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Microbial Community in the Forestomachs of Alpacas (Lama pacos) and Sheep (Ovis aries) 被引量:3
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作者 PEI Cai-xia LIU Qiang +3 位作者 DONG Chang-sheng LI Hong-quan JIANG Jun-bing GAO Wen-jun 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第2期314-318,共5页
Four 2-yr old alpacas ((48±2.3) kg) and four 2-yr old sheep ((50±1.7) kg) were used to study the pH and microbial community of forestomach from alpacas (Lama pacos) and sheep (Ovis aries) fed fre... Four 2-yr old alpacas ((48±2.3) kg) and four 2-yr old sheep ((50±1.7) kg) were used to study the pH and microbial community of forestomach from alpacas (Lama pacos) and sheep (Ovis aries) fed fresh alfalfa as the sole forage at low altitude (793 m). The forestomach fluid was taken anaerobically via the esophagus. The electric pH meter and quantitative polymerase chain reaction systems were used to study the the pH and microbial community of forestomach. The results showed that the mean pH of forestomach fluid from alpacas was higher than that from sheep (P〈0.01). The percentages of methanogens and Ruminococcusflavefaciens to total bacterial were lower in the forestomach of alpacas than that in the rumen of sheep, while the percentage of fungi and Fibrobacter succinogenes were higher. The percentage of protozoa was similar in the forestomach of alpacas and sheep. These differences can partly explain the reason that alpacas were lower methane production than sheep. 展开更多
关键词 forestomach microbial community alpacaS SHEEP ALFALFA
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Effects on the quality of frozen-thawed alpaca(Lama pacos)semen using two different cryoprotectants and extenders 被引量:1
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作者 AlexeiSantiani WilfredoHuanca +3 位作者 RómuloSapana TeodosioHuanca NéstorSepúlveda RaúlSánchez 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2005年第3期303-309, ,共7页
Aim: To evaluate two extenders and two cryoprotectant agents (CPA) for alpaca semen cryopreservation. Methods: Semen samples were obtained from four adult alpacas (Lama pacos) and frozen using extender Ⅰ (TRIS... Aim: To evaluate two extenders and two cryoprotectant agents (CPA) for alpaca semen cryopreservation. Methods: Semen samples were obtained from four adult alpacas (Lama pacos) and frozen using extender Ⅰ (TRIS, citrate, egg yolk and glucose) or extender Ⅱ (skim milk, egg yolk and fructose), each containing either glycerol (G) or ethylene glycol (EG) as CPA. Consequently, four groups were formed: 