槟榔籽提取物对血管紧张素转化酶(ACE)活性的抑制作用研究

以嫩果期槟榔籽为研究对象,采用75%乙醇浸提制得槟榔籽提取物(areca nut extract,ANE),再分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次对总提取物进行萃取,依次得到嫩果期槟榔籽75%乙醇提取物的石油醚部位(PE-ANE)、乙酸乙酯部位(EAC-ANE)、正丁醇部位(BU-ANE)、水部位(W-ANE)的萃取部分。通过体外抑制血管紧张素转化酶(ACE)活性抑制试验测定槟榔提取物各极性部位对高血压的抑制潜力;通过酶动力学实验分析ACE抑制活性最好的极性部位对ACE活性的抑制作用类型;测定不同极性部位蛋白质、总糖及多酚的总含量,并分析其与ACE半抑制浓度(IC50)之间的相关性;最后对4种不同极性部位萃取物中的多酚组分进行初步定量。结果表明:嫩果期槟榔籽提取物各极性部位均具有一定的ACE抑制活性,其中EAC-ANE的ACE抑制活性最好。酶动力学实验表明,EAC-ANE对ACE活性的抑制作用类型为竞争与非竞争的混合型抑制。相关性分析表明,各极性部位ACE的IC50值与多酚、总糖及蛋白质含量均呈显著负相关,且与多酚含量之间具有极强相关性(r=‒0.912)。在4个极性部位中定量了儿茶素、L-表儿茶素、原花青素B2、原儿茶酸、槲皮素等多种多酚组分,且EAC-ANE中的相关多酚组分含量最高。综上所述,槟榔提取物具有一定的降血压潜力,且乙酸乙酯萃取部位最好,多酚含量与各萃取部位的ACE抑制活性具有极强的相关性,可初步推断多酚是槟榔提取物中抑制ACE活性的重要物质。

棉籽蛋白ACE抑制肽的酶法制备及其体外稳定性研究

食源性血管紧张素转化酶(angiotensin-I-converting enzyme,ACE)抑制肽因安全、无副作用、易吸收等优点,对防治高血压、提高居民健康水平具有重要作用。利用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解棉籽蛋白制备ACE抑制肽,通过单因素实验优化水解条件,分离纯化水解物并鉴定其活性肽段组成,评价水解物的体外消化吸收稳定性。结果表明,棉籽蛋白经复合蛋白酶(1500 U/g)在pH值为8.0和55℃下水解5 h,蛋白回收率为39.8%,ACE抑制率可达93.7%。棉籽蛋白复合蛋白酶水解物经分离得到5个组分,其中组分4(F4)的ACE抑制活性最高(IC_(50)=220.1μg/mL)。从该组分中发现3条新型ACE抑制肽:VFNNNPQE、LLSQTPRY和VFPGCPET,其中LLSQTPRY的活性最高(IC_(50)=105.2μmol/L)。经人工胃肠液消化和Caco-2细胞单层膜吸收后,棉籽蛋白复合蛋白酶水解物仍具有一定ACE抑制活性,分别为53.8%和20.5%。研究结果表明,棉籽蛋白的复合蛋白酶水解物有望作为一种功能性食品配料,用于开发降压食品。

