CRYAB在前列腺癌中抗肿瘤作用研究

目的:探讨晶状体蛋白αB(CRYAB)与前列腺癌预后的关系以及潜在的作用机制。方法:使用R软件进行生物信息学分析,包括基因差异表达和临床相关性分析、绘制受试者工作特征(ROC)曲线和Kaplan-Meier(KM)曲线。使用RT-qPCR检测基因表达,采用Western印迹进行蛋白质表达量验证。采用CCK8试验、TUNEL试验、Transwell迁移和侵袭试验检测前列腺癌细胞的增殖、凋亡和转移能力。结果:从TCGA数据库和GEO数据库结果显示,与正常组织相比,前列腺癌组织中的CRYAB mRNA表达下调(P<0.05);与RWPE1细胞相比,CRYAB mRNA和蛋白质在前列腺癌细胞中表达下调(P均<0.05)。细胞功能实验表明,上调的CRYAB可以抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,促进凋亡(P均<0.05),并且CRYAB过表达细胞系中CDH1表达升高,CDH2表达降低。此外,CRYAB mRNA表达与Gleason评分相关(P<0.01)。ROC曲线下的面积为0.914,KM曲线表明,CRYAB对进展无疾病进展生存期(P=0.008)及疾病特异生存期(P=0.032)具有预后价值。结论:CRYAB在前列腺癌组织中表达下调,并与前列腺癌细胞的抗肿瘤功能相关,这可能通过调节上皮间充质转换分子影响前列腺癌细胞转移能力,CRYAB mRNA在前列腺癌中具有重要的诊断和预后价值。

α晶状体蛋白对脂多糖诱导的视网膜小胶质细胞增生及TNF-α表达的影响

目的观察α晶状体蛋白对脂多糖(LPS)诱导的视网膜小胶质细胞增生及肿瘤坏死因子α(TNF-α)生物学活性的影响。方法原代培养视网膜小胶质细胞,并采用CD11b细胞免疫荧光及流式细胞仪鉴定纯度,加入α晶状体蛋白及LPS后,通过MTT(四氮唑蓝比色细胞增生测定)检测α晶状体蛋白对LPS活化的小胶质细胞增生能力的影响,并采用ELISA、RT-PCR检测TNF-α蛋白水平及mRNA水平表达的变化。结果原代培养的小胶质细胞经免疫组织化学鉴定及流式细胞仪鉴定纯度分别达到95.8%和91.4%,经10-4g/Lα晶状体蛋白预处理后,LPS诱导的小胶质细胞增生被抑制(P<0.01);与未处理组比较,TNF-α蛋白质量浓度及mRNA表达量明显降低(P<0.05)。结论α晶状体蛋白可以减少LPS诱导的原代培养视网膜小胶质细胞增生及TNF-α表达。

早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及α晶状体球蛋白B的表达与验证

目的:建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶蛋白分子并进行验证。方法:制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果:成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组学结果一致。结论:α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。

原发性肺腺癌alpha-B-crystallin、TTF-1、NapsinA表达研究

目的分析alpha-B-crystallin、甲状腺转录因子1(TTF-1)、Napsin A在原发性肺腺癌中的表达及意义,为今后该病临床诊断及治疗提供参考。方法收集原发性肺腺癌患者80例作为观察组,将鳞癌、腺癌、腺鳞癌、大细胞癌(共50例)归为对照组;使用免疫组化检测alpha-B-crystallin、TTF-1、Napsin A,分析三指标与原发性肺腺癌病例类型、分期、预后等相关性。结果 alpha-B-crystallin、TTF-1、Napsin A在观察组(肺腺癌)中阳性率分别为20.00%、81.25%、88.75%,与对照组有显著差异(P<0.05);Napsin A、TTF-1、alpha-B-crystallin实性为主阳性率分别为54.20%、65.03%、0;alpha-B-crystallin阳性率在不同肿瘤大小、分期、预后中有显著差异;Napsin A阳性率在不同肿瘤大小、分期、组织分化、淋巴结转移、预后中有显著差异;TTF-1阳性率在不同肿瘤大小、组织分化、分期、预后中有显著差异(P均<0.05)。结论 1TTF-1、Napsin A阳性表达能明确区分原发性肺腺癌、鳞癌、大细胞癌和腺鳞癌,可辅助临床肺癌鉴别;2TTF-1、Napsin A在原发性肺腺癌中有高阳性率,用于肺腺上皮肿瘤病理诊断能提高肺腺癌诊断准确性;3alpha-B-crystallin、TTF-1、Napsin A阳性表达均与肺腺癌病例分期、肿瘤大小、预后相关,对该病预后判断有辅助作用。