1) extender Ⅰ-G; 2) extender Ⅰ-EG; 3) extender Ⅱ-G; and 4) extender Ⅱ-EG. Semen was diluted in a two-step process: for cooling to 5 ℃ (extenders without CPA), and for freezing (extenders with CPA). Viability and acrosome integrity were assessed using trypan blue and Giemsa stains. Results: When compared, the motility after thawing was higher (P 〈 0.05) in groups Ⅱ-EG (20.0 %±6.7 %) and Ⅱ-G (15.3 %±4.1%) than that in groups Ⅰ-G (4.0 %±1.1%) and Ⅰ-EG (1.0 %±1.4 %). Viable spermatozoa with intact acrosomes in groups Ⅱ-EG (18.7 %±2.9 %) and Ⅱ-G (12.7 %±5.9 %) were higher than that in groups Ⅰ-G (5.7 %±1.5 %) and Ⅰ-EG (4.0 %±1.0 %). Conclusion: The skim milk- and egg yolk-based extenders containing ethylene glycol or glycerol to freeze alpaca semen seems to promote the survival of more sperm cells with intact acrosomes than the other extenders. (Asian J Androl 2005 Sep; 7: 303-309) 展开更多
关键词 cryopreservation glycerol ethylene glycol EXTENDERS alpaca spermatozoa
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Cloning and Expression Level Analysis of Melanocyte-stimulating Hormone Receptor 1 Gene(MC1R) in Alpacas with Different Coat Color
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作者 REN Yu-hong REN Bin +4 位作者 FAN Rui-wen ZHU Zhi-wei YANG Yong LI Hui DONG Chang-sheng 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期21-25,共5页
Specific primers for the MC1R gene of alpacas(GenBank EU1358800) were designed to amplify the cDNA sequence using RT-PCR to seek variation in the sequence and explore the relationship between the expression level of M... Specific primers for the MC1R gene of alpacas(GenBank EU1358800) were designed to amplify the cDNA sequence using RT-PCR to seek variation in the sequence and explore the relationship between the expression level of MC1R gene and alpaca coat color.The MC1R gene from white alpaca was cloned successfully and sequence analysis verified that the MC1R gene,encoding 317 amino acids,was 1081 bp in length.Compared with the existing sequence in GenBank,sequence identity was 99.9%and 7 mutations were found.Primers,designed from the sequence obtained,were used to assess the relative expression of MC1R in alpacas of different coat color using QRT-PCR and SPSS 13.0 software.Relative expression of MC1R in the skin of brown alpacas was 4.32 times higher than that in white alpacas after normalization with GAPDH(P【0.01),indicating that MC1R expression may be related to coat color of alpacas. 展开更多
关键词 alpaca melanocyte-stimulating hormone receptor 1 gene(MC1R) cloning QRT-PCR gene expression level