藜麦源ACE抑制糖肽制备、结构表征及体外稳定性研究

利用毛霉和米根霉混合发酵藜麦制备藜麦源血管紧张素转化酶(angiotensin-I converting enzyme,ACE)抑制糖肽。通过单因素实验和响应面试验优化发酵工艺条件,发酵液经真空浓缩、醇沉、葡聚糖凝胶G-15和反相高效液相色谱分离纯化,利用傅里叶红外光谱法判断官能团构成,β-消除法判断糖肽键链接方式,并分析温度、p H、金属离子以及体外模拟消化对活性的影响。结果表明:在料液比1:18 g/m L、毛霉与米根霉接种量比1:1、总接种量2.8%(φ)、发酵时间8.7 d时,得到ACE抑制率为64.22%±4.57%的藜麦发酵液,分离纯化后获得单一组分F_(3)b。利用傅里叶红外光谱检测,发现F_(3)b具有多肽和多糖的特征吸收,β-消除法确定其存在O-糖肽键。体外稳定性研究结果表明,温度(25~55°C)对F3b活性影响较小,100℃处理后ACE抑制率为25℃时的86.23%±3.47%;不同p H条件(pH2~12)对其活性无显著影响(P>0.05);在Zn2+和Fe3+浓度为4 mmol/L时,ACE抑制率分别为对照的109.91%±8.12%和117.43%±6.78%,增强其活性;相同浓度的K+和Ca2+减弱其活性,ACE抑制率分别为对照的78.94%±2.18%和85.31%±4.99%;模拟胃肠消化过程中,F3b活性略有降低,ACE抑制率为对照的70.00%±3.30%。该研究丰富了ACE抑制肽的种类,为藜麦资源高值化利用提供理论和数据技术参考。

泥鳅ACE抑制肽的体外活性研究

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽,研究该肽的稳定性。在加热温度≤80℃条件下加热2h,泥鳅降血压肽(<2.5ku)的ACE抑制活性没有显著变化。当2.0≤pH≤8.0时,泥鳅降血压肽的ACE抑制活性变化不显著。冷冻干燥优于喷雾干燥。Mg2+对泥鳅降压肽的降压活性起到促进作用,而Zn2+和Mn2+抑制了肽的降压活性。葡萄糖对降压肽活性的影响程度明显大于蔗糖,随着浓度的升高,其ACE抑制活性逐渐降低,褐变程度加深;氯化钠对降压活性的影响不明显。在模拟胃肠道消化体系中,胃蛋白酶的消化显著提高了产物的降压活性;胰酶的消化降低了产物的降压活性。泥鳅多肽属于底物型ACE抑制肽。

药食同源物协同血管紧张素转化酶抑制肽微胶囊的制备及其降压作用

研究药食同源复合物(枸杞∶山楂∶决明子=4∶1∶1,质量比,下同)协同血管紧张素转化酶(angiotensin convertingenzyme,ACE)抑制肽微胶囊对自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats,SHR)的降压作用。当ACE抑制肽与复合物的质量之比为1∶2时,ACE抑制率为78.19%,显著高于单一药食同源复合物(69.46%)及ACE抑制肽(71.48%)(P<0.05)。通过优化包埋工艺(固含物为10%、进风温度为160℃、芯壁比为1∶15、壁材为变性淀粉∶麦芽糊精=1∶4)制备药食同源物协同ACE抑制肽微胶囊包埋率为82.76%,在肠道中消化240 min后的释放率为81.4%,苦味显著降低(P<0.05)。动物实验结果发现药食同源物协同ACE抑制肽能够明显降低SHR的血压值,显著增加大鼠血浆中ACE2及血管紧张素1-7含量,降低血浆中ACE及血浆、心脏、肾脏及胸主动脉中血管紧张素II的含量(P<0.05),作用效果优于单一复合物及ACE抑制肽,证明药食同源物与ACE抑制肽存在协同效果,可通过调节肾素-血管紧张素系统降压,还可显著降低SHR心脏及胸主动脉纤维程度,从而改善由高血压引起的脏器损伤。

马氏珠母贝肉酶解产物ACE抑制活性的研究

利用胰酶、枯草杆菌中性蛋白酶,在50℃、pH为7.0～8.0,m(贝肉)∶V水=1∶3的条件下,对马氏珠母贝肉进行双酶水解4h制备得到酶解产物及残渣。利用Alcalase2.4L、胃蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶对残渣进行再次酶解。结果表明:残渣蛋白质含量按干基计达54.2%;Alcalase 2.4L、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶对残渣的酶解效果较好;残渣的木瓜蛋白酶酶解产物ACE抑制活性较强;马氏珠母贝肉酶解产物清除自由基活性较强的组分分子量为944u,残渣木瓜蛋白酶酶解产物清除自由基活性较强的组分分子质量在1300～259u。

