三相法提取猪肝酯酶及其在制备D -7-ACA中的应用

酯酶广泛存在于动物、植物和微生物中,具有作用范围广、底物特异性高等特点。该酶能够催化许多含有酯、酰胺、硫酯或乙酰基的化合物的水解与合成,在生物催化领域具有重要的用途。对来源于猪肝中的酯酶采用三相分离的方法进行了提取,并利用猪肝酯酶的水解特性,研究了其催化7-氨基头孢烷酸(7-ACA)脱乙酰基制备去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA)的过程。主要研究结果:确立了三相法分离提取猪肝酯酶的方法,考察了有机溶剂种类、有机溶剂用量、硫酸铵浓度以及体系的pH和提取温度等条件对三相法分离提取猪肝酯酶的影响。实验结果表明在硫酸铵质量分数为45%、异丁醇与水相之比为1∶1、pH7.0、温度为30℃的条件下,酶活回收率为54.84%,纯化倍数为6.32倍。以猪肝酯酶为催化剂,研究了猪肝酯酶催化7-ACA脱乙酰基制备D-7-ACA,在pH7.5、温度35℃、底物浓度2%、酶添加量30 U/mL的反应条件下,7-ACA转化率达到94.33%。

血清尿酸、SIRT1、ACA、Tau蛋白与脑梗死认知功能的相关性

目的探讨血清尿酸、SIRT1、ACA、Tau蛋白水平与脑梗死患者认知功能的相关性。方法选取我院脑梗死患者68例为病例组、同期医院健康体检者68例为对照组,比较两组的临床资料、认知功能(MoCA量表、MMSE量表评分),比较两组的血清尿酸、SIRT1、ACA、Tau蛋白水平的差异并分析与MoCA、MMSE评分的关系,Logistic回归分析脑梗死的相关因素,ROC曲线分析诊断脑梗死的价值。结果两组的饮酒情况差异有统计学意义(P<0.05),而其他临床资料差异无统计学意义(P>0.05);病例组的MoCA、MMSE评分均低于对照组(P<0.05);病例组的血清尿酸、Tau蛋白水平均高于对照组,而SIRT1、ACA水平均低于对照组(P<0.05)。单因素分析结果显示SIRT1、ACA与MoCA、MMSE评分呈显著正相关(P<0.05),尿酸、Tau蛋白与MoCA、MMSE评分呈显著负相关(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示:有饮酒史、尿酸高、SIRT1低表达、ACA低表达、Tau蛋白高表达为脑梗死的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析发现,血清尿酸、SIRT1、ACA、Tau蛋白表达水平及联合预测均对脑梗死有一定预测价值;联合检测的AUC高于任一单一指标(P<0.05)。结论血清尿酸、SIRT1、ACA和Tau蛋白表达与脑梗死患者的认知功能存在相关性,各指标表达水平对脑梗死具有一定预测价值,联合预测脑梗死的价值高于单个指标。

IL⁃6、CRP、Hcy、ACA与急性脑梗死患者预后的分析

目的分析白介素⁃6(IL⁃6)、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)抗心磷脂抗体(ACA)与急性脑梗死患者预后的关系。方法分析2020年9月至2023年9月在秦皇岛市工人医院接受静脉溶栓治疗的146例急性脑梗死患者的临床资料,采用改良Rankin评分(mRS)评估患者预后并分为预后良好组(n=109例)和预后不良组(n=37例)。对比两组患者的一般资料、神经功能缺损情况(NIHSS),实验室指标[白介素⁃6(IL⁃6)、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)和抗心磷脂抗体(ACA)],应用二元Logistic回归模型分析急性脑梗死患者预后影响因素,用Pearson相关系数分析实验室指标与急性脑梗死患者预后程度的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析IL⁃6、CRP、Hcy、ACA对患者预后的预测价值。结果NIHSS评分及IL⁃6、CRP、Hcy、ACA水平预后良好组均低于预后不良组(t=2.651、6.507、10.217、7.946、8.571,P<0.05);回归分析显示:高NIHSS评分,高水平IL⁃6、CRP、Hcy、ACA是造成急性脑梗死患者预后不良的危险因素(P<0.05);前循环组患者的IL⁃6、CRP、Hcy、ACA水平均低于后循环组(t=5.314、8.547、5.219、9.087,P<0.05);小面积梗死组患者的IL⁃6、CRP、Hcy、ACA水平均低于大面积梗死组(t=10.514、21.033、15.658、11.723,P<0.05);NIHSS评分、IL⁃6、CRP、Hcy、ACA水平与患者mRS评分均呈正相关(r=0.523、0.584、0.572、0.545、0.521,P<0.05);NIHSS评分、IL⁃6、CRP、Hcy、ACA水平预测急性脑梗死预后的曲线下面积(AUC)分别为0.622、0.759、0.894、0.845、0.892,相较于NIHSS评分,IL⁃6、CRP、Hcy、ACA预测效能更高(P<0.05)。结论急性脑梗死患者预后不良与IL⁃6、CRP、Hcy、ACA水平升高有关,检测以上指标变化可预测患者预后情况。

