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湘云鲫2号肠道干细胞标志物LGR6分子特征及其多克隆抗体制备
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作者 胡聂文 唐仪阳 +1 位作者 冯孟哲 周泽军 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2692-2701,共10页
【目的】克隆湘云鲫2号肠道干细胞标志物LGR6(3nLGR6)并制备多克隆抗体,为从肠道干细胞角度揭示湘云鲫2号的抗病机制提供技术支持。【方法】通过PCR扩增3nLGR6基因开放阅读框(ORF)序列,采用InterProScan、TMHMM Server 2.0、ExPASy Prot... 【目的】克隆湘云鲫2号肠道干细胞标志物LGR6(3nLGR6)并制备多克隆抗体,为从肠道干细胞角度揭示湘云鲫2号的抗病机制提供技术支持。【方法】通过PCR扩增3nLGR6基因开放阅读框(ORF)序列,采用InterProScan、TMHMM Server 2.0、ExPASy Proteomics Server、SignalP 5.0、PSORTⅡPrediction、SoftBerry-Psite、SWISS-MODEL及MEGA 11.0等在线软件进行生物信息学分析;利用原核表达系统表达融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫BALB/c雌性小鼠制备多克隆抗体,基于免疫组织化学分析3nLGR6在湘云鲫2号肠组织中的分布情况。【结果】3nLGR6基因ORF序列全长2874 bp,共编码957个氨基酸残基;3nLGR6蛋白理论分子量约105.4 kD,理论等电点(p I)为5.44,在其N端有1个亮氨酸重复序列结构域,C端存在1个7次跨膜结构的GPCR结构域,且在18Gly与19Ser间存在信号肽切割位点(Sec信号肽)。3nLGR6与其他硬骨鱼类的LGR6氨基酸序列高度同源,其中与二倍体斑马鱼的相似性为92.28%。与鱼类LGR6作用密切的基因有LGR4、RNF43、RSPO2、CTNNB1、APC和CTNNA1,主要涉及Wnt信号通路和Adherens junction信号通路。以纯化得到的融合蛋白3nLGR6免疫BALB/c雌性小鼠,能成功制备出小鼠抗3nLGR6多克隆抗体,且免疫组化试验结果显示该抗体可特异性识别湘云鲫2号肠道组织中的3nLGR6。【结论】3nLGR6与其他物种的LGR6氨基酸序列高度同源,其结构和功能相对较保守。制备获得的小鼠抗3nLGR6多克隆抗体能特异性识别湘云鲫2号肠道内源性3nLGR6,为后续深入研究LGR6在硬骨鱼组织中的表达情况及揭示LGR6在肠道黏膜稳态中的作用机制提供了技术支撑。 展开更多
关键词 湘云鲫2号 异源三倍体鱼 肠道干细胞 LGR6 原核表达 多克隆抗体
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异源三倍体鲫鲂的遗传组成和生殖特性观察 被引量:5
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作者 覃钦博 戴婧 +1 位作者 刘少军 刘筠 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期356-361,共6页
红鲫属鲤亚科,其染色体数目为2n=100;团头鲂属于鲌亚科,其染色体数目为2n=48。在红鲫(♀)×团头鲂(♂)的远缘杂交F1代中获得了异源三倍体鲫鲂和异源四倍体鲫鲂。本研究对异源三倍体鲫鲂进行了染色体核型分析、染色体FISH杂交检测和... 红鲫属鲤亚科,其染色体数目为2n=100;团头鲂属于鲌亚科,其染色体数目为2n=48。在红鲫(♀)×团头鲂(♂)的远缘杂交F1代中获得了异源三倍体鲫鲂和异源四倍体鲫鲂。本研究对异源三倍体鲫鲂进行了染色体核型分析、染色体FISH杂交检测和性腺结构观察,结果表明:1)异源三倍体鲫鲂的染色体数目为3n=124,染色体核型公式为31m+45sm+26st+22t,染色体组由2套红鲫染色体和1套团头鲂染色体组成;2)利用红鲫特有重复序列为探针进行FISH杂交,红鲫的100条染色体均被标记上荧光信号,而团头鲂的染色体均未标记上荧光信号,异源三倍体鲫鲂中有100条染色体被标记上荧光信号,说明异源三倍体鲫鲂含有2套红鲫来源的染色体组;3)异源三倍体鲫鲂的性腺发育异常,其卵巢型和精巢型性腺发育呈现出退化的特征。研究还讨论了异源三倍体鲫鲂的形成机制。实验结果为鱼类远缘杂交和多倍体鱼研究提供了实验数据,在鱼类遗传育种方面具有重要意义。 展开更多
关键词 远缘杂交 异源三倍体 不育 fish 体鱼
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大白菜—结球甘蓝异源三倍体(ACC)基于25S rDNA的FISH分析
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作者 轩淑欣 赵玉靖 +3 位作者 王彦华 郄丽娟 李晓峰 申书兴 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2402-2410,共9页
