Mitf-M在羊驼皮肤组织的表达与序列分析及免疫组织化学定位

【目的】克隆羊驼皮肤组织表达的Mitf-M CDS序列,比较分析羊驼皮肤组织Mitf-M的特征,进一步定位分析Mitf-M蛋白表达的位置,为深入研究羊驼毛色基因表达机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增方法分段扩增Mitf-M CDS区,分别利用Clustal X和BioEdit生物学软件对氨基酸序列进行多重序列比较分析,免疫组织化学技术对Mitf-M蛋白定位分析。【结果】羊驼皮肤组织表达的Mitf-M的CDS区由419个氨基酸组成,具有bHLH-zip转录家族的保守结构域,该基因与牛和犬亲缘关系最近,Mitf-M蛋白主要分布于羊驼皮肤组织毛球基底层细胞之间与毛乳头周围的黑色素细胞中。【结论】与其它物种相比较,羊驼皮肤组织表达的Mitf-M蛋白保守性很强,在进化过程中的变异不大,可见Mitf-M为毛发的色素沉积提供重要的物质基础。

不同月龄羊驼小肠肥大细胞的数量变化研究

为了揭示不同月龄羊驼的小肠肥大细胞的数量变化及分布规律,本实验分别选择3月龄、12月龄的各3头羊驼的十二指肠、空肠、回肠,利用甲苯胺蓝染色方法进行研究,通过统计学软件分析得出结果:随年龄增长,羊驼十二指肠肥大细胞数量增多,空肠和回肠肥大细胞数量则减少,十二指肠、空肠肥大细胞数量之间差异极显著(P<0.01),回肠肥大细胞数量差异未达极显著(P>0.01);3月龄羊驼十二指肠、回肠之间的肥大细胞数量差异极显著(P<0.01),回肠、空肠之间的肥大细胞数量差异未达极显著(P>0.01);12月龄羊驼十二指肠、空肠、回肠之间的肥大细胞数量差异极显著(P<0.01)。以上结果显示:不同发育阶段的羊驼小肠肥大细胞数量与年龄呈正相关。

羊驼性别决定基因sry部分片段的克隆与序列分析

从成年羊驼血液提取基因组DNA,参照哺乳动物sry(sex-determining region on the Y chromosome)基因的同源保守区域设计特异性引物,用PCR技术成功扩增羊驼sry基因的部分片段,且全部实验雄性个体均成功扩增,而雌性个体则无任何特异性片段,说明所扩增基因片段具雄性特异性。对扩增序列所编码蛋白序列分析显示所扩增的片段编码的蛋白序列在哺乳动物sryHMG-box(high mobility group box)蛋白超家族的HMG-box区域,说明扩增的为sry基因片段。用所扩增片段与其他哺乳动物同源序列分析显示,由sry基因构建的系统进化树,与传统的动物分类关系相近,说明由sry基因的HMG-box构建系统树是分析物种亲缘关系的有效工具。

PAX3转录因子在羊驼皮肤组织中的表达和定位分析

本研究旨在研究PAX3在羊驼皮肤组织中的表达和分布。利用免疫组织化学和Western blot技术研究PAX3转录因子在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达与分布。结果表明PAX3在毛球基底层细胞之间,毛乳头周围和毛根部都存在阳性表达,并在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达存在显著差异(P<0.05)。结果提示PAX3参与了黑色素细胞的增殖、分化和迁移,PAX3与色素的形成相关。

在羊驼皮肤黑色素细胞中α-黑素细胞刺激素对诱导一氧化氮合酶的影响

为研究α-黑素细胞刺激素(α-Melanocyte stimulating hormone,α-MSH)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在羊驼皮肤黑素细胞中的影响。采用体外培养正常羊驼皮肤黑素细胞,检测不同浓度α-MSH(0、10-9、10-8、10-7mol/L)对羊驼皮肤黑素细胞中诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因表达量的影响;检测不同浓度一氧化氮供体(SNP)(0、10-5、10-4、10-3mol/L)对羊驼皮肤黑素细胞中阿黑皮素原(POMC,α-黑素细胞刺激素的前体)基因表达量的影响。结果表明:α-MSH处理羊驼皮肤黑素细胞5 d后,NOS2mRNA表达量有降低趋势,10-8mol/L较为明显;SNP处理5 d后,POMCmRNA表达量无明显变化。α-MSH能诱导羊驼皮肤黑素细胞NOS2mRNA基因表达量降低。

c-Fos参与羊驼小肠黏膜淋巴细胞生发中心的调控

【目的】研究转录因子c-Fos与凋亡相关蛋白Caspase3在羊驼小肠黏膜淋巴组织的表达,探索c-Fos与羊驼小肠黏膜淋巴细胞生发中心的关系。【方法】用免疫组织化学技术研究c-Fos蛋白与Caspase3蛋白在羊驼十二指肠和空肠淋巴组织的表达。【结果】免疫组织化学结果显示羊驼十二指肠黏膜淋巴细胞较少,c-Fos蛋白主要表达于空肠黏膜下淋巴组织生发中心,在黏膜下淋巴组织向固有层淋巴组织过渡区域有散在表达,在固有层弥散淋巴组织中c-Fos阳性表达细胞较少。Caspase3蛋白主要表达于空肠黏膜固有层淋巴组织,在黏膜下淋巴组织生发中心很少表达,在黏膜下淋巴组织向固有层弥散淋巴组织过渡区域Caspase3有散在表达。【结论】c-Fos参与羊驼空肠黏膜下淋巴组织生发中心增殖与分化的调控。