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Molecular Identification of Shiga-Toxin Producing and Enteropathogenic <i>Escherichia coli</i>(STEC and EPEC) in Diarrheic and Healthy Young Alpacas
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作者 Lorena Mori Rosa Perales +4 位作者 Jorge Rodríguez Carlos Shiva Ysabel Koga Geraldine Choquehuanca Cesar Palacios 《Advances in Microbiology》 2014年第7期360-364,共5页
Isolation and biochemical and molecular identification of 303 strains of Escherichia coli obtained from diarrheic and healthy young alpacas of Puno-Peru, were realized. PCR amplification for 7 virulence factor genes a... Isolation and biochemical and molecular identification of 303 strains of Escherichia coli obtained from diarrheic and healthy young alpacas of Puno-Peru, were realized. PCR amplification for 7 virulence factor genes associated with STEC, STEC O157:H7, EPEC: sxt1, sxt2, rfbO157, fliCH7, hlyA, eae y bfp were determined. A total of 39 strains (12.88%) showed amplification for one or more of these genes. Twenty three strains (59%) were classified as STEC and 16 strains (41%) as EPEC. An 88.18% (34/39) of STEC and EPEC strains were obtained from healthy alpacas and only 11.82% (5/39) from diarrheic alpacas considering this specie as potential zoonotic reservoir of STEC and EPEC. 展开更多
关键词 Shiga Toxin Producing ESCHERICHIA COLI Enteropathogenic ESCHERICHIA COLI Diarrhea YOUNG alpacaS
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Ribosomal proteins expression and phylogeny in alpaca (<i>Lama pacos</i>) skin
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作者 Junming Bai Ruiwen Fan +3 位作者 Shanshan Yang Yuankai Ji Jianshan Xie Chang-Sheng Dong 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2012年第3期231-237,共7页
Ribosomal proteins (RP) has been reported as a central player in the translation system, and are required for the growth and maintenance of all cell kinds. RP genes form a family of homologous proteins that express in... Ribosomal proteins (RP) has been reported as a central player in the translation system, and are required for the growth and maintenance of all cell kinds. RP genes form a family of homologous proteins that express in the stable pattern and were used for phylogenetic analysis. Here we constructed a cDNA library of alpaca skin and 13,800 clones were sequenced. In the cDNA library, RP genes from skin cDNA library of alpaca were identified. Then 8 RP genes were selected at random and built the phylogenetic trees from the DNA sequences by using parsimony or maximum likelihood methods for molecular and evolutionary analysis of ribosomal proteins. The results showed that the 42 RP genes of alpaca have been expressed in alpaca skin. They were highly conserved. The phylogeny inferred from all these methods suggested that the evolutionary distances of alpaca RP genes were closer to rat. 展开更多
