于超微冷冻粉碎条件下酸枣仁蛋白提取的最佳工艺条件为:料液比为32∶1、pH为11.4、温度为51℃、提取时间为58 min。在此条件下蛋白提取率的优化预测值为78.50%,实际蛋白提取率为78.47%±0.17%。此回归模型较好地预测了蛋白提取结果,为酸枣仁加工的废弃物再利用提供了较好的参考依据。

蛋白分离方式对鱼肉蛋白质组成和功能特性的影响

为了研究2种不同蛋白分离方式对蛋白质组成和功能特性的影响,以白鲢背部肌肉、漂洗鱼糜蛋白和ISP分离蛋白为研究对象,研究其氨基酸组成、蛋白质模式、粒径分布、Zeta电位、保水性、乳化性和表面疏水性的差异。结果表明,与白鲢背部肌肉相比,ISP分离蛋白的总氨基酸含量没有损失,而漂洗鱼糜蛋白的总氨基酸含量减少;SDS-PAGE凝胶电泳表明,与背部肌肉的蛋白质组成相比,漂洗方式会使鱼肉的40kDa原肌球蛋白(TM)、50kDa肌钙蛋白(TN)和25kDa肌球蛋白轻链(MLC)消失,而ISP蛋白分离法没有造成明显的组分损失。在蛋白质的功能特性方面,ISP提取蛋白的粒径分布范围较漂洗鱼糜蛋白广,而Zeta电位二者间没有显著性差异(p>0.05);漂洗鱼糜蛋白其持水性显著高于ISP提取蛋白(p<0.05);ISP提取蛋白乳化活性指数(EAI)显著低于漂洗鱼糜蛋白,但其乳化稳定指数(ESI)显著高于漂洗鱼糜蛋白(p<0.05);ISP提取蛋白的表面疏水性(S0-ANS)显著高于漂洗鱼糜蛋白(p<0.05)。综合分析可知,蛋白分离方式会显著影响鱼肉蛋白质的组成,且ISP蛋白分离方式一定程度上改善了鱼肉蛋白的功能特性。

木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

探究优化木棉花超氧化物歧化酶(SOD)的提取条件,建立木棉花SOD生产工艺.以木棉花花瓣为原料,采用正交实验优化超声波提取的技术参数,结合丙酮等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析提取纯化SOD,经真空冷冻干燥获得SOD成品.超声波提取的最佳工艺为料液比1∶30,功率180w,超声波处理总时间9min,浸提时间8h.沉淀杂蛋白条件为2mol/L的HCl将粗提液调节至pH为5.0,提纯SOD条件为pH4.0丙酮等电点沉淀法,纯化倍数达到5.59,经Sephadex G-75纯化,获得SOD成品,纯化倍数达到18.46.为木棉花SOD的规模化生产提供理论依据.

五味子水溶性蛋白质的提取工艺优化

目的:探讨碱提酸沉法提取五味子水溶性蛋白质的工艺条件。方法:以蛋白质提取率为评价指标,采用单因素试验和正交试验考察料液比、提取温度、提取时间及提取液p H对五味子水溶性蛋白质提取工艺的影响,分析水溶性蛋白质的等电点及分子组成。采用考马斯亮蓝Bradfrod法测定提取液中蛋白质含量。结果:五味子蛋白质的等电点3.4。最佳提取条件为料液比1∶35,提取温度35℃,提取时间2 h,提取液p H 9.5,水溶性蛋白质提取率43.62%。SDS-PAGE电泳分析表明五味子水溶性蛋白质主要含有50,40,38,21 k Da的亚基和少量18,16 k Da的亚基。结论:优选的五味子水溶性蛋白质提取工艺稳定可行,为该成分的功能性保健食品开发提供参考。

胡萝卜籽蛋白的提取工艺优化及性质研究

以胡萝卜籽为原料,采用碱提酸沉法对其中的蛋白质进行提取.通过单因素实验考察料液比、温度、pH值和时间对蛋白质提取率的影响,在此基础上通过正交实验优化出胡萝卜籽蛋白提取的最佳工艺条件,确定了胡萝卜籽蛋白最佳酸沉pH值,并对所提取的蛋白质功能性质进行了研究.结果表明:在料液比为1∶20、温度55℃、pH值为12.0、时间4 h的条件下,胡萝卜籽蛋白的提取率为42.23%,最佳酸沉pH值为4.5,吸水性为3.28 g·g^(-1),吸油性为3.09 m L·g^(-1),乳化性和起泡性相对较差.