兔结膜重建中羊膜细胞外基质、保存羊膜及自体结膜的比较

目的:研究羊膜细胞外基质(amnion extracellular matrix,AECM)在兔结膜重建中的作用。方法:将36只新西兰白兔随机分为3组,均右眼实施手术,羊膜细胞外基质(AECM)组12眼,保存羊膜(frozen amnion membrane,FZAM)组12眼,自体结膜(autologous conjunctiva,AC)组12眼。术后对各组进行密切的跟踪观察,分别在术后1,2,4,8wk对术眼行印迹细胞学及病理学检查。结果:所有术眼均愈合良好,无瘢痕化及睑球粘连等并发症。术后2wkFZAM、AC组炎症细胞浸润高于AECM组,AECM溶解时间长于FZAM。杯状细胞分化方面:术后2wk,AECM组与AC组比较无统计学差异(P>0.05);FZAM组与AECM、AC组比较统计学差异显著(FZAM组vsAECM组P<0.01,FZAM组vsAC组P<0.01)。术后4,8wk,3组比较均有统计学差异(FZAM组vsAECM组P<0.05,FZAM组vsAC组P<0.05,AC组vsAECM组P<0.05)。结论:羊膜细胞外基质和保存羊膜作为结膜替代物有效,而羊膜细胞外基质比保存羊膜有更长的存活周期,自体结膜是修复结膜缺损最理想的替代物。

染色脱细胞羊膜在Ⅱ期义眼座置入并结膜囊成形术中的应用

目的:探讨Ⅱ期义眼座直接置入联合染色脱细胞羊膜移植治疗结膜囊狭窄临床应用的可行性及疗效。方法:对38例(38只眼)眼球摘除术后眼窝内陷、结膜囊狭窄患者行Ⅱ期羟基磷灰石义眼座置入,同时用染色脱细胞羊膜移植治疗结膜囊狭窄。结果:术后随访3月,38例(38只眼)无1例感染。2周后,移植的羊膜透明,缝合处结膜向羊膜上爬行;1个月后新生的结膜上皮完全覆盖移植区。无义眼座暴露及脱出,无羊膜溶解及排斥反应发生。术后均能安装义眼。结论:Ⅱ期义眼座直接置入联合染色脱细胞羊膜移植结膜囊成形术是一种取材简便,方法简单,疗效肯定的手术方法。

新鲜羊膜、冻干羊膜、羊膜细胞外基质的形态研究

目的 :从组织形态学角度观察、比较新鲜羊膜 (Freshamnioticmembrane ,FSAM )、冻干羊膜 (Frozenamnioticmembrane ,FZAM )、羊膜细胞外基质 (Amnioticextracellularmatrix ,AECM )的结构特点。方法 :采用目前国际公认的羊膜制备与保存方法 ,制备FSAM、FZAM、AECM ,分别经HE、PAS组织染色、透射电子显微镜、扫描电子显微镜检查 ,观察并比较它们的形态与结构特点。结果 :FSAM、FZAM在光镜和电镜下均与正常球结膜组织结构相近 ,两者形态上的主要差别表现在上皮细胞的结构变化上。而AECM结构较为独特 ,无细胞结构 ,其主要成分为胶原纤维、网状纤维和基质。结论 :从组织结构特点分析 ,FSAM、FZAM、AECM是目前较为理想的结膜替代材料并可有效地用于角、结膜表面重建 ;同时 ,AECM作为一种极为特殊的细胞外基质 ,有重要的研究与应用价值。

人羊膜细胞外基质与成纤维细胞体外培养的实验研究

目的 通过人羊膜细胞外基质 (HA ECM)与成纤维细胞体外培养 ,观察成纤维细胞在HA ECM上的生长特性 ,以及胶原原纤维产生情况 ,为使HA ECM成为皮肤组织工程化的载体打下基础。方法 将不同浓度的成纤维细胞种植于HA ECM上进行体外培养 ,通过倒置显微镜、光镜及透射电镜 ,观察细胞在HA ECM的生长、排列 ,以及细胞的粘附和胶原原纤维产生情况。结果 梭形的成纤维细胞在HA ECM上生长良好 ,呈放射状或平行排列 ;组织切片发现HA ECM上有较多梭形细胞附着 ,细胞排列紧密 ;电镜下见成纤维细胞胞膜基底部向HA ECM内伸出数个突起 ,细胞与羊膜基质粘附相当牢固 ,胞外有较多胶原原纤维堆积。结论 种植于HA ECM的成纤维细胞有一个最适宜的细胞浓度 (3 5× 10 6 个 /ml) ;HA ECM具有良好的支架和渗透作用 ,成纤维细胞在其上生长、粘附良好 ,胶原合成、分泌旺盛 ,HA

脱细胞羊膜在结膜囊成形术中的研究与应用

目的研究脱细胞羊膜组织补片在结膜囊成形术中的临床效果。方法对46例(46眼)羟基磷灰石义眼台植入术后结膜囊狭窄进行结膜囊成形术。随访观察6～18月,平均11月。结果 16例均获得良好效果。3月后组织补片呈正常结膜色泽外观,且稳定。无感染、坏死及排异等发生。配戴义眼片后患眼外形满意。结论采用脱细胞羊膜组织补片进行结膜囊成形术,取材方便、手术安全、疗效可靠。

声带细胞外基质干预和人羊膜上皮细胞移植后声带瘢痕修复再生的研究

目的 应用声带细胞外基质干预（胶原酶和透明质酸注射）和人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cells,hAEC）在声带瘢痕内的移植,探索其对声带瘢痕修复再生的意义.方法 对20只新西兰兔中的38侧声带行声带锐性损伤,形成声带瘢痕.分离培养实验用hAEC,慢病毒绿色荧光蛋白基因转染作标记.将hAEC移植入10侧瘢痕声带,即hAEC移植组;声带细胞外基质干预（注射胶原酶和透明质酸）10侧瘢痕声带,即基质干预组;hAEC移植同时细胞外基质干预10侧瘢痕声带,即复合组;瘢痕未处理8侧声带,即瘢痕组.2侧正常声带作为对照组.术后1和2个月时示踪观察hAEC在声带内的生长、分布及活性情况;术后1、2、3和6个月采用HE染色、Masson染色及免疫组织化学观察声带形态学变化及声带固有层胶原、纤维连接蛋白的分布及含量变化.结果 hAEC原代培养4d后呈铺路石样生长,移植入瘢痕声带后可在固有层内持续存活2个月;术后1个月和2个月免疫荧光显示角蛋白（上皮细胞标志性蛋白）荧光阳性.术后6个月光镜下观察及Masson染色半定量分析示瘢痕组较正常组胶原量明显增加,排列紊乱;hAEC移植组、基质干预组及复合组胶原量和排列较瘢痕组改善,hAEC移植组、基质干预组二者相似,复合组优于前两组,但尚未及正常;免疫组织化学半定量分析示瘢痕组较正常组纤维连接蛋白平均光密度明显增加,hAEC移植组、基质干预组及复合组的平均光密度介于瘢痕组和正常对照组之间,hAEC移植组与基质干预组相差不明显,复合组优于前两组.结论 声带细胞外基质干预和hAEC注射移植复合作用于兔瘢痕声带后,可更好地促进声带细胞外基质的分泌、合理分布及部分有序化排列,促进声带瘢痕修复再生.