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植物MicroRNA介导的基因调控在作物改良中的应用潜能 被引量:1
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作者 刘伟灿 周永刚 +5 位作者 王兴超 王法微 王南 董园园 李晓薇 李海燕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期6-15,共10页
植物Micro RNAs(mi RNAs)是长度约22个核苷酸的內源、单链、非编码、小分子RNA,通过降解或抑制靶m RNA介导转录后沉默。随着高通量测序技术及各种研究技术的进步,越来越多的micro RNA被测序和验证,为利用基因工程手段进行作物改良提供... 植物Micro RNAs(mi RNAs)是长度约22个核苷酸的內源、单链、非编码、小分子RNA,通过降解或抑制靶m RNA介导转录后沉默。随着高通量测序技术及各种研究技术的进步,越来越多的micro RNA被测序和验证,为利用基因工程手段进行作物改良提供了丰富的候选基因资源。综述了mi RNAs在生物胁迫、非生物胁迫和植物生长发育等方面的最新研究进展,同时分析了mi RNAs介导的基因调控在作物改良中的应用潜能,并介绍了几种基于mi RNA作用机制的植物基因工程改良作物的转基因新技术,如靶基因RNAi,人工mi RNAs(ami RNAs),Target Mimics(TM),超表达mi RNA-resistant tagerts;也讨论了基于mi RNA作用机制的转基因技术所面临的风险和挑战。 展开更多
关键词 MICRORNAS 靶基因 作物改良 RNAI amirnas Target MIMICS miRNA-resistant tagerts
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Cbfβ人工miRNA干扰载体构建及稳定细胞株系的获得与鉴定
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作者 黄科 胡宗凯 +4 位作者 喻胜鹏 傅景曙 李伟 董世武 谢肇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期682-686,共5页
目的构建Cbfβ基因干扰载体,获得Cbfβ人工miRNA干扰载体和稳定细胞株系,检测其对间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。方法设计特异性干扰小鼠Cbfβ基因的人工miRNA序列,构建Cbfβ干扰载体Blockit miRNA-cbfβ-miRNA1/miRNA2,将... 目的构建Cbfβ基因干扰载体,获得Cbfβ人工miRNA干扰载体和稳定细胞株系,检测其对间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。方法设计特异性干扰小鼠Cbfβ基因的人工miRNA序列,构建Cbfβ干扰载体Blockit miRNA-cbfβ-miRNA1/miRNA2,将其转入C3H10T1/2细胞获得稳定细胞株;用BMP-2诱导3 d后采用荧光定量PCR(qRTPCR)和Western印迹检测Cbfβ、Runx2和成骨标志基因ALP表达水平。结果成功构建成骨转录因子Cbfβ的干扰载体并获得了稳定细胞株系,成骨标志基因ALP和Cbfβ的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05),而Runx2下降不显著(P>0.05)。结论 miRNA-cbfβ-miRNA1/miRNA2载体可以抑制成骨转录因子Cbfβ的功能,进而降低成骨标志基因ALP蛋白和mRNA的表达,并获得可以影响成骨过程的稳定细胞株系。 展开更多
关键词 Cbfβ amirnas amir-Cbfβ 间充质干细胞 成骨分化
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甘蓝型油菜Bn19070的表达与同源基因At2g19070的amiRNAi研究 被引量:6
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作者 李振波 王琢玉 +4 位作者 刘学群 覃瑞 黄军艳 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期197-202,209,共7页
基于原芯片杂交结果,油菜杂合双显性雄性核不育系差异表达基因Bn19070与拟南芥At2g19070基因高度同源,在油菜可育株雄蕊中高量表达,不育株雄蕊中表达量极低。从雄性不育基因At2g19070入手,利用amiR-NAi(人工微RNA干扰)技术对其两个RNA... 基于原芯片杂交结果,油菜杂合双显性雄性核不育系差异表达基因Bn19070与拟南芥At2g19070基因高度同源,在油菜可育株雄蕊中高量表达,不育株雄蕊中表达量极低。从雄性不育基因At2g19070入手,利用amiR-NAi(人工微RNA干扰)技术对其两个RNA区段分别设计靶标,转化拟南芥。在多个转基因拟南芥植株和后代中普遍观察到小孢子数量减少、成熟花粉萎缩失去活力、不结实或者少结实的不育表型。两个靶标的干扰使转基因拟南芥出现了类似的表型,基因表达抑制率都在90%以上,干扰效果好,暗示amiRNAi技术在靶标选择上具有一定的灵活性。At2g19070基因的干扰对Bn19070的功能研究有借鉴作用。 展开更多
关键词 amiRNA干扰 雄性不育 At2g19070 RNA靶标 拟南芥