侵袭性细胞基底样乳腺癌的生物学特征

最新的基因微阵列分析将乳腺癌分为5个亚型:LuminalA(ER+)、LuminalB(ER+)、类似正常组织的乳腺癌、Her-2/neu基因过度表达以及细胞基底样乳腺癌。研究证实,后两者无复发生存期短,预后较其他亚型差。不同于erbB-2/Her-2过表达亚型,细胞基底样乳腺癌亚型的高侵袭行为的生物学特征仍不清楚。研究发现,细胞基底样乳腺癌免疫组化特征为ER(-)、PR(-)以及Her-2(-),而表达CK5/6、CK17、Her-1等,并且与侵袭性较强的遗传性乳腺癌BRCA1基因突变有关。在细胞基底样乳腺癌亚型中常表达一种小的热休克蛋白αB-晶体蛋白,作为一种癌基因,其过度表达导致乳腺上皮细胞凋亡失控,从而抑制MAPK/ERK激酶通路。由此推测αB-晶体蛋白可能是细胞基底样乳腺癌亚型治疗的新靶点。

α晶状体蛋白的研究进展

α晶状体蛋白包括αA和αB晶状体蛋白,属于小分子热休克蛋白家族成员。α晶状体蛋白在晶状体中为主要的屈光介质,同时具有分子伴娘的功能。αA晶状体蛋白主要存在于晶状体,在脾和胸腺有微量表达。αB晶状体蛋白在许多器官、组织、细胞均有结构性表达,在抵御内、外环境应激发挥重要作用。本文对α晶状体蛋白的分子量及结构,在晶状体内、外中的作用,与神经系统疾病的关系及α晶状体蛋白基因敲除研究等方面作一综述。

慢病毒介导的αB-晶状体蛋白基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖和迁移能力的影响

目的应用慢病毒转染技术研究αB-晶状体蛋白(CRYAB)基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建CRYAB慢病毒载体转染人胃癌细胞株SGC-7901,获得稳定转染的细胞株,制备空载体作为阴性对照组(sh-ctrl组),实验组为CRYAB病毒转染组(sh-CRYAB组)。提取总RNA和蛋白,应用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测CRYAB的表达,应用CCK-8、Transwell和细胞划痕实验分别检测CRYAB基因沉默后细胞增殖和迁移能力的变化。结果慢病毒转染SGC-7901细胞后,CRYAB mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.01,P<0.001),表明成功构建了稳定转染的CRYAB-shRNA胃癌细胞株。与sh-ctrl组比较,sh-CRYAB组细胞的增殖能力在第4天、第5天显著降低(P<0.05,P<0.01),sh-CRYAB组细胞迁移率显著降低(P<0.01)。结论 CRYAB表达沉默可降低胃癌细胞的增殖和迁移能力,CRYAB有望成为胃癌基因治疗的新靶点。

SP对NE诱导的体外培养大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制

目的观察P物质(SP)对去甲肾上腺素(NE)诱导的体外培养大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制。方法选用出生1-3 d的SD大鼠建立新生大鼠心肌细胞体外培养模型,将12孔培养72 h的心肌细胞随机分为对照组(不加任何干预药物)、NE组、SP+NE组、D-SP(SP的特异性受体拮抗剂)+SP+NE组,每组n=3。以上各组中,NE、SP、D-SP终浓度分别为10-5,10-7,10-6mol/L。药物作用3 h后采用流式细胞术(FCM)测定凋亡率,采用Western blot的方法检测αB晶体蛋白(CRYAB)的含量变化,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法检测CRYAB mRNA的变化。结果与对照组比较,NE组凋亡率升高,CRYAB蛋白表达和mRNA相对量均下降(P<0.05);与NE组比较,SP+NE组凋亡率下降,CRYAB蛋白表达与mRNA升高(P<0.05);与SP+NE组比较,D-SP+SP+NE组凋亡率升高,CRYAB蛋白表达与mRNA均下降(均P<0.05)。结论SP抑制NE所诱导的体外培养大鼠心肌细胞凋亡,该作用由特异性受体介导,与调控CRYAB表达实现表达水平内稳态有关。