关键词 RIBOSOMAL Protein EXPRESSION Phylogenetic Tree alpaca
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Foxj2基因对羊驼黑素细胞黑色素生成的影响
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作者 段志成 董常生 +3 位作者 范瑞文 谢建山 杨玉静 聂瑞强 《山西农业科学》 2023年第6期702-708,共7页
叉头框转录蛋白家族成员Foxj2(Forkhead Box J2)基因在U87细胞和U251细胞中与上皮-钙黏蛋白(E-cadherin,CDH1)的表达呈正相关,且CDH1参与黑色素的生成具有介导表皮-黑色素单位完整性的作用。为了验证Foxj2基因参与调节羊驼黑素细胞中黑... 叉头框转录蛋白家族成员Foxj2(Forkhead Box J2)基因在U87细胞和U251细胞中与上皮-钙黏蛋白(E-cadherin,CDH1)的表达呈正相关,且CDH1参与黑色素的生成具有介导表皮-黑色素单位完整性的作用。为了验证Foxj2基因参与调节羊驼黑素细胞中黑色素的生成,采用PCR方法验证Foxj2基因在羊驼皮肤内的表达情况;采用生物信息学方法分析Foxj2与黑色素生成相关基因TYR以及Foxj2与黑色素的生成相关蛋白的关联性;合成Foxj2的siRNA和空载siRNA,构建沉默siRNA的羊驼黑素细胞模型,观察记录细胞的转染情况;使用Real-time PCR方法检测各组羊驼黑素细胞中Foxj2基因和黑色素生成相关基因TYR的mRNA变化;通过Western blot的方法检测比较各组细胞中Foxj2与TYR的蛋白水平的变化;提纯各组细胞的3种黑色素(总黑素、真黑素、褐黑素),使用酶标仪测各组细胞中3种黑色素的OD值并比较变化。结果表明,羊驼黑素细胞中检测到Foxj2基因表达;生物信息学分析得出,Foxj2基因在细胞内涉及运输氨基酸调控、生长因子等一系列作用,在Foxj2中存在的Forkhead结构域可以与TYR基因启动子存在结合位点;Real-time PCR结果显示,和NC组相比,沉默组中Foxj2的mRNA表达量极显著降低24990%,TYR的表达量显著升高35%;Western blot结果显示,沉默组Foxj2的蛋白相对表达水平极显著降低25%,TYR的蛋白相对表达水平极显著升高25%。酶标仪波长分析显示,与NC组相比,沉默组的总黑素相对表达水平极显著升高88.0%,真黑素相对表达水平极显著升高21.8%,褐黑素相对表达水平极显著升高21.6%。抑制羊驼黑素细胞中Foxj2基因的转录可以升高羊驼黑素细胞中黑色素的生成,并且对黑色素生成的主要调控基因TYR起促进作用,说明Foxj2基因可能在羊驼黑素细胞中对于黑色素的生成起着调控作用。 展开更多
关键词 Foxj2 SIRNA TYR 生物信息学 羊驼黑素细胞 黑色素
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动物骨骼标本制作中脱脂漂白方法的探讨——以羊驼骨骼为例
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作者 丁常根 杨兴林 冯平 《动物医学进展》 北大核心 2023年第12期127-130,共4页
为了使骨骼标本经久耐用,寻找一种降低骨骼损伤且能高效脱脂漂白的方法,分别以210日龄雄性羊驼的大小相近的10对肋骨和全身其他骨骼为研究对象,开展了温度、氨水浓度及作用时间对动物骨骼的脱脂漂白效果试验。首先设置不同温度组(20、25... 为了使骨骼标本经久耐用,寻找一种降低骨骼损伤且能高效脱脂漂白的方法,分别以210日龄雄性羊驼的大小相近的10对肋骨和全身其他骨骼为研究对象,开展了温度、氨水浓度及作用时间对动物骨骼的脱脂漂白效果试验。首先设置不同温度组(20、25、30、35℃),利用100 mL/L H_(2)O_(2)分别与2、4、6、8、10 mL/L氨水混合后进行脱脂漂白,4 h后观察效果,筛选出100 mL/L的H_(2)O_(2)和最适氨水浓度混合脱脂漂白溶液,确定最适温度;进一步对不同类型的骨骼(后肢骨、前肢骨、头骨、肋骨、细小骨)用筛选出的脱脂漂白溶液在最适温度条件下开展脱脂漂白试验,记录其脱脂漂白的最佳时间。结果表明,100 mL/L H_(2)O_(2)与6 mL/L氨水混合溶液,在25~30℃范围内时对羊驼肋骨的脱脂漂白效果最佳,脱脂漂白时间为4 h;对后肢骨、前肢骨、头骨、肋骨、细小骨等标志性骨骼在9、8、6、4、2 h时可达到最佳脱脂漂白效果。100 mL/L H_(2)O_(2)与6 mL/L氨水在25~30℃具有较好的脱脂漂白效果,其最佳脱脂漂白的时间与骨头的大小、密度、骨髓腔容量呈正相关性。 展开更多
关键词 羊驼 骨骼标本 脱脂 漂白 氨水
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不同毛色羊驼皮肤中Agouti和PMEL基因表达与毛纤维中黑色素含量的相关性研究
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作者 刘学玮 黄昀巍 +1 位作者 迟志端 张俊珍 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第9期6-11,共6页