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大豆gma-miR1510a生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建 被引量:4
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作者 倪志勇 于月华 +1 位作者 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期239-244,共6页
Micro RNAs(mi RNAs)是最近发现的一类广泛存在的内生的小RNAs,在转录水平负调控基因的表达。本研究采用生物信息学方法分析gma-mi R1510a的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子数据库分析表明gma-mi R1510a启动... Micro RNAs(mi RNAs)是最近发现的一类广泛存在的内生的小RNAs,在转录水平负调控基因的表达。本研究采用生物信息学方法分析gma-mi R1510a的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子数据库分析表明gma-mi R1510a启动子具有一些参与非生物胁迫、植物激素、组织特异表达和光应答元件。PMRD软件预测获得9个gma-mi R1510a靶基因,属于抗病蛋白和ATP结合家族成员。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有ami R1510a前体的植物表达载体ami R1510a-p CAMBIA3301。 展开更多
关键词 大豆 gma-miR1510a amiRNA 启动子
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大豆gma-miR1514b生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建 被引量:2
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作者 倪志勇 于月华 +1 位作者 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期46-51,共6页
MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-... MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与光、逆境和植物激素应答相关的顺式作用元件。PMRD软件预测获得5个gma-miR1514b靶基因,分别与拟南芥CA2、NTL9和ANAC014基因同源。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiR1514b前体的植物表达载体amiR1514b-p CAMBIA3301。 展开更多
关键词 大豆 gma-miR1514b amiRNA 启动子
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抗柑橘衰退病毒基因工程研究进展 被引量:3
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作者 刘永清 周常勇 周彦 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期2848-2855,共8页
本文从选育和利用抗(耐)柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的柑橘品种和砧木、弱毒株交叉保护、转基因诱导的CTV抗性等方面综述抗柑橘衰退病毒基因工程研究进展,并就人工miRNA(artificalmicroRNA,amiRNA)介导抗性加以展望,旨在... 本文从选育和利用抗(耐)柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的柑橘品种和砧木、弱毒株交叉保护、转基因诱导的CTV抗性等方面综述抗柑橘衰退病毒基因工程研究进展,并就人工miRNA(artificalmicroRNA,amiRNA)介导抗性加以展望,旨在为更好地控制CTV危害提供借鉴。 展开更多
关键词 柑橘衰退病毒 柑橘固有抗性 病毒诱导基因沉默 转基因诱导抗病性 amiRNA介导抗性
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棉花FAD2-1基因的克隆及其ihpRNA和amiRNA干扰载体的构建 被引量:2
7
作者 赵立群 李仁 +4 位作者 李蔚 谭小力 杨佑明 华金平 郭仰东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期189-192,F0003,共5页
采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了... 采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihpRNA干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。 展开更多
关键词 棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因 ihpRNA amiRNA 高油酸