Alpha B-crystallin基因在结肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨alpha B-crystallin基因在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理的相关性。方法采用RT-PCR方法检测64例结肠癌组织及其癌旁正常组织中alpha B-crystallin基因的表达,计算其阳性率;并用Western blot方法检测结肠癌组织及其癌旁正常组织中alpha B-crystallin蛋白的表达变化。结果alpha B-crystallin mRNA在结肠癌组织中表达的阳性率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),在发生浆膜外转移者的表达阳性率明显高于浆膜内者(P<0.05),在较大肿瘤者中的表达阳性率明显高于较小肿瘤者,在有淋巴结转移者中的表达阳性率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05),但与患者的性别、年龄、肿瘤的分化程度无关(P>0.05)。alpha B-crystallin蛋白在结肠癌组织中表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。结论alpha B-crystallin基因的高表达可能与结肠癌的发生及侵袭转移有关。

一中国家系常染色体显性遗传性后极性白内障CRYAB基因突变分析

背景 约50％的先天性白内障与遗传因素有关,最常见的遗传方式是常染色体显性遗传（AD）.迄今为止,已证实AD性先天性白内障（ADCC）相关的候选基因位点39个及相关基因26个,确定先天性白内障的致病基因及突变位点是治疗的前提.目的 对1个3代AD性后极性白内障中国家系的致病基因进行分析,确定其发病的遗传学基础.方法 于2009年6-12月由山西省眼科医院收集1个中国汉族ADCC家系,家系的19名成员中共8例后极性白内障,11名表型正常.在获得所有受试者的知情同意后,对该家系成员进行临床检查,采集家系所有成员外周静脉血各8 ml并提取DNA.对微卫星标志物进行PCR扩增及其等位基因的检测,并在染色体1 q21-25、1p22.3、2q33-36、11 q22.1-23.21、7q11-12、21q22.3、22q11.2-12.1的区段内分别选取21个多态性微卫星标志物进行连锁分析,计算对数优势（LOD）值;对可能致病的候选基因外显子进行扩增和测序验证突变基因;对新发现的突变用PolyPhen2软件进行突变致病性预测,预测范围值按渐增的风险程度定为0～1.结果 该家系3代中各代均有后极性白内障患者,共8例,各代患者中男女发病机会均等,符合AD发病特征.连锁分析结果显示,在微卫星标志物D11S3178处最大LOD值为4.06（θ=0）.单体型分析表明,该致病基因位于D11S4176 ～ D11S908区域内.对编码区的测序结果表明,CRYAB基因的第2个外显子有1个错义突变（c.209T＞C）,导致其编码的晶状体蛋白第70位的亮氨酸被脯氨酸替代（p.Leu 70 Pro）.PolyPhen2软件分析测试结果表明,该新突变引起所编码的蛋白质结构和功能的损害预测分值为0.996.结论 CRYAB基因为该家系中遗传性先天性后极性白内障的致病基因.

去甲肾上腺素对原代培养大鼠心肌细胞的凋亡率及相关蛋白的影响

目的观察去甲肾上腺素(NE)对体外培养的原代新生大鼠心肌细胞凋亡率及相关凋亡蛋白的影响。方法选用出生1-3 d的SD大鼠建立原代培养新生大鼠心肌细胞模型。将培养72 h的心肌细胞随机分为对照组(未使用任何药物)与不同浓度NE组(分别采用10^(-8),10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L NE),每组3孔(n=3)。加药后3 h采用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率;采用Western blot检测Cry AB及Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax比值的变化。结果与对照组比较,10^(-8),10^(-7),10^(-6),10^(-5),10^(-4)mol/L NE作用下心肌细胞凋亡率均出现显著升高(均P<0.05);Cry AB表达下降(均P<0.05),Bcl-2表达下降(除10-8mol/L组外均P<0.05)、Bax表达升高(除10-7mol/L组外均P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05)。结论去甲肾上腺素可能通过降低Cry AB、Bcl-2表达,升高Bax表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导体外原代培养大鼠心肌细胞的凋亡率增加。

α结晶麦芽糖的制备及其功能性质

报导了从水溶液中结晶α结晶麦芽糖的新工艺并对其功能性质进行了研究，结果表明，α结晶麦芽糖与β结晶麦芽糖相比，具有熔点高（３０℃以上），在水中的溶解度和乳化能力分别为β结晶麦芽糖的３倍以上和２倍。α结晶麦芽糖还具有较高的醇水溶性，此外对β结晶麦芽糖的纯度与形成α结晶麦芽糖的关系也进行了探讨。

体外培养人眼晶状体上皮细胞整合素α5的表达

目的 探讨体外培养的人眼晶状体上皮细胞整合素α5的表达。方法 采用免疫荧光细胞计数检测法 ,对 2 0例先天性白内障患者术中的环形撕裂前囊膜进行原代培养并传代 ,取 2～ 3代细胞进行检测整合素α5的表达。结果 体外培养人眼晶状体上皮细胞整合素α5的表达阳性率平均为 93 .3 0 % ,阴性率为 6.70 %。结论 体外培养人眼晶状体上皮细胞高表达整合素α5 ,其可能在后发性白内障的发生和发展过程中发挥作用。