为研究羊驼(Vicugna pacos)皮肤中控制黑色素生成的鼠灰色基因(Agouti Signaling gene,Agouti)和前黑素小体蛋白基因(premelanosome protein gene,PMEL)的表达量与毛纤维中黑色素含量的相关性,试验从不同毛色羊驼皮肤差异表达基因中筛... 为研究羊驼(Vicugna pacos)皮肤中控制黑色素生成的鼠灰色基因(Agouti Signaling gene,Agouti)和前黑素小体蛋白基因(premelanosome protein gene,PMEL)的表达量与毛纤维中黑色素含量的相关性,试验从不同毛色羊驼皮肤差异表达基因中筛选主要毛色相关基因。用紫外分光光度法测定白色、棕色和黑色羊驼毛纤维中的黑色素含量,并用实时定量PCR(qRT-PCR)法和Fisher法对Agouti与PMEL的相对表达量与毛纤维中黑色素的含量的相关性进行分析。结果显示,23个毛色基因在白色和黑色羊驼皮肤中呈差异表达,白色和褐色皮肤中Agouti的mRNA表达显著高于黑色皮肤中Agouti的表达;PMEL在羊驼黑色皮肤中的表达高于棕色皮肤和白色皮肤中的表达(P<0.05)。Agouti与PMEL的表达量均与毛纤维中黑色素含量相关。本研究为揭示羊驼毛色的分子机制提供理论基础,为分子育种提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 羊驼毛色 黑色素含量 酪氨酸酶家族 前黑素小体蛋白基因 鼠灰色基因
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羊驼消化系统特性及营养需求
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作者 王兵 马得莹 《饲料博览》 2023年第4期25-30,共6页
羊驼原产于南美洲环境差、海拔高的平原地区。作为秘鲁等国家全民普遍养殖的家畜,羊驼凭借其优质的驼毛和高营养的肉、奶,被越来越多的国家引进以丰富动物物种。由于羊驼原产地独特的气候环境和地理条件,不同的引入国家需要对其饲养管... 羊驼原产于南美洲环境差、海拔高的平原地区。作为秘鲁等国家全民普遍养殖的家畜,羊驼凭借其优质的驼毛和高营养的肉、奶,被越来越多的国家引进以丰富动物物种。由于羊驼原产地独特的气候环境和地理条件,不同的引入国家需要对其饲养管理进行调整。我国羊驼饲养以粗饲料为主,混以精饲料并补充维生素、矿物质等。但不同地区羊驼营养需求也不同。为了更好地配制羊驼养殖的全混合饲料,对羊驼区别于牛、羊等普通反刍家畜的消化系统特性和其在不同国家的营养需求进行了综述,为后续配合羊驼全混合饲料提供依据。 展开更多
关键词 羊驼 消化系统 营养需求
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一例羊驼感染支原体的病例报告
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作者 蓝间媛 李驰 +4 位作者 巴娟 张先东 罗丽霞 刘进芳 侯月娥 《广东畜牧兽医科技》 2023年第5期64-68,共5页
该文对珠海台创园羊驼养殖基地出现的羊驼死亡病例进行病理剖检、组织病理学和血液学检查、分子生物学检测。血常规及生化检查提示羊驼出现炎症,尸体剖检和切片检查显示多器官充血和出血,通过PCR及序列测定确认该羊驼存在念珠菌性肺支... 该文对珠海台创园羊驼养殖基地出现的羊驼死亡病例进行病理剖检、组织病理学和血液学检查、分子生物学检测。血常规及生化检查提示羊驼出现炎症,尸体剖检和切片检查显示多器官充血和出血,通过PCR及序列测定确认该羊驼存在念珠菌性肺支原体感染。本文通过对该病例的确诊,积累了同类疫病防控的经验。 展开更多
关键词 羊驼 支原体 病例报告
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羊驼酪氨酸酶基因家族在不同毛色个体中的基因表达水平 被引量:35
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作者 高莉 董常生 +5 位作者 赫晓燕 贺俊平 耿建军 范瑞文 朱芷薇 游蓉丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期895-899,共5页
黑色素对动物毛色的形成起重要作用,酪氨酸酶基因家族成员参与了黑色素的合成。为了探索羊驼酪氨酸酶基因家族的基因表达与其毛色之间的相关性,本研究利用实时荧光定量PCR技术分析了不同毛色羊驼酪氨酸酶基因家族成员TYR、TRP1和TRP2的... 黑色素对动物毛色的形成起重要作用,酪氨酸酶基因家族成员参与了黑色素的合成。为了探索羊驼酪氨酸酶基因家族的基因表达与其毛色之间的相关性,本研究利用实时荧光定量PCR技术分析了不同毛色羊驼酪氨酸酶基因家族成员TYR、TRP1和TRP2的相对基因表达量。研究结果显示:棕色羊驼中的TYR、TRP1和TRP2的mRNA相对表达量经内参基因校正后分别是白色羊驼中的13.669倍、3.417倍和8.593倍。结论表明棕色羊驼中酪氨酸酶基因家族3种成员的基因表达水平均高于白色羊驼,揭示了羊驼TYR基因家族成员的基因表达量与其毛色表型具有相关性。 展开更多
关键词 羊驼 TYR TRP1 TRP2 实时荧光定量PCR
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黑素皮质素受体1(MC1R)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位研究 被引量:18
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作者 任玉红 杨刚 +2 位作者 范瑞文 朱芷葳 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1049-1055,共7页
