抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

目的制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白（IgY），为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础。方法制备十二指肠钩虫成虫粗抗原，经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次，每只鸡每次的免疫剂量为200ug，初次免疫后28d进行加强免疫，加强免疫间隔时间为10d。水稀释法提取卯黄中的IgY，盐析、透析法纯化IgY，BCA法测定蛋白含量，并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Westernblot分析。ELISA法动态检测抗体效价，观察抗体效价变化。结果免疫后55d的每个鸡蛋能提取40—55mg IgY，经SDS—PAGE和Western blot分析，纯化的IgY有2条主带，分子量分别是35ku和60ku，即IgY的轻链和重链。初次免疫后10d左右出现抗体，至免疫后50～55d为高峰，效价达到1：10000以上。IgV与人血清抗体均可识别30ku处钩虫抗原。结论十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体，为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础。