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Artificial miRNA调控甘蓝型油菜芥酸的研究 被引量:1
8
作者 王志伟 张自阳 +3 位作者 林丽婷 张金文 刘明久 乔岩 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期24-30,共7页
芥酸是重要的工业原料,主要来源是甘蓝型油菜种子,为调节甘蓝型油菜种子内芥酸含量,针对甘蓝型油菜芥酸合成过程中的关键酶基因Bnfad2设计特异性amiRNA,并构建种子特异表达载体,转化高芥酸甘蓝型油菜品种MY15和低芥酸甘蓝型油菜品种LEA... 芥酸是重要的工业原料,主要来源是甘蓝型油菜种子,为调节甘蓝型油菜种子内芥酸含量,针对甘蓝型油菜芥酸合成过程中的关键酶基因Bnfad2设计特异性amiRNA,并构建种子特异表达载体,转化高芥酸甘蓝型油菜品种MY15和低芥酸甘蓝型油菜品种LEA01,并对转化植株T_0种子脂肪酸进行分析。结果表明,转化的高芥酸甘蓝型油菜芥酸的增加最高达到5.12%,最低2.11%;而转化的低芥酸品种,最高仅为0.45%,最低只有0.16%,而且所有转化低芥酸材料的芥酸含量都小于1%;同时转化种子内油酸的含量得到了明显的提高,最低为4.99%,最高达到了10.71%,亚油酸降低的幅度十分明显,最大降幅达到17%。表明amiRNA技术可以通过影响脂肪酸合成过程中特定基因的表达,有效改变种子内脂肪酸的组成,从而改变其营养结构,提高营养价值,进一步提高油菜种子的附加值。本研究为运用amiRNA技术调节油菜脂肪酸组成和改变其营养结构提供了一定理论依据。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 芥酸 脂肪酸 amiRNA 调控
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amiRNA介导的兼抗PVX、PVY、PSTVd马铃薯植株获得及抗性鉴定 被引量:1
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作者 姜丽丽 牟芮 +2 位作者 刘尚武 张桂芝 金光辉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期195-202,共8页
为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和PSTVd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物... 为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和PSTVd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物双元表达载体pCAMBIA1300-221,构建植物表达载体p1300-221-pre-amiR-P25-HCPro-Virp1,经PCR及酶切验证,表达载体构建正确。农杆菌介导法将含目的基因质粒菌液侵染马铃薯品种费乌瑞它脱毒微型薯片,经再生、压力筛选,抗性植株分化及植株壮苗共获得转化株系15株,PCR检测结果表明,其中10株检测到与目的基因大小一致的片段(729 bp)。qRT-PCR结果显示,外源amiR-P25-HCPro-Virp1基因在10个转化植株中均有表达,相对表达量在7.68~21.37。对T0阳性转化植株的攻毒试验,将PVX、PVY和PSTVd病毒等量混合液摩擦接种至6~8叶期的植株叶片,20 d后观察发现,对照植株感病严重,出现植株矮小、叶片斑驳等症状,而转化植株未表现出感病症状,生长正常。RT-PCR进行病毒特异性检测,结果显示,转化植株中也未检测到病毒序列,这表明转amiR-P25-HCPro-Virp在转化植株中能稳定表达,转化植株能够兼抗PVX、PVY和PVSTd 3种病毒(类病毒)。得到了同时兼抗PVX、PVY和PVSTd转化植株,且抗性显著,为马铃薯抗病毒育种提供了新的遗传资源。 展开更多
关键词 马铃薯 amiRNA PVX PVY PSTVD
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海岛棉GbTCP5基因沉默和过量表达载体的构建及拟南芥转化 被引量:1
10
作者 王怡 范琪 +4 位作者 于月华 梁承娟 陈全家 曲延英 倪志勇 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期372-377,共6页
海岛棉具有优良的纤维品质,TCP蛋白参与细胞生长和增殖调控,本研究构建海岛棉GbTCP5基因沉默和过量表达植物表达载体。以GbTCP5基因pGEM-T Easy-GbTCP5质粒为模板进行PCR扩增,并将该基因构建到植物表达载体pCAMBIA3301中,利用冻融法转... 海岛棉具有优良的纤维品质,TCP蛋白参与细胞生长和增殖调控,本研究构建海岛棉GbTCP5基因沉默和过量表达植物表达载体。以GbTCP5基因pGEM-T Easy-GbTCP5质粒为模板进行PCR扩增,并将该基因构建到植物表达载体pCAMBIA3301中,利用冻融法转入农杆菌GV3101菌株,通过农杆菌浸染法转化拟南芥植株,初步证明已获得转化海岛棉GbTCP5基因的拟南芥。利用重叠PCR方法替换拟南芥AtMIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiRTCP5前体的植物表达载体amiRTCP5-pCAMBIA3301,为深入研究海岛棉GbTCP5基因的生物学功能奠定基础,为研究棉花纤维发育机制提供理论依据。 展开更多
