人血管生长因子基因片段的体外重组

以互为模板的ＰＣＲ合成技术及克隆技术体外重组人血管生长因子基因片段（ｈＡｎｇｆ）并获得ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｈＡｎｇｆ重组体。方法：设计目的基因ｈＡｎｇｆ的上、下游引物。二引物以１８ ｈｐ区段互补，二引物的５’端分别具有加入的或利用简并密码设计的酶切位点，以ＰＣＲ合成目的基因前体，经ＥｃｏＲＩ作用，获目的基因。以ｐＢｌｕｅｓｅｒｉｐｔ为克隆载体，目的基因插入该载体ＥｃｏＲＩ及ＥｃｏＲＶ之间。克隆后经Ｋｐｎｌ、Ｓｃａｌ及ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ作用，筛选并电泳定征。结果３以ＰＣＲ合成目的基因，并获ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｈＡｎｇｆ重组质粒。经克隆并定征，该重组体确含１３４ ｈｐ（含上游加入的酶切位点及起始密码子）的目的基因序列。结论：成功获得了 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｈＡｎｇｆ重组体，以作为进一步研究的基础。