富血小板血浆与同种异体骨复合对兔感染性骨缺损处血管化作用及成骨效果的影响

目的探讨富血小板血浆(PRP)与同种异体骨(AB)复合对兔感染性骨缺损处血管化作用及成骨效果的影响。方法选择健康SPF级新西兰大白兔140只,兔龄12~16周,体质量2.01~2.10 kg。其中20只动物用于制备PRP,通过低速离心法制备PRP。构建新西兰大白兔感染性骨缺损模型;动物实验分为4组及处理,即空白对照组(Control组,不做处理)、植入PRP组(PRP组,植入PRP)、植入AB组(AB组,植入AB)、植入PRP复合AB组(PRP+AB组,植入PRP和AB),每组30只。分别在1周、4周、12周时行X射线检查、Micro CT检查,并处死动物,采用酶联免疫吸附分析实验检测动物血清中C-反应蛋白(CRP)的水平;采用聚合酶链式反应(PCR)检测骨缺损区域中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素1(ANGPT1)的mRNA的表达,免疫组化检测ALP和OCN的表达,免疫荧光检测ANGPT1、VEGF的表达。结果Control组样本在1、4、12周时均存在明显的不同程度的骨缺损,并且骨缺损无愈合、无好转的趋势。PRP组、AB组、PRP+AB组大白兔的骨缺损区域出现不同程度的愈合,植入材料与骨结合良好、致密,未出现明显坏死骨;尤以PRP+AB组骨缺损修复最为明显。X射线评分与同时点Control组(1、4、12周3.07分±0.15分、4.21分±0.28分、8.03分±0.23分)相比,PRP组、AB组、PRP+AB组骨缺损区域X射线评分(PRP组3.72分±0.21分、5.14分±0.37分、9.27分±0.22分;AB组4.65分±0.26分、6.49分±0.43分、10.34分±0.29分;PRP+AB组5.31分±0.35分、7.25分±0.51分、11.19分±0.64分)明显升高,且PRP+AB组X射线评分更高;差异均有统计学意义(均P<0.05)。与同时点Control组(1、4、12周0.01±0.01、0.02±0.02、0.05±0.03)相比,PRP组、AB组、PRP+AB组骨缺损区域BV/TV(PRP组1、4、12周BV/TV 0.02±0.02、0.06±0.03、0.09±0.04;AB组1、4、12周0.02±0.01、0.07±0.04、0.16±0.03;PRP+AB组1、4、12周0.04±0.03、0.13±0.05、0.24±0.07)明显升高,且PRP+AB组骨缺损区域BV/TV更高;差异均有统计学意义(均P<0.05)。病理组织学评分有同样的结果。与同时点Control组(1、4、12周18.29 mg/L±0.44 mg/L、15.04 mg/L±0.48 mg/L、13.91 mg/L±0.53 mg/L)相比,PRP组、AB组、PRP+AB组大白兔血清中CRP含量(PRP组1、4、12周17.04 mg/L±0.37 mg/L、12.32 mg/L±0.52 mg/L、10.22 mg/L±0.47 mg/L;AB组1、4、12周16.25 mg/L±0.31 mg/L、10.21 mg/L±0.36 mg/L、8.24 mg/L±0.35 mg/L;PRP+AB组1、4、12周15.41 mg/L±0.28 mg/L、8.91 mg/L±0.49 mg/L、5.16 mg/L±0.38 mg/L)明显降低,ALP、OCN、ANGPT1、VEGF mRNA和其蛋白表达水平明显升高,且PRP+AB组大白兔血清中CRP含量降低更显著,ALP、OCN、ANGPT1、VEGF mRNA和其蛋白表达水平升高更明显;差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PRP复合AB能明显促进兔感染性骨缺损区域中ALP和OCN、ANGPT1和VEGF的表达,推动骨缺损处的成骨和成血管效应。