关键词 海岛棉 植物表达载体 amiRNA 拟南芥
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amiRNA技术及其在食用作物遗传改良中的应用 被引量:1
11
作者 杨延 刘迪秋 +1 位作者 葛锋 陈朝银 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期388-392,397,共6页
内源miRNAs(microRNAs)是负调控真核生物基因表达的关键因子。amiRNAs(artificial microRNAs)是模拟内源miRNA的生成途径人工合成的miRNA,它能高效抑制靶基因的表达。运用amiRNA技术调控基因表达在调控精确性、效率、遗传稳定性及生物... 内源miRNAs(microRNAs)是负调控真核生物基因表达的关键因子。amiRNAs(artificial microRNAs)是模拟内源miRNA的生成途径人工合成的miRNA,它能高效抑制靶基因的表达。运用amiRNA技术调控基因表达在调控精确性、效率、遗传稳定性及生物安全性等多方面具有显著优势。本文就amiRNA技术的原理、优势以及该技术在食用作物品质改良及营养改善、雄性不育系培育、抗病毒和抗逆作物培育中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 amiRNA 食用作物 基因沉默 遗传改良 应用
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Cloning of Cotton Delta-12 Oleate Desaturase Gene FAD2-1 and Construction of Its ihpRNA and amiRNA Interference Vectors 被引量:1
12
作者 赵立群 李红岺 +3 位作者 李仁 李蔚 华金平 郭仰东 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第11期2281-2283,2286,共4页
Delta-12 oleate desaturase gene (FAD2-1) which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cott... Delta-12 oleate desaturase gene (FAD2-1) which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cotton delta-12 oleate desat- urase gene GhFAD2-1 containing an open reading frame of 1 158 bp was cloned for constructing RNAi vector. A 515 bp long specific fragment of this gene was se- lected for constructing ihpRNA vector under the control of a seed-specific promoter NAPIN, named pFGC1008-NAPIN-FAD2-1; meanwhile miRNA gene-silencing vector pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1 targeting GhFAD2-1 was also constructed. 展开更多
关键词 Cotton delta-12 oleate desaturase gene GhFAD2-1 ihpRNA interferencevector amiRNA interference vector High oleic acid contents
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番茄响应生物胁迫相关miRNA的研究进展 被引量:1
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作者 崔娟娟 栾雨时 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期533-538,共6页
mi RNA(micro RNA)是一类长约22 nt的非编码小RNA分子,参与植物生长发育和胁迫响应等过程。近年来,通过生物学实验和生物信息学预测两种方法,陆续发现了一些响应病毒、真菌和共生真菌胁迫的番茄mi RNA。这些mi RNA的研究以及ami RNA(art... mi RNA(micro RNA)是一类长约22 nt的非编码小RNA分子,参与植物生长发育和胁迫响应等过程。近年来,通过生物学实验和生物信息学预测两种方法,陆续发现了一些响应病毒、真菌和共生真菌胁迫的番茄mi RNA。这些mi RNA的研究以及ami RNA(artificial mi RNA)技术的应用,将为番茄乃至其他植物病害的防治提供新的契机。 展开更多
关键词 番茄 生物胁迫 MIRNA amiRNA
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拟南芥植物型PEPC基因人工小RNA表达载体的构建与遗传转化
14
作者 冯都华 王伏林 陈锦清 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第12期249-254,共6页