三种描述符对食源性血管紧张素转化酶抑制二肽定量构效关系研究

为探究血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽结构与功能的关系,阐明食源性ACE抑制肽作用机理,该文收集最近报道的血管紧张素转化酶抑制二肽的氨基酸序列及其IC_(50)值,用Z-scales、VHSE和SVHEHS三种氨基酸描述符对ACE抑制二肽的结构进行表征,以氨基酸的疏水性质、立体性质以及电性性质参数作为自变量,ACE抑制二肽的lg(IC_(50))作为因变量,建立ACE抑制二肽的定量构效模型。结果显示基于Z-scales描述符建立的二肽定量构效模型R^(2)为0.8477,Q^(2)为0.8284,模型预测二肽Phe-Phe有较高的ACE抑制活性,预测IC_(50)为1.0499μmol/L,实测IC_(50)为(1.0414±0.0041)μmol/L,预测值与实测值误差为0.0085μmol/L。基于VHSE描述符构建的模型R^(2)为0.8568,Q^(2)为0.8052,模型预测二肽Asp-Trp有较高的ACE抑制能力,预测IC_(50)为1.2160μmol/L,实测IC_(50)为(1.1100±0.0053)μmol/L,误差为0.1060μmol/L。基于SVHEHS描述符构建的定量构效模型R^(2)为0.8581,Q^(2)为0.7453μmol/L,模型预测二肽Ala-Trp有较高的ACE抑制活性,预测IC_(50)为1.0323μmol/L,实测IC_(50)为(1.1290±0.0082)μmol/L,误差为0.0967μmol/L。3种氨基酸描述符均能较为合适地对ACE抑制二肽进行定量构分析。通过模型分析发现ACE抑制肽C端氨基酸残基疏水特性和立体特征与其活性关系更为密切,其氨基酸残基的疏水特征和立体特征越强,ACE抑制肽的活性越强。通过3种ACE抑制二肽与ACE蛋白(2X8 J)进行分子对接发现,3种ACE抑制肽均可与ACE蛋白进行结合。表明通过偏最小二乘法对Z-scales、VHSE、SVHEHS三种描述符对ACE抑制二肽构建定量构效关系模型是可行的。这将对ACE抑制肽的检测、预测和筛选具有积极的意义。

南极磷虾多肽的组成及其抗氧化与ACE抑制活性

以冷冻南极磷虾为原料,经碱溶酸沉法与酶解法联用制备南极磷虾多肽,采用紫外-可见光谱、红外光谱、凝胶色谱和氨基酸分析解析了多肽的组成和结构,并重点评价了多肽的抗氧化活性和血管紧张素I转化酶(angiotensin-I converting enzyme,ACE)抑制活性。结果表明:采用碱溶酸沉法与碱性蛋白酶酶解法联用制备南极磷虾多肽,水解度和肽得率可达到(17.83±3.73)%和(57.20±0.24)%。南极磷虾多肽的紫外最大特征吸收波长在273.5 nm;多肽在3390.84、2917.66、1648.36、1547.59 cm-1和1402.21 cm-1处具有红外特征吸收峰;多肽的分子量主要在189 Da^6500 Da范围内(98.93%),其中,451 Da^1450 Da占比最高(41.00±0.05)%;多肽的氨基酸组成理想,符合联合国粮农组织/世界卫生组织规定的标准。南极磷虾多肽具有显著的还原能力和良好的清除DPPH·、ABTS+自由基、·OH的能力,自由基清除IC50值分别为5.65、0.17、4.46 mg/mL;此外,多肽还具有良好的ACE抑制活性,当多肽浓度为0.5 mg/mL时,ACE抑制率为(55.91±2.63)%。

中国毛虾ACE抑制产物的酶法制备及其降低原发性高血压大鼠血压的效果(英文)

目的利用中国毛虾制备具有ACE抑制活性及抗高血压活性的酶解产物。方法采用体外试验法检测中国毛虾5种常用蛋白酶酶解产物的ACE抑制活性,筛选出一种蛋白酶作为酶法制备中国毛虾ACE抑制产物用酶,并对其作用条件进行正交优化,利用原发性高血压大鼠评估酶解产物的抗高血压效应。结果胃蛋白酶优化后的酶解条件是:pH 2.4,温度41℃,酶解时间3 h,酶/底物比(E/S)3%,底物浓度8%。以该条件制备的酶解产物对ACE的抑制活性为IC500.65 mg/ml,以1.0 g/kg体重的剂量喂食原发性高血压大鼠4 h后收缩压降低3 886 Pa(29mmHg)。结论中国毛虾的胃蛋白酶酶解产物具有较强的ACE抑制活性及抗高血压活性。