旨在通过研究黑素皮质素受体1(MC1R)在羊驼皮肤组织中的定位与表达,探讨其在羊驼毛色形成中的作用机制及与毛色的相关性。选用成年白色羊驼与棕色羊驼为研究对象,采用免疫组织化学方法及免疫印迹法(Western blotting),对MC1R在羊驼皮肤... 旨在通过研究黑素皮质素受体1(MC1R)在羊驼皮肤组织中的定位与表达,探讨其在羊驼毛色形成中的作用机制及与毛色的相关性。选用成年白色羊驼与棕色羊驼为研究对象,采用免疫组织化学方法及免疫印迹法(Western blotting),对MC1R在羊驼皮肤中的表达进行定位和定量分析。结果,(1)免疫组化结果显示,MC1R蛋白在白色和棕色羊驼皮肤表皮、毛囊周围外根鞘组织、毛乳头以及毛球周围都呈阳性着色。在棕色羊驼,阳性表达部位主要分布于毛球顶部及表皮,呈强阳性着色。在白色羊驼,阳性表达部位主要在外根鞘及表皮,毛球部表达呈弱阳性。MC1R在棕色羊驼皮肤组织中极显著表达(P<0.01)。(2)Western blotting结果显示,羊驼皮肤组织粗蛋白提取物中存在分子量约35ku与兔抗MC1R多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,且棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼,差异极显著(P<0.01)。MC1R在羊驼皮肤组织中的定位与表达量的不同与羊驼毛色表型之间存在一定的相关性。 展开更多
关键词 黑素皮质素受体1(MC1R) 免疫组化 免疫印迹 羊驼皮肤 表达
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β-catenin在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位 被引量:17
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作者 于秀菊 董常生 +4 位作者 范阔海 贺俊平 姜俊兵 朱芷葳 董彦君 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期335-340,共6页
旨在研究β-catenin在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色的关系。以成年白色和棕色羊驼为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术、Western blot和免疫组织化学技术,对β-catenin在白色和棕色羊驼皮肤中mRNA、蛋白表达水平和定位... 旨在研究β-catenin在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色的关系。以成年白色和棕色羊驼为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术、Western blot和免疫组织化学技术,对β-catenin在白色和棕色羊驼皮肤中mRNA、蛋白表达水平和定位进行研究。实时荧光定量PCR结果显示,β-catenin在棕色羊驼皮肤组织中的相对基因表达量是白色羊驼皮肤组织的1.662倍;Western blot结果显示,羊驼皮肤组织粗蛋白提取物中存在分子量约85 ku与兔抗β-catenin多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示,β-catenin在羊驼皮肤的表皮、毛乳头、毛根鞘和皮脂腺中表达,根据光密度值得出,除皮脂腺之外,在表皮、毛乳头和毛根鞘的表达差异极显著(P<0.01)。结果提示β-catenin在白色和棕色羊驼皮肤组织中定位以及表达的差异,表明β-catenin参与毛色形成。 展开更多
关键词 Β-CATENIN 羊驼 实时荧光定量PCR WESTERN BLOT 免疫组织化学
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α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对羊驼皮肤黑素细胞增殖和黑素生成的影响 被引量:15
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作者 于志慧 白瑞 +4 位作者 范瑞文 杨刚 董彦君 贺俊平 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1095-1101,共7页
旨在研究α-黑素细胞刺激素(α-Melanocyte stimulating hormone,α-MSH)对羊驼皮肤黑素细胞(Melano-cyte,MC)增殖和黑素合成的影响。体外培养正常羊驼皮肤黑素细胞,观察不同浓度α-MSH(0、10-9、10-8、10-7mol·L-1)对羊驼皮肤黑... 旨在研究α-黑素细胞刺激素(α-Melanocyte stimulating hormone,α-MSH)对羊驼皮肤黑素细胞(Melano-cyte,MC)增殖和黑素合成的影响。体外培养正常羊驼皮肤黑素细胞,观察不同浓度α-MSH(0、10-9、10-8、10-7mol·L-1)对羊驼皮肤黑素细胞增殖、黑素含量、表皮黑皮素-1受体(Melanocortin1receptor,MC1R)基因、小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcription factor,MITF)和酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)基因表达量的影响。结果表明,α-MSH处理羊驼皮肤黑素细胞3d后,羊驼皮肤黑素细胞增多,黑素含量、MC1R和TYR基因表达量都明显增加(P<0.05),以10-8mol·L-1组最为显著,MITF基因表达量也明显增加(P<0.05),以10-7mol·L-1组最为显著。α-MSH能诱导羊驼皮肤黑素细胞增殖、树突增长、黑素合成增加、MC1R、MITF和TYR基因表达量增高。 展开更多
