RP-HPLC法测定呱氨托美丁及有关物质

建立了呱氨托美丁及有关物质的RP-HPLC检测方法.采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.015 mol/L的KH2PO4溶液(V(甲醇):V(乙腈):V(KH2PO4)＝30:30:40)(用体积分数8.5%的H3PO4水溶液调至pH 5.3)为流动相,检测波长313 nm,流速1.0 mL/min.呱氨托美丁在10～3000 μg/mL 范围内,峰面积与质量浓度呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率99.86%,RSD=0.82%.采用反相高效液相色谱法测定呱氨托美丁及有关物质,能有效控制呱氨托美丁的质量.

呱氨托美丁的合成及活性研究

目的合成呱氨托美丁 ,并验证其活性。方法以托美丁为起始原料 ,在强缩水剂N ,N 羰基二咪唑的作用下 ,先生成酰胺中间产物 ,再成酯合成呱氨托美丁 ;经药理学试验 ,对其抗炎活性、镇痛作用及解热活性进行了初步研究。结果合成了目标化合物 ,药理实验结果表明 :呱氨托美丁作用与托美丁类似 ,比吲哚美辛的解热镇痛作用强。结论所采用的合成路线可行 ,呱氨托美丁具有较强的解热镇痛作用。

HPLC法测定人血浆中呱氨托美丁活性代谢物托美丁和MED5的浓度

目的:建立高效液相色谱同时测定人血浆中呱氨托美丁活性代谢物托美丁和MED5的方法。方法:血浆样品用50%的高氯酸沉淀,内标法定量。采用依利特C_(18)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mmol·L^(-1)KH_2PO_4(46:54),稀磷酸调节缓冲盐pH至3.50,流速1 ml·min^(-1),紫外检测波长为313 nm。结果:托美丁和MED5分别在0.02～4.05、0.02～0.99μg·ml^(-1)内线性良好(r>0.999),最低检测浓度均为0.02μg·ml^(-1),2个化合物的绝对回收率均大于80%,日间和日内RSD皆小于10%。结论:本方法操作简单,灵敏准确,稳定性好,适用于呱氨托美丁临床药物监测和药动学等的研究。

HPLC测定呱安托美丁片的含量

目的建立测定呱安托美丁片含量的方法。方法采用HPLC法,Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-0.015 mol·L^-1KH2PO4溶液（30：30：40）（8.5%磷酸溶液调pH5.3）,检测波长313 nm,流速1.0 ml·min^-1。结果呱氨托美丁浓度10^3×103μg·ml^-1与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均回收率为100.02%,RSD=0.82%。结论所建方法准确、快捷、简便,不受辅料干扰,能有效地控制呱氨托美丁片的质量。

一氧化氮介导的呱氨托美汀镇痛作用机理

目的:探讨一氧化氮(nitric oxide,NO)介导的呱氨托美汀(Amtolmetin Guacyl,AMG)镇痛作用机理。方法:利用AMG对冰醋酸(AA)扭体小鼠的镇痛作用;测定其脊髓、脑和血液的NO2-,一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)含量。L-Arg,L-NAME对AMG在AA与福尔马林(FA)致痛小鼠的镇痛作用;测定L-Arg,L-NAME对AMG在AA扭体镇痛小鼠脊髓、脑和血液的NO2-含量。结果:在AMG对AA扭体致痛小鼠镇痛作用中,AMG大剂量(300 mg.kg-1)组与中剂量(150 mg.kg-1)组小鼠脊髓与脑NO2-与NOS含量和模型组比较显著降低(P<0.01;P<0.05)。AMG+L-Arg组和AMG组比较小鼠15min内扭体次数显著增多(P<0.05);而AMG+L-NAME组和AMG组比较小鼠15min内扭体次数显著下降(P<0.05)。L-Arg,L-NAME对AMG在AA扭体致痛小鼠镇痛,AMG(150 mg.kg-1)组小鼠脊髓与脑NO2-含量和模型组比较显著降低(P<0.05)。AMG和L-NAME可减少FA致痛小鼠第二时相累计舔足时间。结论L-Arg和L-NAME可能对AMG镇痛作用有一定影响,AMG可能通过抑制脊髓与脑NO生成发挥镇痛作用。

呱氨托美汀的镇痛作用及其部分作用机制研究

目的 探讨呱氨托美汀的镇痛作用及其作用机制。方法 利用小鼠福尔马林试验和冰醋酸扭体试验，观察AMG的镇痛效果。应用MDA、SOD、GSH-PX试剂盒，测定冰醋酸扭体试验小鼠血清MDA含量、SOD、GSH-PX活性，研究AMG镇痛作用的机制。结果 AMG（240，120，60mg·kg^-1）灌胃给药60min后对小鼠福尔马林致痛模型的Ⅱ相（15—30min）具有显著的镇痛作用；AMG（240，120，60mg·kg。）灌胃给药30min和60min后明显减少小鼠AA扭体次数，增加镇痛抑制率，对小鼠AA扭体致痛模型具有明显的镇痛作用，并且随剂量增加镇痛作用增强。AMG降低小鼠AA扭体致痛模型的血清MDA含量，增加其SOD活性。结论呱氨托美汀具有较强的镇痛作用，可能与其抑制氧自由基生成和抗氧化作用有关。

呱氨托美汀与牛血清白蛋白的相互作用

研究药物小分子呱氨托美汀与生物靶分子牛血清白蛋白的相互作用机制.应用荧光猝灭法,研究了不同温度和酸碱度之下二者的结合作用.Stern-Volmer方程计算结果表明,在弱酸、弱碱及中性条件下,呱氨托美汀均以静态猝灭的方式猝灭牛血清白蛋白的内源荧光;几种金属离子在中性环境下对2者的作用有微弱影响;呱氨托美汀小分子与生物靶分子牛血清白蛋白主要以静电作用方式相结合.