应用25S rDNA-FISH对大白菜—结球甘蓝异源三倍体(ACC)中期染色体组成和减数分裂染色体行为进行了分析,并进行了花粉特性和结实性的研究。结果表明,大白菜—结球甘蓝异源三倍体染色体数为28,含有9个25S rDNA位点,其中4个来自结球甘蓝4号... 应用25S rDNA-FISH对大白菜—结球甘蓝异源三倍体(ACC)中期染色体组成和减数分裂染色体行为进行了分析,并进行了花粉特性和结实性的研究。结果表明,大白菜—结球甘蓝异源三倍体染色体数为28,含有9个25S rDNA位点,其中4个来自结球甘蓝4号和7号染色体;5个来自大白菜1~5号染色体;A、C基因组间不同染色体同源程度不同,减数分裂终变期常形成单价体、二价体和三价体等不同的联会方式;中期Ⅰ和中期Ⅱ存在游离染色体;后期Ⅰ和后期Ⅱ染色体分离不均衡,并存在染色体落后或丢失;末期Ⅱ有微核产生。异源三倍体花粉整齐度和生活力远低于其二倍体亲本,自交及与亲本甘蓝(CC)回交的结籽率都极低,仅为0.01%。 展开更多
关键词 大白菜 结球甘蓝 异源三倍体 fish
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Characterization of H3 methylation in regulating oocyte development in cyprinid fish 被引量:3
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作者 Rong Zhou Rujie Shang +2 位作者 Dingbin Gong Xiujuan Xu Shaojun Liu 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期829-837,共9页
Histone post-modifications are important epigenetic markers involved in multiple cellular processes via regulation of gene transcription or remodeling of chromatin structure. Oocyte development is a critical process u... Histone post-modifications are important epigenetic markers involved in multiple cellular processes via regulation of gene transcription or remodeling of chromatin structure. Oocyte development is a critical process under rigorous control to prevent the generation of aberrant gametes. However, the regulatory mechanism of oocyte early development is not well-understood due to the tiny size and poor distinguishability of the gonad in juvenile stages. Here, two cyprinid hybrid fishes, a sterile allotriploid fish and a gynogenetic hybrid fish with delayed oocyte development, provided research models to investigate the mechanisms involved. We used cytogenetic and molecular methods to confirm the pachytene arrest of oocytes in allotriploid fish and gynogenetic hybrid fish. On the basis of these developmental differences, we screened 21 different histone H3 modifications by ELISA and found that four modifications(H3 K4 me3, H3 K9 me3, H3 K79 me, and H3 K79 me3) differed significantly in the two cyprinid hybrid fishes. Changes in histone methylation at the three residues(H3 K4, K9, K79) were caused by specific methyltransferases and demethylases. Our results provide new insights into the epigenetic regulation of oocyte early development in fish, a process critical for understanding of reproductive biology and with practical applications in the aquacultural breeding industry. 展开更多
关键词 HISTONE METHYLATION OOCYTE development STERILITY allotriploid fish
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