关键词 Α-MSH 羊驼 皮肤 黑素细胞 MC1R MITF TYR
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羊驼MC1R基因克隆及其在不同毛色个体中表达水平研究 被引量:23
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作者 任玉红 任彬 +4 位作者 范瑞文 朱芷葳 杨勇 李辉 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期841-845,共5页
为了获取羊驼MC1R基因序列,探索MC1R基因表达水平与羊驼毛色之间的相关性,根据GenBank已发表序列(EU1358800)设计1对引物,以羊驼皮肤总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增并成功获得了中华白色羊驼MC1R基因cDNA序列,长度为1081 bp,编码317个... 为了获取羊驼MC1R基因序列,探索MC1R基因表达水平与羊驼毛色之间的相关性,根据GenBank已发表序列(EU1358800)设计1对引物,以羊驼皮肤总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增并成功获得了中华白色羊驼MC1R基因cDNA序列,长度为1081 bp,编码317个氨基酸,与已发表序列进行对比,同源性为99%,发现7处突变。根据所克隆序列设计引物,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR),分析MC1R基因在白色和棕色羊驼皮肤中的基因表达量,并对结果进行统计分析。结果表明:经过内参基因校正后,棕色羊驼皮肤中MC1R基因的相对表达量是白色羊驼相对表达量的4.32倍(P<0.01)。MC1R基因表达量的差异与羊驼毛色表型之间可能存在一定的相关性。 展开更多
关键词 羊驼 MC1R基因 克隆 QRT-PCR 基因表达水平
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青年羊驼耳部和背部皮肤组织中miRNA差异表达研究 被引量:17
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作者 赫晓燕 郝欢庆 +5 位作者 刘丹丹 范瑞文 曹靖 朱芷葳 董彦君 邢海权 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1016-1022,共7页
羊驼是毛用型经济动物,其耳部和背部的毛发品质和生长速度存在差异.MicroRNA(miRNA)是新发现的一类在转录后水平调控基因表达的非编码RNA分子,为比较miRNA在羊驼耳部和背部皮肤的表达差异,从而探讨miRNA在羊驼皮肤和毛囊发育过程中的调... 羊驼是毛用型经济动物,其耳部和背部的毛发品质和生长速度存在差异.MicroRNA(miRNA)是新发现的一类在转录后水平调控基因表达的非编码RNA分子,为比较miRNA在羊驼耳部和背部皮肤的表达差异,从而探讨miRNA在羊驼皮肤和毛囊发育过程中的调控作用,本实验提取羊驼皮肤总RNA,制备了羊驼皮肤miRNA芯片,通过与Affymetrix多物种miRNA芯片跨物种杂交对耳部和背部皮肤的miRNA进行筛选,并通过实时荧光定量PCR进行了验证,同时利用在线生物信息软件预测miRNA靶基因.结果显示,羊驼耳部和背部皮肤中高表达差异2倍以上的miRNA有39个,实时荧光定量PCR检测let-7b和miR-24在2个部位皮肤中的差异表达量与miRNA基因芯片结果一致;预测到let-7b和miR-24的靶基因中包含有与毛囊生长发育和毛发品质相关的基因,提示这些miRNA可能参与羊驼皮肤和毛囊的生长发育、更新以及毛发品质的调控. 展开更多
关键词 羊驼 耳部 背部 皮肤 MIRNA芯片 微RNA 差异表达
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Wnt3a在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位 被引量:12
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作者 宋云飞 田雪 +7 位作者 卢绪秀 郭青云 张丹丽 解晓晶 于秀菊 贺俊平 王海东 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期785-790,共6页
本研究旨在探索Wnt3a在羊驼皮肤中的表达与定位。以不同毛色的成年羊驼为研究对象,应用荧光定量PCR技术分析不同毛色羊驼皮肤Wnt3a基因的相对表达量,并运用Western blotting及免疫组织化学法对Wnt3a蛋白在不同毛色羊驼皮肤中进行表达和... 本研究旨在探索Wnt3a在羊驼皮肤中的表达与定位。以不同毛色的成年羊驼为研究对象,应用荧光定量PCR技术分析不同毛色羊驼皮肤Wnt3a基因的相对表达量,并运用Western blotting及免疫组织化学法对Wnt3a蛋白在不同毛色羊驼皮肤中进行表达和定位研究。结果:荧光定量PCR结果显示棕色羊驼中Wnt3amRNA相对表达量是白色羊驼的2.970 2倍;Western blotting结果表明,羊驼皮肤组织组蛋白提取物中存在相对分子质量约39ku的产物,棕色羊驼皮肤平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示Wnt3a在羊驼皮肤毛囊的根鞘和毛球部呈阳性表达,根据光密度值分析得出Wnt3a在棕色和白色羊驼毛囊中的表达差异显著(P<0.05)。通过以上研究显示Wnt3a可能与羊驼毛色形成具有相关性。 展开更多