花生蛋白水解产物ACE抑制活性的研究

采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶水解花生蛋白,研究了水解过程中水解度的变化,并对水解产物的ACE抑制活性进行了探讨。得出三种酶对花生蛋白的水解作用:碱性蛋白酶>胰蛋白酶>中性蛋白酶。碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性明显高于胰蛋白酶和中性蛋白酶,水解产物的ACE抑制活性高达89.73%,中性蛋白酶水解产物ACE抑制率仅为27.24%。

ACE抑制肽的酶法制备及其构效关系的研究进展

高血压病是目前世界范围的主要慢性疾病之一,血管紧张素转换酶(ACE)对调节血压起着关键性作用,ACE抑制肽可以通过抑制ACE的活性起到降血压作用。因此,寻找天然、安全的食物来源的ACE抑制肽是目前生物活性肽领域的研究热点。综述了近年来在ACE抑制肽的酶解、分离纯化、氨基酸序列的鉴定,以及其构效关系等方面的最新研究结果,并展望了其发展前景。

腐乳ACE抑制功能的研究

对我国10种具有代表性的腐乳、2种日本腐乳和2种自制腐乳的ACE抑制活性进行分析,并研究了不同工艺生产腐乳过程中ACE抑制活性的变化。结果表明,腐乳试样具有ACE抑制活性,其IC50值在2.17mg/mL～3.98mg/mL。红腐乳的ACE抑制活性相比白腐乳较高,后酵40d达到最高值77.8%,白腐乳在后酵35d达到最高值71.6%。

虾头内源酶酶解虾肉产物的ACE抑制活性及其降低原发性高血压老鼠血压的效果(英文)

在pH7．35、温度57．2℃、水解时间4h、虾肉／虾头为1：1，底物浓度为20％（W／V）的条件下，利用虾头的内源酶酶解虾肉（南美白对虾），制备了具有血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性的酶解产物，其对ACE的抑制率为41．9％（2mg·mL^-1）。通过凝胶过滤层析测定出酶解产物的分子量分布较广，在7．4×10^4至29．7之间。分子量在2．7×10^3以下的凝胶层析组分占酶解产物氨基酸总量的83．1％。收集的高活性组分分子量在959～338之间，其IC50为0．32mg·mL^-1苯丙氨酸、疏水氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸）和芳香族氨基酸（脯氨酸、酪氨酸和色氨酸）占氨基酸总量的42．33％。体内试验的结果显示，南美白对虾的虾肉虾头内源酶酶解产物经灌喂原发性高血压老鼠后显示较强的降血压活性。

瑞士乳杆菌TUST005发酵乳ACE抑制活性的研究

通过正交试验确定瑞士乳杆菌TUST005制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)发酵乳的最佳工艺条件。脱脂复原乳浓度为13%,经灭菌后,接种3%(体积百分数)的发酵剂,在不同的温度和时间组合下培养,超滤发酵乳的乳清,测定滤液的ACE抑制活性。42℃,6h发酵乳样品ACE抑制活性最高,为35.71%。4℃下后发酵3d的抑制活性最佳,为45.91%。

高效液相色谱测定ACE抑制率方法改进的研究

本文是在原有的高效液相色谱测血管紧张素转化酶(ACE)抑制率方法的基础上进行改进,用于测定马氏珍珠贝蛋白酶解液的ACE抑制率。改进的方法消除了紫外228 nm时样品本身在马尿酸(HA)保留时间处的吸收峰的影响。对于本身在HA保留时间处有吸收峰(以下称干扰峰)的样品而言,明显提高了测定精确度。本文研究了酶解液干扰峰面积随酶解时间的变化趋势,发现干扰峰面积随酶解时间增加而减小。对于自制酶酶解液,在酶解24 h后,其干扰峰面积减小至零。比较了马尿酰-组氨酰-亮氨酸(HHL)和ACE加入不同顺序对结果的影响,发现采用先加HHL的方法得到的ACE抑制率全部高于采用先加ACE的方法。因此,在在测定过程中,应由始至终地采用同一加入顺序,数据才具有可比性。