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是植物中具有多种生理功能的酶。为探索拟南芥中植物型PEPC基因对模式植物拟南芥脂肪酸含量以及抗逆性等方面的影响,笔者构建了同时敲除拟南芥Atppc1、Atppc2和Atppc3基因的人工小RNA(amiRNA)植物表达载体p... 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是植物中具有多种生理功能的酶。为探索拟南芥中植物型PEPC基因对模式植物拟南芥脂肪酸含量以及抗逆性等方面的影响,笔者构建了同时敲除拟南芥Atppc1、Atppc2和Atppc3基因的人工小RNA(amiRNA)植物表达载体pFGC-amiAtppc123,经根癌农杆菌EHA105介导,用花序浸染法转化拟南芥,成功获得转基因植株。RT-PCR半定量分析表明人工小RNA在转化植株中成功进行了超量表达。该试验为分析拟南芥脂肪酸含量以及抗逆性方面提供了基础材料。 展开更多
关键词 PEPC 拟南芥 amiRNA 脂肪酸含量 花序浸染
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P119驱动amiRNA介导的PL基因沉默对草莓果实硬度的影响 被引量:3
15
作者 周敏 蒋丹 +3 位作者 刘玥秀 王小蓉 汤浩茹 陈清 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期441-449,共9页
果胶裂解酶基因(Pectate lyase,PL)是调控果实软化的重要靶点。本研究测定了红颜草莓果实在发育过程中果胶裂解酶活性变化和硬度变化规律,并通过人工小干扰RNA(artificial micro-interfering RNA interference,amiRNA)技术,以拟南芥miR3... 果胶裂解酶基因(Pectate lyase,PL)是调控果实软化的重要靶点。本研究测定了红颜草莓果实在发育过程中果胶裂解酶活性变化和硬度变化规律,并通过人工小干扰RNA(artificial micro-interfering RNA interference,amiRNA)技术,以拟南芥miR390a前体序列作为沉默PL基因的骨架,在番茄果实特异性启动子P119的驱动下,通过农杆菌介导转入草莓果实中瞬时表达,通过RT-PCR分析草莓瞬时转染后PL基因的表达量,并检测了PL沉默对果实硬度的影响。结果表明,随着草莓果实发育的推进,果胶裂解酶活性呈逐渐上升趋势,与果实硬度呈负相关;构建了基于拟南芥miR390a为骨架的amiRNA靶向栽培草莓中的PL基因;在番茄果实特异性启动子P119驱动下,miRNA前体可以在草莓果实中瞬时表达;草莓果实中总PL基因表达量下降达34. 5%;基因沉默组果实硬度比对照组更高,且沉默对果实颜色发育进程无明显影响。该结果表明:果胶裂解酶主要在果实发育后期调节细胞壁的解离,采用amiRNA沉默PL基因可以延缓草莓果实软化进程。 展开更多
关键词 草莓 果胶裂解酶 amiRNA干扰 P119果实特异性启动子
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ptc-miR213的人工microRNA植物表达载体的构建及遗传转化 被引量:1
16
作者 谢丽华 蒋晶 +4 位作者 刘明英 乔桂荣 邱文敏 杨惠琴 卓仁英 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第1期29-33,共5页
ptc-miR213是在构建盐胁迫条件下青杨microRNA文库中发现的,预测其靶基因为MYB4、PP2C、蛋白激酶等,其中MYB家族与植物的耐盐性密切相关。为了探索ptc-miR213在植物盐碱胁迫应答方面的作用,实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami213,经根... ptc-miR213是在构建盐胁迫条件下青杨microRNA文库中发现的,预测其靶基因为MYB4、PP2C、蛋白激酶等,其中MYB家族与植物的耐盐性密切相关。为了探索ptc-miR213在植物盐碱胁迫应答方面的作用,实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami213,经根癌农杆菌EHA105介导转化拟南芥,成功获得转基因植株。RT-PCR分析表明amiR213在转基因拟南芥中能够超量表达。本研究为分析ptc-miR213及其靶基因参与植物盐碱胁迫应答奠定了基础。 展开更多
关键词 amiRNA 拟南芥 花序浸染 盐胁迫
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甘蓝型油菜雄性不育基因BnaX.MS1.a的克隆及其amiRNA载体的构建 被引量:1
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作者 刘振林 柯丽萍 +1 位作者 何海燕 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期552-557,共6页