下调αB-晶状体蛋白的表达对应激条件下人皮肤角质形成细胞存活和凋亡的影响

目的探讨下调αB-晶状体蛋白(αB-crystallin)对人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)在应激条件下的存活和凋亡的影响。方法设计并筛选特异性靶向下调αB-crystallin表达的siRNA;噻唑蓝法检测siRNA下调αB-crystallin表达对过氧化氢(H2O2)处理的细胞相对存活率的影响;流式细胞术检测siRNA下调αB-晶状体蛋白表达对H2O2诱导的细胞凋亡率的影响。结果筛选获得可有效下调αB-crystallin表达的siRNA(si-CRYAB-1);si-CRYAB-1下调αB-crystallin表达可降低H2O2处理后的Ha Ca T细胞存活率(P<0.01),并明显增加H2O2诱导的Ha Ca T细胞凋亡率(P<0.05)。结论下调αB-crystallin的表达后,人角质形成细胞在氧化应激条件下的存活能力明显减弱。αB-crystallin可能具有抗人角质形成细胞凋亡的作用。

Alpha B-crystallin基因在胃癌组织中的表达及其意义

目的:探讨alpha B-crystallin基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌的相关性。方法:采用RT-PCR方法检测64例胃癌组织及其癌旁正常组织中alpha B-crystallin基因的表达,计算其阳性率。结果:Alpha B-crys-tallin基因在胃癌组织中表达的阳性率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),其浆膜外转移者的表达阳性率明显高于浆膜内者(P<0.05),较大肿瘤者的表达阳性率明显高于较小肿瘤者,有淋巴结转移者的表达阳性率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05),但与患者的性别、年龄、肿瘤的分化程度无关(P>0.05)。结论:Alpha B-crystallin基因的高表达可能与胃癌的发生及转移有关。

老龄大鼠心肌缺血预处理后αB-晶体蛋白表达变化的研究

目的:观察小分子热休克蛋白αB-晶体蛋白在青年大鼠及老年大鼠心肌缺血预处理后mRNA和蛋白表达的变化,探讨αB-晶体蛋白表达与老龄大鼠部分丧失缺血预处理保护作用的关系。方法:2～3月龄及24月龄SD大鼠各24只,雌雄不限,分别按照随机分组原则分为老年对照组(n=4)、老年预处理组(n=20)、青年对照组(n=4)、青年预处理组(n=20)。两预处理组予停灌5min、复灌5min,连续3次,制备缺血预处理模型,于末次灌注后0、5、15、45和60 min,两对照组于假手术后持续灌流60 min取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁心肌组织分别匀浆,采用RT-PCR方法观察大鼠αB-晶体蛋白mRNA在不同时间点的表达情况;离心取上清及沉淀蛋白,用Western Blot方法检测缺血预处理不同时间αB-晶体蛋白在可溶性蛋白及不溶性细胞骨架中含量的改变;新鲜冰冻心肌组织采用免疫荧光方法标记αB-晶体蛋白,在激光共聚焦显微镜下观察αB-晶体蛋白的分布情况。结果:①老龄大鼠αB-晶体蛋白mRNA的基础表达量与青年大鼠相比未见明显差异;缺血预处理后约15min,其表达在老龄大鼠及青年大鼠均有所增加;②青年大鼠心脏缺血预处理后即刻前壁缺血组织αB-晶体蛋白从胞浆(上清液)移至不溶性成分细胞骨架(沉淀),至15 min时大部分移到沉淀中,在45 min时则几乎全部复位到上清中,而老龄大鼠心肌中αB-晶体蛋白在各时间点均未发生明显移位。③免疫荧光检查显示青年大鼠αB-晶体蛋白在缺血预处理后15 min向Z线及润盘部位聚集;老年大鼠中αB-晶体蛋白移位程度与成年大鼠相比明显减弱。结论:老年大鼠心肌组织中αB-晶体蛋白移位能力降低,从而减弱了与各相应蛋白结合的能力,这可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减弱的重要原因之一。