血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA与急性脑梗死病情严重程度及预后的相关性

目的分析血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA与ACI患者病情严重程度及预后的相关性。方法采取回顾性研究,选择2021年6月至2023年6月医院收治的130例ACI患者临床资料作为研究对象。患者均接受阿替普酶静脉溶栓治疗,根据美国国立卫生研究院卒中量表评分(NIHSS)评估患者病情严重程度,将评分<16分患者临床资料纳入轻中组,将评分≥16分患者临床资料纳入重度组;治疗2周后,参照改良Rankin量表评分(mRS)评估患者预后,将评分<3分患者临床资料纳入预后良好组,将评分≥3分患者临床资料纳入预后不良组;统计患者基线资料,采用双变量相关性Pearson(N)分析,ACI患者血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平与认知功能的相关;采用二元Logistic回归分析血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA与急性脑梗死病情严重程度及预后的相关性;采用接受者操作特性曲线(ROC)分析血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平对ACI患者预后不良的预测价值。结果治疗后,ACI患者Fib、D-D低于治疗前(P<0.05);治疗后,ACI患者hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA低于治疗前(P<0.05);ACI患者治疗前的MoCA评分分低于治疗后(P<0.001);Pearson(N)分析结果显示,ACI患者血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平与MoCA评分呈负相关(r<0,P<0.05);重度组TOAST分型为心源性栓塞患者占比高于轻中度组,Fib、D-D、hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平高于轻中度组(P<0.05);二元Logistic回归分析结果显示,TOAST分型为心源性栓塞、其他原因/不明原因,血清Fib、D-D、hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA高表达是ACI患者病情为重度的危险因素(OR>1,P<0.05);预后不良组TOAST分型为心源性栓塞患者占比高于预后良好组,发病至溶栓时间长于预后良好组,Fib、D-D、hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平高于预后良好组(P<0.05);二元Logistic回归分析结果显示,TOAST分型为心源性栓塞,发病至溶栓时间长、血清Fib、D-D、hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA高表达是ACI患者预后不良的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制ROC曲线结果显示,血清hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平及联合检测ACI患者预后不良的ACU均>0.70,有一定预测价值,其中联合检测最高。结论TOAST分型、血清Fib、D-D、hs-CRP、sCD40L、β_(2)GP1、ACA水平与ACI患者病情严重程度相关,同时在此基础上发病至溶栓时间与ACI患者预后关系密切。

ACA基因启动子的克隆及功能初探

根据已知的ACA基因的 5 '端序列设计三个基因特异的反向引物 (GSP_1,GSP_2 ,GSP_3)分别与 11个简并引物 (AD1_AD11)配对 ,进行热不对称嵌套PCR(ThermalasymmetricinterlacedPCR ,TAIL_PCR)扩增 ,获得了ACA基因起始密码子上游约70 0bp的片段。为检测其表达特性 ,构建了该片段与Gus嵌合基因的表达载体pBpAG ,在真空条件下通过农杆菌介导 ,转化了植物的叶、果实、种子三种不同组织 ,Gus瞬时表达染色结果显示 ,该DNA片段具有种子特异的启动子活性。对该启动子的一些顺式元件进行了讨论。

ACA离子取代凝胶多价离子置换性能研究

考察了海藻酸 -壳聚糖 -海藻酸 ( ACA)离子取代凝胶对几种二价金属离子的置换行为。实验结果表明 ,海藻酸钙凝胶和海藻酸 -壳聚糖 -海藻酸凝胶微球 ( ACA- Ca)也能吸附 Pb2 +、Cu2 +和 Al3+,其中 Pb2 +、Cu2 +和 Al3+取代了凝胶中的 Ca2 +,并且其置换速率要大大快于离子交换树脂 ,而其平衡取代量与 ACA微胶囊相当 ,因此 ,海藻酸钙凝胶也能作为离子吸附剂应用于吸附某些重金属离子。此外 ,Pb2 +也能置换海藻酸锌中的 Zn2 +,Ca2 +能置换海藻酸亚铁中的 Fe2 +。Pb2 +对海藻酸钙凝胶中的 Ca2 +的置换不仅包括Pb2 +对 Ca2 +的置换 ,还存在对 Pb2