呱氨托美丁合成工艺的改进

以托美丁钠为起始原料,与氯甲酸异丁酯、甘氨酸反应生成中间体托美丁甘氨酰胺,再与氯甲酸异丁酯、愈创木酚反应制得呱氨托美丁,同时对其的精制方法进行了研究。结果显示:改进后的工艺反应条件温和,操作简单,提高了目标物的质量,总收率65%,具有较大的产业化生产优势。

呱氨托美丁片的制备工艺与质量控制研究

目的研究呱氨托美丁片的制备和质量控制方法。方法筛选最佳处方,以高效液相色谱法测定含量和有关物质,紫外分光光度法测定溶出度。结果确定了最佳处方和质量控制方法。结论处方及制备工艺科学,质量控制方法准确可行,专属性强。

呱氨托美丁及其代谢产物在大鼠体内药动学

目的:研究呱氨托美丁(MED-15)单剂量灌胃给药及静脉注射在SD大鼠体内的药动学。方法:12只大鼠随机分为2组,分别灌胃给药MED-15(100mg.kg-1)或静脉注射MED-15(8mg.kg-1),采用HPLC法测定给药后大鼠血浆内MED-15代谢产物托美丁-甘氨酰胺衍生物(MED-5)及托美丁的浓度,应用DAS2.0软件进行非房室模型拟合及参数计算。结果:血样中未检测到MED-15,只能检测到其代谢产物MED-5及托美丁。灌胃组大鼠托美丁的Cmax为(2.8±1.1)mg.L-1,tmax为(7.9±1.1)h,AUC为(20.2±7.0)mg.h.L-1,静脉注射组大鼠托美丁的Cmax为(17.0±1.2)mg.L-1,AUC为(59.9±4.2)mg.h.L-1。结论:原药MED-15在大鼠胃肠道内有较强的首过代谢,导致生物利用度低。

HPLC法测定大鼠血浆中呱氨托美丁及其代谢产物MED-5与托美丁的浓度

目的建立同时测定大鼠血浆中呱氨托美丁(MED-15)及其代谢产物MED-5与托美丁浓度的HPLC法。方法血浆样品用乙腈沉淀蛋白,采用HypersilODS C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm)进行分离,以甲醇-2%冰醋酸(60:40,V/V)为流动相,流速1.0mL·min^(-1);紫外检测波长313 nm。结果大鼠血浆中MED-15、MED-5和托美丁线性范围分别是0.050～5.6、0.042～5.4和0.039～5 mg·L^(-1)(r分别为0.995 1、0.995 7、0.999 0);定量下限分别为0.050、0.042和0.039mg·L^(-1);平均相对回收率分别是100.3%、99.4%和99.9%,平均绝对回收率分别88.9%、87.8%和88.7%;日内、日间精密度均<12%。血浆样品的稳定性符合要求。结论本研究所建立的大鼠血浆中MED-15、MED-5和托美丁浓度测定的HPLC方法灵敏、准确、精密、稳定,适用于大鼠体内MED-15的药动学研究。

呱氨托美汀及其代谢产物在大鼠体内的组织分布

目的:建立生物样本中测定呱氨托美汀(MED-15)及其代谢产物浓度的方法,考察MED-15在人工体液中的稳定性及在大鼠体内的组织分布。方法:制备人工胃液和人工肠液,考察MED-15在体液中的稳定性。取24只雄性SD大鼠,灌胃给药MED-15 100 mg·kg-1,分别于给药后1,3,7,24 h处死大鼠,迅速取出心脏、脑组织、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、胃、小肠和大肠匀浆,HPLC法检测各组织中MED-15、MED-5及托美汀的含量。结果:MED-15在人工胃液和肠液中的稳定时间>3 h。灌胃给予MED-15(100 mg·kg-1)后,MED-15仅在胃、大肠和小肠中可测得,并且肠道滞留时间长达24 h。代谢产物MED-5在大鼠体内多个组织均有分布,在胃、小肠、大肠和肝脏等组织中的浓度较高,7 h后在小肠和大肠中仍可检测到较高浓度的MED-5。MED-15活性代谢产物托美汀在肝、脾、肾等血流量丰富的组织中分布迅速而广泛,同时在这些组织中浓度较高。结论:呱氨托美汀可缓慢吸收入血,其在胃肠上皮细胞中滞留的现象也可能是其发挥作用时间较长的原因之一。

泮托拉唑对呱氨托美汀的药动学特征影响研究

目的:通过乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)特异性抑制剂泮托拉唑与呱氨托美汀(MED-15)联合用药,考察其对MED-15在大鼠体内药动学的影响。方法:12只SD大鼠随机分为MED-15单独给药组和MED-15联合泮托拉唑给药组。MED-15单独给药组大鼠灌胃给予MED-15 100 mg·kg-1,MED-15联合泮托拉唑给药组灌胃给予泮托拉唑(60 mg·kg-1)及MED-15(100 mg·kg-1)。采用HPLC法测定给药后大鼠血浆内MED-15代谢产物托美汀-甘氨酰胺衍生物(MED-5)及托美汀的浓度,应用DAS 2.0软件进行非房室模型拟合及参数计算。结果:SD大鼠联合给予泮托拉唑和MED-15后,体内MED-5与托美汀的血药浓度时间曲线显著升高。与MED-15单独用药组相比,MED-15联合泮托拉唑给药组托美汀的AUC0-t值增加2.7倍,tmax与MRT分别降低28%和37%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:泮托拉唑能够增加体内MED-15代谢产物MED-5的吸收程度,显著提高托美汀的生物利用度。