羊驼前肢骨的解剖学研究

用大体解剖学方法研究了羊驼前肢骨的解剖结构,与文献报道双峰驼的前肢进行对照,同时与马、牛、羊、猪等的前肢骨进行了比较。结果发现:羊驼前肢骨由肩胛骨、肱骨、前臂骨(包括桡骨和尺骨)与前脚骨(包括腕骨、掌骨、指骨和籽骨)组成;前肢各骨的组成、形态特征与骆驼相似。羊驼肩胛骨与牛羊肩胛骨相似,肱骨与马肱骨相近,前臂骨与马相近,桡骨与尺骨大部愈合,腕骨与马腕骨相近。结论:羊驼前肢骨的解剖结构与骆驼相似,形制略小;与马、牛、羊前肢骨有不同程度的相似,与猪前肢骨差别较大。

羊驼皮肤结构基因(原)胶原的表达特点

为了揭示羊驼皮肤胶原蛋白(Collagen)在皮肤结构发生中的分子机制,本研究通过构建羊驼皮肤cD-NA文库并进行大规模测序分析,结果表明:在羊驼皮肤内发现只有纤维类胶原表达,即typeⅠ,typeⅢ,type Vcollagen,其中typeⅠ表达最高,typeⅢ和typeⅤ表达低;然而,在羊驼皮肤内未发现各类collagen相对应的原胶原(procollagen),其成员procollagen typeⅠ,typeⅢ,typeⅣ,typeⅥ,typeⅦ,typeⅩⅧ在表达,且typeⅠ远远高于其他家族成员的表达,由此推断collagen和procollagen typeⅠ在羊驼皮肤结构发生中起主要作用,羊驼皮肤内的蛋白水解机制可能使procollagen产生不同类型的collagen。

羊驼胚胎移植研究动态

羊驼作为中国首次引进的动物新品种,其繁殖时间较长,作为一项普遍饲养的畜牧业,存在许多不利因素。运用家畜胚胎移植技术,可以提高羊驼的繁殖速度及品质。因此,掌握胚胎移植技术,加速发展羊驼养殖业,应是目前一项重要任务。

B超妊娠诊断技术在羊驼生产中的应用

采用HS-1500兽用B型超声波扫描仪,以胎盘子叶作为主要的判断依据,对85只母羊驼进行早期妊娠诊断,结果表明:在85只B超检测的羊驼中,38只诊断为怀孕,47只诊断为未孕,诊断准确率为100%。

羊驼住肉孢子虫感染案例分析

报道了国内圈养羊驼(Vicugna pacos)住肉孢子虫病的确诊病例。诊断的依据是:(1)提示性临床症状,动物机体出现消瘦、贫血症状,临床出现肌肉震颤和神经症状。(2)尸体剖检特征性病变,心冠脂肪萎缩,呈胶冻样变;心包、胸腔有较多积液;食管平滑肌内有多个纺锤形的虫体包囊,呈乳白色,与肌纤维平行。(3)组织病理学特征,镜下食道平滑肌内可见住肉孢子虫包囊、小室及慢殖子;肌纤维出现不同程度的透明变性、萎缩、溶解,间质结缔组织增生。住肉孢子虫属专性异宿主性寄生虫,尚无特效药物,定期查虫驱虫、提高机体抵抗力和严控环境猫狗的流窜是预防本病的关键。

羊驼呼吸系统形态结构观察

用大体解剖学方法研究了羊驼呼吸系统的形态结构,用组织学方法研究了羊驼肺的组织结构,并与文献报道的骆驼的呼吸系统,牛、羊、马、猪等的呼吸系统进行了比较。结果显示,羊驼呼吸系统的组成与其它家畜相同,都是由鼻、咽、喉、气管、支气管和肺组成,但各器官有其特点。羊驼呼吸系统形态结构类似于骆驼和马,肺的组织结构类似于其它家畜,但也有其独特之处。

驼源天然单域重链抗体库的构建与鉴定

从未经主动免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录后作为第一轮PCR的模板。根据重链抗体保守区域设计引物,经巢式PCR法扩增获得了全套重链抗体可变区基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库NAL,含有2×107个独立克隆,菌落PCR和Hinf I酶切分析结果显示,克隆效率大于97%,文库的多样性良好。辅助噬菌体救援后,得到噬菌体展示文库命名为NA-PDL,滴度达1013CFU/ml。以真菌毒素人工抗原DON-MBSA为目标抗原,对NA-PDL进行了淘选,第二轮洗脱物中,阳性克隆率达36.4%,提示针对目标抗原的噬菌体颗粒得到了有效富集,文库NA-PDL多样性较好,为后续淘选针对特定抗原的单域重链抗体奠定了基础。