关键词 WNT3A 羊驼 皮肤 免疫组化 荧光定量PCR Westernblotting
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CDK5对羊驼皮肤黑色素细胞TYR和MITF mRNA表达的调节 被引量:10
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作者 张瑞娜 范瑞文 +5 位作者 程志学 田雪 刘佳 高磊 马峥 董常生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1712-1717,共6页
为了证实CDK5是否参与羊驼毛色的形成,本研究主要对CDK5在羊驼黑色素细胞中调节TYR和MITF的表达进行了研究。本研究首先采用免疫组织化学方法检测CDK5在羊驼皮肤黑色素细胞中的定位,再通过脂质体将CDK5转染于羊驼皮肤黑色素细胞,之后通... 为了证实CDK5是否参与羊驼毛色的形成,本研究主要对CDK5在羊驼黑色素细胞中调节TYR和MITF的表达进行了研究。本研究首先采用免疫组织化学方法检测CDK5在羊驼皮肤黑色素细胞中的定位,再通过脂质体将CDK5转染于羊驼皮肤黑色素细胞,之后通过Western blot和qRT-PCR的方法检测转染后黑色素细胞中CDK5蛋白、TYR和MITF mRNA的表达。免疫组化结果显示CDK5位于黑色素细胞的胞质和细胞核内;West-ern blot结果显示转染组黑色素细胞中CDK5蛋白表达量明显高于对照组;qRT-PCR结果显示CDK5可下调MITF的表达,同时上调TYR的表达,转染组黑色素细胞中MITF和TYR mRNA的表达水平分别是对照组细胞的0.264 9和3.931 3倍。结果揭示CDK5可能通过调节黑色素细胞核中TYR和MITF mRNA的表达,从而参与调控羊驼毛色形成。 展开更多
关键词 CDK5 TYR MITF 黑色素细胞 毛色 羊驼
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酪氨酸酶在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达与定位 被引量:15
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作者 姜俊兵 于秀菊 +1 位作者 贺俊平 董常生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2555-2560,共6页
【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在... 【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在羊驼皮肤中的表达进行定位。【结果】不同毛色羊驼皮肤组织中均有TYR基因mRNA的表达,有色被毛皮肤组织中TYR的基因mRNA表达量显著高于白色被毛组织的表达量;在有色被毛皮肤组织中,TYR阳性反应区主要集中于毛球部位,即毛根成形部;而白色被毛组织中,TYR阳性反应区主要位于毛根壶腹部及膨大部,即毛根永久部。【结论】综合分析TYR基因mRNA表达量及蛋白定位结果可知,TYR是成熟黑色素细胞的标记分子之一,羊驼毛色形成取决于成熟黑色素细胞在毛囊组织中的相对数量及分布部位。 展开更多
关键词 羊驼 被毛颜色 酪氨酸酶 半定量RT-PCR 免疫组织化学
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IGF-1对羊驼皮肤成纤维细胞作用的研究 被引量:10
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作者 王婷 邢海权 +4 位作者 曹靖 王海东 申艳 于秀菊 赫晓燕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期880-887,共8页
旨在通过研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对羊驼皮肤成纤维细胞的作用来了解IGF-1对羊驼毛皮生长发育的调控作用。本研究中,(1)利用免疫组织和细胞化学技术,研究IGF-1及其受体IGF-1R在成年羊驼皮肤和培养的成纤维细胞中的表达;(2)观察不... 旨在通过研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对羊驼皮肤成纤维细胞的作用来了解IGF-1对羊驼毛皮生长发育的调控作用。本研究中,(1)利用免疫组织和细胞化学技术,研究IGF-1及其受体IGF-1R在成年羊驼皮肤和培养的成纤维细胞中的表达;(2)观察不同浓度体外重组人IGF-1对成纤维细胞增殖形态学的影响;(3)采用QRT-PCR技术检测添加不同浓度IGF-1对成纤维细胞的IGF-1R、转化生长因子β1(TGF-β1)和角质细胞生长因子(KGF)基因表达量的影响。结果:(1)IGF-1及其受体IGF-1R蛋白在成年羊驼皮肤和培养的成纤维细胞中均有表达;(2)添加IGF-1对成纤维细胞的数量和形态都有明显促进作用,10ng·mL-1组的效果最显著;(3)IGF-1影响成纤维细胞的IGF-1R、TGF-β1和KFG基因的表达。与对照组相比,10ng·mL-1时KGF基因表达水平是3.332倍,IGF-1R基因表达水平是4.479倍。TGF-β1基因表达水平最低为0.405倍,1ng·mL-1时为0.813倍,100ng·mL-1时为0.434倍。结果表明,成纤维细胞既是IGF-1作用的靶器官,又是内分泌器官。IGF-1促进细胞增殖,同时提高其IGF-1R和KGF基因表达量,降低TGF-β1基因表达量,提示IGF-1可通过调节其受体和内分泌因子的表达量而调控羊驼毛的生长发育。 展开更多
关键词 羊驼 毛发生长 IGF-1 成纤维细胞
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