根据拟南芥MS1基因已知保守序列设计特异性引物,分离克隆甘蓝型油菜中与拟南芥MS1基因同源的基因片段。应用PCR-Walking技术获得甘蓝型油菜核雄性不育基因BnaX.MS1.a,其全长3 424 bp。BnaX.MS1.a基因与拟南芥MS1基因全长序列同源性为60.... 根据拟南芥MS1基因已知保守序列设计特异性引物,分离克隆甘蓝型油菜中与拟南芥MS1基因同源的基因片段。应用PCR-Walking技术获得甘蓝型油菜核雄性不育基因BnaX.MS1.a,其全长3 424 bp。BnaX.MS1.a基因与拟南芥MS1基因全长序列同源性为60.3%,编码序列同源性为89.5%。根据基因序列比对结果推测开放阅读框长2 004 bp,编码667个氨基酸,分子量为76.5 kD,等电点为8.01。BnaX.MS1.a基因编码的氨基酸序列与已知拟南芥MS1基因编码的氨基酸序列同源性达93%。构建BnaX.MS1.a基因的amiRNA载体转化甘蓝型油菜,旨在研发核不育基因工程油菜。 展开更多
关键词 MS1 BnaX.MS1.a 甘蓝型油菜 amiRNA
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amiRNA抗病毒策略及其在植物抗病毒研究中的应用 被引量:1
18
作者 王雷 刘文轩 +1 位作者 姬峰 张振臣 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第7期5-10,共6页
人工小RNA(artificial microRNA,amiRNA)抗病毒策略是通过内源miRNA(microRNA)的作用机制人为沉默病毒靶基因,该策略稳定有效且能对多种病毒产生抗性。利用该策略,已经获得了多种抗病毒转基因植物。介绍了amiRNA抗病毒策略的机制、特点... 人工小RNA(artificial microRNA,amiRNA)抗病毒策略是通过内源miRNA(microRNA)的作用机制人为沉默病毒靶基因,该策略稳定有效且能对多种病毒产生抗性。利用该策略,已经获得了多种抗病毒转基因植物。介绍了amiRNA抗病毒策略的机制、特点及利用该策略防治植物病毒病害的研究进展。 展开更多
关键词 病毒病害 RNA干扰 amiRNA 抗病毒转基因植物
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串联序列amiRNA稳定转染后对cccDNA的影响
19
作者 蒲春文 王莉芬 +3 位作者 张勇 刘威 张影 丛树荣 《中国医药导报》 CAS 2011年第31期20-23,F0003,共5页
目的:观察优化设计的串联序列amiRNA(artificial microRNA)质粒表达载体长期干扰乙型肝炎病毒(HBV)后,对HBV复制源泉cccDNA的影响。方法:将前期构建的针对HBV RNA干扰效率高的单一序列及串联序列amiRNA质粒表达载体,瞬时转染入HepG2.2.1... 目的:观察优化设计的串联序列amiRNA(artificial microRNA)质粒表达载体长期干扰乙型肝炎病毒(HBV)后,对HBV复制源泉cccDNA的影响。方法:将前期构建的针对HBV RNA干扰效率高的单一序列及串联序列amiRNA质粒表达载体,瞬时转染入HepG2.2.15细胞,筛选出稳定转染细胞株,观察其对cccDNA的影响。结果:稳定转染单一序列amiRNA-HBV-4组相对于阴性对照质粒,对HBV cccDNA的抑制率为93.78%;串联序列amiRNA-HBV3-4组为99.65%,二者比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论:构建的针对HBV的新型amiRNA质粒表达载体可较明显地抑制HBV复制的根源cccDNA,串联序列组效果更佳,为进一步进行体内实验奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒(HBV) amiRNA 串联序列质粒表达载体 稳定转染 CCCDNA
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利用amiRNA技术沉默矮牵牛查尔酮合成酶基因 被引量:11
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作者 王会平 遇玲 +3 位作者 邹世慧 陈璟 郭余龙 李名扬 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2491-2498,共8页
转基因介导的基因沉默技术是进行基因功能分析和利用基因工程改良作物的重要手段。在植物中,amiRNA(artificial microRNA)是具有高度特异性的基因沉默技术。根据amiRNA设计的原则设计了用于沉默矮牵牛查尔酮合成酶(chalcone synthase,C... 转基因介导的基因沉默技术是进行基因功能分析和利用基因工程改良作物的重要手段。在植物中,amiRNA(artificial microRNA)是具有高度特异性的基因沉默技术。根据amiRNA设计的原则设计了用于沉默矮牵牛查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因的amiRNA:amiRchs1,用拟南芥miR319a的前体作为表达amiRchs1的骨架,重叠PCR扩增,将天然miR319a序列替换成amiRchs1,合成的DNA片段置于35S启动子之后,转化导入矮牵牛。转基因植株花色变淡,花冠出现弥散的白色斑点或不规则的白色斑块,严重的几乎呈纯白色,花色素苷含量明显下降,CHS的mRNA含量明显降低,表明拟南芥miR319a的前体作为表达amiRNA的骨架在矮牵牛中可行,且能有效沉默结构基因。 展开更多
关键词 矮牵牛 基因沉默 amiRNA 查尔酮合成酶基因
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