AsAb、AcA与反复自然流产关系的探讨

目的 探讨抗精子抗体 (AsAb) ,抗心磷脂抗体 (AcA)与反复自然流产的关系。方法 采用ELISA法测定反复自然流产病人血清中AsAb、AcA的含量。结果 流产组血清AsAb、AcA明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,出现显著性差异。结论 抗精子抗体和抗心磷脂抗体与反复自然流产有着密切的关系。

β-葡萄糖苷酶ACA微胶囊固定化实验研究

对壳聚糖为壁材的共价交联固定、海藻酸钠为壁材的包埋固定及壳聚糖和海藻酸钠共用的新型复合载体(ACA)固定的β-葡萄糖苷酶进行了对比研究,得出ACA微胶囊固定化的酶具有较好的催化活性、重复使用和低温贮藏性能。醋酸和戊二醛及CaCl2的浓度、壳聚糖和海藻酸钠用量、引发和交联时间对ACA微胶囊固定酶的形态和性能影响较大,葡萄糖转化率随醋酸与戊二醛和CaCl2浓度的增加、壳聚糖和海藻酸钠用量的增大、交联和引发时间的延长呈先增大后减小的变化趋势,并于不同特定值达到最大。

情报学学科结构的ABCA及ACA对比研究——以2000-2010年数据为例

以SCI&SSCI 2000-2010年间情报学的相关数据为样本,结合传统的ACA(作者共被引)方法,以ABCA(作者文献耦合分析)方法为研究视角,探析2000-2010情报学的学科结构,并进行ABCA与ACA的比较研究。研究探测到了情报学的几位具有较强研究活力以及广泛影响力的学者,如Thelwall,M、Leydesdorff,L、Cronin,B、White,HD、Meho,LI等。探寻到情报学的7个主要研究主题:科学计量学、网络资源管理与配置、信息检索、信息系统、知识管理、用户交互与服务、科学评价,其中科学计量学和网络资源管理与配置是2个主流研究主题;研究认为,各研究主题之间的融合还有待于进一步加强。在研究主题探测方面,ABCA是以当前活跃的作者的角度进行分析;ACA则是以对情报学产生持续影响的作者为角度。ABCA可以探寻到更多的研究主题,但ABCA与ACA探测到的主题内容没有太大出入。

GL-7-ACA酰化酶基因片段的酶谱分析及基因定位

本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp.130)染色体上克隆得到的6.8kb的GL-7-ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、Hind Ⅱ、Cla Ⅰ切点,分别具有一个Hpa Ⅰ、两个Xho Ⅰ、三个BamH Ⅰ以及四个Pst Ⅰ切点,同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究,GL-7-ACA酰化酶基因已被定位在3.0kb的B_2-B_3-Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYC184、pDR540、pUC10等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMR10和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平,测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强,即pMR10的产酶量比pMR9高一倍,而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMR11),产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。

我国情报学研究分析：以ACA为方法

ACA属于同被引分析法，其全称是作者同被引分析（Author Co—citation Analysis）。这种方法从特定学科或特定领域的核心著者的同被引入手，探讨学科结构和流派等问题。本文以ACA为方法，选取1994—2005年间的数据，对我国情报学领域的核心著者进行了同被引分析，以此揭示出我国情报学学科的结构和研究状况。

借鉴与整合:从英国ACAS看我国劳动争议调解制度改革

近年来,劳动争议处理体制改革受到了学术界的广泛关注,在人们对仲裁和诉讼关系以及制度设计详加探讨的同时,却未给予调解足够的重视。我国现有劳动争议调解制度已无法适应市场经济环境下劳动关系发展的需要。借鉴英国ACAS的制度和组织,在比较两国差异的基础上从信用的视角提出我国劳动争议调解制度改革的方案,整合现有资源,以发挥调解制度的作用,促进劳动争议的解决。

GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重级质粒pMR5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。

ACA微胶囊固定化细胞发酵木糖醇

考察了以游离酵母细胞、海藻酸钠固定化细胞、壳聚糖 /海藻酸钠 (ACA)微胶囊固定化细胞的木糖醇发酵 ,发现与游离、海藻酸钠固定化发酵相比 ,微囊化发酵转化率更高、更稳定。其转化率稳定在 65 %左右 ,发酵周期约为 5 0h。

幽门螺杆菌vacA基因重组表达的包涵体复性及ELISA方法的建立

目的:通过对vacA重组工程菌表达产物包涵体的变性、复性,提高表达产物的生物学活性,建立ELISA方法,讨论VacA抗原规模生产的可行性.方法:利用已经构建的表达VacA抗原的工程菌,用IPTG诱导,表达的包涵体通过系列条件的变性、复性、透析,并经活性鉴定.所制抗原用以包被ELISA板,建立ELISA方法并确定抗原的生物学活性.结果:重组工程菌可表达Mr3300的目的蛋白,表达形式为包涵体,条件优化后的包涵体经SDS-PAGE显示纯度达95%以上,活性经ELISA法测定正常人126例和blot电泳测定结果符合率为97.1%.结论:包涵体变性复性后生物活性大幅度提高,并且具有良好的重复性和稳定性,可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原及临床检测的诸多方法的抗原原料.