不同厂家豆豉理化指标及降血压ACE抑制活性的测定与评价

对3个厂家(Y1,Y2,Y3)生产的永川豆豉的理化指标、水提物血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性等指标进行测定与评价,分别用直接干燥法、灼烧重量法、半微量凯氏定氮法、索氏抽提法对其水分、灰分、总蛋白、脂肪等营养指标进行测定,还原糖和总糖百分比通过DNS比色法测定,褐变度和ACE抑制活性分别采用分光光度法和HPLC法测定.结果显示,样品Y2的ACE抑制率和脂肪百分比均最高,分别为83.74%,12.92%;Y1中蛋白质百分比和褐变程度最高,其余指标为Y3最高,说明不同厂家生产的豆豉产品,其营养、感官及功能活性等指标均存在一定差异,工艺过程对豆豉相关品质的影响需要进一步研究.

葵花籽粕ACE抑制肽分离纯化及其性质研究

以葵花籽粕血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽为原料,采用DA201-C大孔吸附树脂对其进行分离纯化,并对纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽稳定性和活性进行了分析。结果表明:葵花籽粕ACE抑制肽最优纯化工艺为乙醇浓度70%、上样p H 5、上样流速2 BV/h、洗脱流速2 BV/h,在此条件下,得率为93.26%,纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽的抑制率为92.23%±0.48%。葵花籽粕ACE抑制肽对热和金属离子均具有良好的稳定性,模拟体内消化实验显示其活性不受胃肠酶的影响。

基于不同建模方法的ACE抑制肽QSAR比较研究

以自组建的血管紧张素转化酶(Angiotensin I-converting enzyme)抑制肽库为研究对象,采用氨基酸描述符SVHEHS(Scores vector of hydrophobic,electronic,hydrogen bonds and steric properties)对各肽样本进行结构表征后,进行自交叉协方差(Auto cross covariances,ACC)处理,并分别利用多元线性回归(Multiple linear regression,MLR)、偏最小二乘(Partial least square regression,PLS)、人工神经网络(Artificial neural networks,ANN)3种建模方法进行ACE抑制肽QSAR建模。结果显示,所得MLR、PLS与ANN模型的相关系数(Correlation coefficient,R2)分别为0.744、0.862、0.958,留一交叉验证相关系数(Leave-one-out cross-validated correlation coefficient,Q2LOO)分别为0.532、0.829、0.948,外部验证复相关系数(External validated correlation coefficient,Q2ext)分别为0.567、0.632、0.634。因此,SVHEHS结合上述3种建模方法均适用于ACE抑制肽的QSAR研究,其中ANN的建模效果最优。

乳清蛋白酶解制备的生物活性肽的研究进展

乳清蛋白中含有抗氧化肽、血管紧张素转换酶(angiote nsin converting enzyme,ACE)抑制肽、二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)抑制肽等多种生物活性肽(bioactive peptides,BAPs),具降血压、降血糖、降血脂等多种功能,有助于人类神经、胃肠、心血管和免疫系统发育,应用前景广阔。BAPs主要由酪蛋白和乳清蛋白经酶促水解、微生物发酵或化学试剂获取。鉴于此,本文概述乳清蛋白的组成及功能,并对国内外有关乳清蛋白酶解制备的BAPs的研究进展进行重点论述,以期为乳清蛋白的高效利用以及相关功能性乳制品的开发提供参考。

酪蛋白源ACE抑制肽的精制

采用离子交换树脂对酪蛋白源ACE抑制肽进行脱盐处理,结果表明,以10倍柱体积/h流速,经阴阳离子交换树脂后脱盐率达80%左右,氮回收率为83%,脱盐处理前后基本上对其ACE抑制活性和氨基酸含量没有影响。