重组质粒pαACP-HSP70的特异性表达研究

目的观察重组质粒pαACP-HSP70在晶状体组织和非晶状体组织中的表达情况,探讨重组质粒pαACPHSP70的特异性表达。方法以晶状体组织作为A组,肺小细胞癌细胞A549、肝癌细胞7402等非晶状体组织作为B组,采用阳离子脂质体转染法将p CMV-HSP70质粒、pαACP-HSP70质粒导入A、B组后,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果转染p CMV-HSP70质粒到A、B组24 h后发现,两组均有绿色荧光;另外,转染pαACP-HSP70质粒24 h后仅在A组能观察到绿色荧光。结论重组质粒pαACP-HSP70不能在非晶状体组织表达,仅能在晶状体上皮细胞表达,具有组织特异性。

CRYAB在肺鳞癌中的表达及其临床意义

目的检测分析CRYAB表达与肺鳞(LUSC)癌重要临床指标之间的关系。方法选取2014年01月~2016年12月间LUSC病人癌组织及癌旁组织20例,采用qPCR检测CRYAB在肺鳞癌病人中的表达情况,在59例LUSC组织芯片上进行免疫组化检测,使用Cox回归分析法及Kaplan-Meier生存分析法进行肺鳞癌病人的预后评估。结果LUSC中CRYAB mRNA表达值为4.456±1.512,癌旁组织为2.944±0.4907,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);LUSC中的CRYAB蛋白表达高于癌旁组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CRYAB的表达与LUSC的T分期显著相关(P<0.05)。单因素及多因素生存分析显示,CRYAB表达与LUSC预后关系密切(P<0.05),CRYAB高表达提示预后不良。结论CRYAB在肺鳞癌病人显著高表达,CRYAB的表达与肺鳞癌的恶性表型相关。CRYAB可作为肺鳞癌病人预后的独立危险因素。

α-晶状体蛋白的结构和功能及基因学研究进展

α-晶状体蛋白包括αA-,αB-晶状体蛋白,是哺乳动物晶状体的主要蛋白,属于小热休克蛋白家族成员,具有分子伴侣功能,可以抑制变性蛋白质的凝聚和酶的失活。α-晶状体蛋白基因突变可导致白内障和肌病。本文对α-晶状体蛋白的分布、结构、功能以及基因学等方面综述。

α-晶状体蛋白对脂多糖诱导的视神经星形胶质细胞增生、活化及分泌功能的抑制作用

背景视神经损伤后星形胶质细胞的活化和增生引起的局部胶质瘢痕形成是神经细胞轴突难以再生的主要原因之一。研究表明，α-晶状体蛋白能促进视网膜神经节细胞（RGCs）轴突的再生，且部分再生的轴突能够穿过胶质瘢痕区，故推测α-晶状体蛋白可能抑制胶质瘢痕的形成，从而对视神经发挥保护作用。目的探讨α-晶状体蛋白对视神经星形胶质细胞的活化及其分泌功能的影响。方法分离SPF级3-5日龄Long Evans大鼠的视神经组织，体外培养和纯化视神经星形胶质细胞，采用免疫荧光技术检测细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达以鉴定培养的细胞。将培养的细胞分为3个组，正常对照组细胞用常规细胞培养液进行培养，脂多糖（LPS）刺激组在培养液中添加5μg／ml LPS，α-晶状体蛋白干预组在培养液中添加5μg／ml LPS和1×10^-4g／L α-晶状体蛋白，各组细胞均继续培养24h。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组视神经星形胶质细胞的增生情况（A值）；采用细胞免疫荧光法和Western blot法测定各组细胞中GFAP蛋白的表达；采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）质量浓度的变化。结果培养3-4代的细胞大小均匀，GFAP阳性细胞达95％以上。正常对照组、LPS刺激组和α-晶状体蛋白干预组细胞的A值分别为1．335±0．070、1．643±0．069和1．390±0．004，LPS刺激组A值明显高于正常对照组和α-晶状体蛋白干预组，差异均有统计学意义（t=3．315、3．681，均P〈0．05）。免疫荧光检测结果显示，LPS刺激组星形胶质细胞中的GFAP荧光明显强于正常对照组和α-晶状体蛋白干预组，且细胞胞体较正常对照组和α-晶状体蛋白干预组增大。Western blot法检测结果显示，LPS刺激组GFAP蛋白的相对表达量为0．851±0．076，高于正常对照组的0．786±0．091和α-晶状体蛋白干预组的0．569±0．049，其中α-晶状体蛋白干预组细胞中GFAP蛋白的相对表达量较LPS刺激组明显下降，差异有统计学意义（t=3．115，P〈0．01）。LPS刺激组TNF-α和IL-1β质量浓度明显高于正常对照组和α-晶状体蛋白干预组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论α-晶状体蛋白能抑制LPS诱导的视神经星形胶质细胞的增生、活化和炎性因子的释放。