金属螯合载体一步纯化与固定化GL-7ACA酰化酶

采用金属鳌合亲和层析技术,以EIP-ARG-IDA-Co^2＋为载体,从可溶性总蛋白中一步分离纯化具有His-tag标签的GL-7ACA酰化酶.在此基础上进行了固定化方面的研究,其固定化最适条件是150-200U/g给酶量与载体比,固定化时间16 h,固定化介质pH=7.0.固定化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为8.0.同时还考察了固定化酶的热稳定性、重复利用性及载体的重复使用等特性.

中西医结合治疗对原因不明复发性流产血清同型半胱氨酸(Hcy)、抗心磷脂抗体(ACA)水平的影响

目的：探讨分析中西医结合治疗对原因不明复发性流产患者血清同型半胱氨酸（Hcy）、抗心磷脂抗体（ACA）水平的影响。方法：选择医院收治的原因不明复发性流产患者103例，将其随机分为观察组53例、对照组50例，对照组采取传统保胎方案以及肝素钙治疗，观察组在对照组基础上给予固肾安胎方治疗，比较两组临床疗效、Th1／Th2细胞因子、血清Hcy以及ACA表达变化情况。结果：观察组治疗总有效率显著高于对照组（P〈0．05）；两组患者治疗前IL-12、IL10水平无显著差异（P〉0．05），治疗后两组患者IL-12水平显著降低（P〈0．05），而IL-10水平显著升高（P〈0．05），且观察组变化程度显著优于对照组（P〈0．05）；治疗前两组患者血清Hcy水平无显著差异（P〉0．05），治疗后两组患者血清Hcy水平显著降低（P〈0．05），且治疗后观察组血清Hcy水平显著低于对照组（P〈0．05）；治疗前两组患者ACA阳性率无显著差异（P〉0．05），治疗后观察组患者ACA阳性率显著降低（P〈0．05），而对照组与治疗前比较降低程度无显著差异（P〉0．05），治疗后观察组患者ACA阳性率显著低于对照组（P〈0．05）。结论：中西医结合治疗原因不明复发性流产具有着显著的临床疗效，可有效调节机体Th1、Th2细胞因子平衡，并降低母体血清Hcy水平以及ACA表达阳性率，从而有效促进成功妊娠。

产GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达

为了实现GL 7 ACA酰化酶在大肠杆菌中的成功表达 ,将GL 7 ACA酰化酶基因用PCR的方法去除其信号肽序列 ,并将其连接到质粒pET 2 8a ,通过筛选得到了表达GL 7 ACA酰化酶的重组菌BL2 1 (DE3) /pET ACY。分别考察了诱导温度、菌浓 (OD60 0 )、诱导剂IPTG的用量等因素对重组菌表达GL 7 ACA酰化酶的影响。在优化条件下 ,GL 7 ACA酰化酶酶活可达 2 66U/L。GL 7 ACA酰化酶经一步DEAE Sepharose纯化即可达到 80 %的纯度 ,酶活收率为 5 0 %。

中国大陆地区教育技术学科范式可视化研究——基于ACA方法的分析

ACA方法是范式可视化研究的重要方法,也为范式问题讨论提供了定量研究的新思路。本文运用ACA方法,选取"中国期刊全文数据库"1989—2009数据,对我国大陆地区教育技术学科领域的40位核心作者进行共被引分析,以揭示我国教育技术学研究的基本架构。

7-ACA清洁生产的潜力研究

7-ACA是头孢菌素关键性中间体。近年来,头袍菌素类抗生素使用越来越多,临床应用证明它是一类抗菌谱广、抗菌活性强,疗效高和毒性低的抗生素。然而,中国在7-ACA生产过程中普遍面临着污染重、废弃物成分复杂、治理难度大的发展"瓶颈"。本文从清洁生产源头消减的角度,分析了7-ACA清洁生产的潜力与机会,并在国内7-ACA生产现状下,提出了化学法清洁生产方案的建议。